用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒及其应用

本发明涉及生物医药，具体涉及一种用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒及其应用。

背景技术：

1、扩张型心肌病(dcm)是一种原因未明的原发性心肌疾病。此病的特征为左或右新室或双侧心室扩大，并伴有心室收缩功能减退，伴或不伴充血性心里衰竭；室性或房性心律失常多见，病情呈进行性加重，死亡可发生于疾病的任何阶段。dcm的发病人群很广，发病率约为1/250-1/2500，全世界每年约10万人中就有7例新发dcm患者。dcm危害也十分严重，其是导致心脏移植的首要原因，也是导致心力衰竭的前三位原因，而且dcm预后很差，10年生存率仅为40％左右。

2、近些年来，诸多文献报道了myh6基因(编码α-mhc蛋白)表达量的改变与dcm息息相关。研究表明，myh6基因在dcm患者的左室或右室中明显表达降低。在蛋白水平上，发现心力衰竭患者α-mhc蛋白表达量显著降低或消失。不仅是dcm或者心力衰竭患者中有此类现象，在dcm或者心力衰竭小鼠动物模型中，同样伴随着myh6基因表达量的降低。因此，增加或者恢复myh6基因的表达量对扩张型心肌病的预后是否有帮助值得我们的探究。

3、腺相关病毒(aav)是一种无包膜的线性单链dna病毒，是基因传递和表达的重要工具，具有宿主范围广、安全性高、免疫原性低等优势，是一类新型安全载体。不同血清型的aav因识别和结合的细胞表面受体不同，具有不同的组织特异性，因为可以实现组织特异性的基因递送，逐渐成为一种理想的基因治疗载体。aav携带相关基因的编码序列已经成功的实现了在体内对病人或者动物模型的相关基因的代替治疗，并且已经有部分产品被cde受理，批准进入临床试验，例如纽福斯生物申报的nr082眼用注射液用于治疗遗传性视神经病变，诺华生物申报的关于ova101注射液用于治疗脊髓性肌萎缩症。

4、然而目前在扩张型心肌病领域aav携带相关基因的代替治疗应用的相关研究鲜有报道，基于此，本发明旨在构建一种aav病毒携带crispr/dcas9体系过表达myh6基因载体，研究该病毒载体是否对于扩张型心肌病具有治疗作用，为扩张型心肌病的治疗提供新的思路。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒及其应用。

3、(二)技术方案

4、为实现以上目的，首先，本发明提供了一种用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒，所述腺相关病毒为表达α-mhc蛋白的腺相关病毒，所述α-mhc蛋白的氨基酸序列如seqid no.1所示。

5、进一步地，所述腺相关病毒含有靶向叙利亚金黄仓鼠myh6基因启动子，所述启动子包含sg-rna1和sg-rna2，其中sg-rna1的序列如seq id no.2所示，sg-rna2的序列如seqid no.3所示。

6、本发明还提供了所述重组腺相关病毒在治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病中的应用。

7、进一步地，所述重组腺相关病毒通过过表达myh6基因以实现治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病的目的。

8、本发明还提供了所述重组腺相关病毒在制备治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病药物中的应用。所述药物包含有所述重组腺相关病毒，所述药物为医学上可接受的剂型，包括但不限于胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射液、口服液。

9、(三)有益效果

10、本发明提供了一种用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒的构建、包装及应用。本发明提供的重组腺相关病毒aav-myh6能够显著增加myh6基因(即α-mhc蛋白)的表达量。本发明首先说明了myh6基因半敲除(loh)会引起仓鼠扩张型心肌病，myh6 loh仓鼠经过本发明提供的重组腺相关病毒aav-myh6处理后能够显著升高lvef和fs，显著降低lvid和lvvol等心脏彩超指标，能够明显降低心肌纤维化沉积和心肌细胞肥大的病理特征，能够显著降低心衰标志物anp、bnp的表达量。本发明提供的重组腺相关病毒aav-myh6通过增加myh6基因的表达量以实现对扩张型心肌病的治疗作用，为扩张型心肌病的治疗提供了新的方向。

技术特征：

1.一种重组腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒为表达α-mhc蛋白的腺相关病毒，所述α-mhc蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求2所述的一种重组腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒含有靶向叙利亚金黄仓鼠myh6基因启动子的特异性sg-rna序列，所述sg-rna包含sg-rna1和gd-rna2，其中sg-rna1的序列如seq id no.2所示，sg-rna2的序列如seq id no.3所示。

3.如权利要求1-2任一项所述的重组腺相关病毒在治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病中的应用。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述重组腺相关病毒通过过表达myh6基因以实现治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病的目的。

5.如权利要求1-2任一项所述重组腺相关病毒在制备治疗和/或预防和/或缓解和/或改善扩张型心肌病药物中的应用，其特征在于，所述药物包含有权利要求1-3任一项所述重组腺相关病毒，所述药物为医学上可接受的剂型，包括但不限于胶囊剂、片剂、颗粒剂、注射液、口服液。

技术总结本发明提供一种用于防治扩张型心肌病的重组腺相关病毒及其应用，涉及生物医药技术领域。所述腺相关病毒为过表达α‑MHC蛋白的腺相关病毒，所述腺相关病毒含有所述α‑MHC蛋白的编码基因MYH6基因的sg‑RNA序列。本发明提供的重组腺相关病毒AAV‑MYH6能够显著增加MYH6基因(即α‑MHC蛋白)的表达量。本发明首先说明了MYH6基因半敲除(LOH)会引起仓鼠扩张型心肌病，MYH6LOH仓鼠经过本发明提供的重组腺相关病毒AAV‑MYH6处理后能够显著升高LVEF和FS，显著降低LVID和LV Vol等心脏彩超指标，能够明显降低心肌纤维化沉积和心肌细胞肥大的病理特征，能够显著降低心衰标志物ANP、BNP的表达量。本发明提供的重组腺相关病毒AAV‑MYH6通过增加MYH6基因的表达量以实现对扩张型心肌病的治疗作用，为扩张型心肌病的治疗提供了新的方向。技术研发人员：董建增,彭莹,苗晋鑫,孙莉萍,赵晓燕,王尧河受保护的技术使用者：郑州大学第一附属医院技术研发日：技术公布日：2024/9/9