一种骨髓异常增生综合症小鼠模型及其构建方法和应用

本发明属于基因工程领域，具体地，本发明涉及一种骨髓异常增生综合症小鼠模型及其构建方法和应用。

背景技术：

1、骨髓异常增生综合症(myelodysplastic syndromes)是一种是异质性造血疾病，具有显著的临床和生物学特征，包括外周血细胞减少、形态学发育不良、无效的克隆造血，以及中后期具有转变为急性髓系白血病的风险。大约50-60％的mds患者被检测到染色体异常，包括染色体5q(5q-综合症)和7q，8三体性和其他复杂核型。abin1的位于5q-综合症骨髓异常综合症的病人中高概率易位的染色体区域，abin1对于小鼠的幼年时期和成年时期的造血能力至关重要，敲除abin1的小鼠在不同遗传背景下皆发生了贫血。abin1缺失的小鼠在胚胎期死亡并伴随着肝细胞凋亡、贫血和低血红蛋白血症。在另一个遗传背景中的abin1敲除小鼠，小鼠虽然没有胚胎致死但是它的血红蛋白含量减少。这暗示了abin1与骨髓造血的密切关系。

2、目前的研究表明abin1通过影响traf3的泛素链，进而调控i型ifns生产合成。然而abin1在骨髓异常增生综合症的作用尚未阐明。

3、因此，本领域迫切需要开发一种骨髓异常增生综合症动物模型。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种骨髓异常增生综合症动物模型。

2、本发明的另一目的在于提供一种快速发病的骨髓异常增生综合症的小鼠模型。

3、本发明第一方面提供了一种非人哺乳动物的骨髓异常增生综合症动物模型的制备方法，所述方法包括以下步骤：

4、(a)提供非人哺乳动物的细胞，对所述细胞中的abin1基因进行点突变，从而得到abin1基因点突变的细胞；

5、(b)利用步骤(a)中得到的abin1基因点突变的细胞，制备具有abin1基因点突变的动物模型。

6、在另一优选例中，在所述的动物模型中，abin1基因点突变是纯合型。

7、在另一优选例中，所述骨髓异常增生综合症为骨髓造血增生综合症。

8、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1基因(登录号为57783)的第1434位的核苷酸g突变为c。

9、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为选自下组的一种或多种氨基酸所形成的点突变：his(h)、glu(e)。

10、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为h。

11、另一优选例中，所述细胞包括体细胞、生殖细胞和/或胚胎干细胞。

12、另一优选例中，所述细胞选自人、和/或非人哺乳动物的细胞。

13、另一优选例中，所述胚胎干细胞还包括少于14天的胚胎、和/或受精卵。

14、另一优选例中，所述细胞选自人或非人哺乳动物，较佳地，包括啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括小鼠、大鼠、兔和/或猴、黑猩猩。

15、另一优选例中，所述细胞为人或非人哺乳动物的受精卵。

16、在另一优选例中，所述abin1蛋白来源于人或非人哺乳动物。

17、在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括小鼠、大鼠、兔、猴。

18、在另一优选例中，在步骤(a)中，将含有碱基编辑器(如胞嘧啶碱基编辑器)的编码序列和grna的载体注射入所述细胞，从而对所述细胞中的内源abin1基因进行定点突变。

19、在另一优选例中，所述步骤(b)中得到的非人哺乳动物模型中，与野生型对照动物相比，具有以下一个或或多个特征：

20、(a)表现出了贫血和血小板生长异常症状伴随代偿造血，中后期形成了骨髓衰竭的表型；

21、(b)骨髓异常增生症状显著；

22、(c)血小板数量减少和外周代偿造血；

23、(d)i型干扰素、抑制病毒增值和负调控细胞周期的信号通路高表达。

24、本发明第二方面提供了一种本发明第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型的用途，将该模型被用作研究骨髓异常增生综合症的动物模型。

25、本发明第三方面提供了一种本发明第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型的用途，将该模型被用于筛选或鉴定可减轻或治疗骨髓异常增生综合症的物质(治疗剂)。

26、本发明第四方面提供了一种筛选或鉴定治疗或缓解骨髓异常增生综合症的潜在治疗剂的方法，包括以下步骤：

27、(a)在测试组中，在测试化合物的存在下，将测试化合物施用于权利要求1所述方法制备的非人哺乳动物模型，对测试组的所述动物模型的骨髓异常增生综合症的指标进行分析；并且在不施用所述测试化合物且其他条件相同的对照组中，对对照组的所述动物模型的骨髓异常增生综合症的指标进行分析；

28、(b)对测试组和对照组动物模型的骨髓异常增生综合症的指标进行比较，其中，与对照组相比，如果施用了测试化合物的动物模型中骨髓异常增生综合症的指标得到改善，则表明该测试化合物可作为骨髓异常增生综合症的潜在治疗剂。

29、在另一优选例中，所述指标包括：外周血红细胞数量、血小板数量和平均体积、以及血红蛋白浓度。

30、在另一优选例中，所述指标得到改善包括：外周血红细胞数量增加、血红蛋白浓度提高、血小板数量增加、以及血小板平均体积降低。

31、在另一优选例中，所述的方法是非诊断性和非治疗性的。

32、在另一优选例中，所述方法包括步骤(c)，将步骤(b)筛选或鉴定的潜在治疗剂施用于本发明第一方面所述方法制备的非人哺乳动物模型，从而测定其对所述动物模型的骨髓异常增生综合症的指标的影响。

33、在另一优选例中，所述改善是在统计学上具有显著性意义的改善。

34、本发明第五方面提供了一种非人哺乳动物模型，用本发明第一方面所述方法制备。

35、在另一优选例中，对于abin1基因点突变而言，所述的非人哺乳动物模型是纯合型的。

36、本发明第六方面提供了一种分离的细胞，所述细胞中的abin1基因发生点突变。

37、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1基因(登录号为57783)的第1434位的核苷酸g突变为c。

38、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为选自下组的一种或多种氨基酸所形成的点突变：his(h)、glu(e)。

39、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为h。

40、另一优选例中，所述细胞包括体细胞、生殖细胞和/或胚胎干细胞。

41、另一优选例中，所述细胞选自人、和/或非人哺乳动物的细胞。

42、另一优选例中，所述胚胎干细胞还包括少于14天的胚胎、和/或受精卵。

43、另一优选例中，所述细胞选自人或非人哺乳动物，较佳地，包括啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括小鼠、大鼠、兔和/或猴、黑猩猩。

44、另一优选例中，所述细胞为人或非人哺乳动物的受精卵。

45、本发明第七方面提供了一种细胞的用途，所述细胞中的abin1基因发生点突变，用于制备构建非人哺乳动物的骨髓异常增生综合症动物模型的生物制剂。

46、在另一优选例中，所述点突变为纯合型。在另一优选例中，所述生物制剂为液态制剂。

47、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1基因(登录号为57783)的第1434位的核苷酸g突变为c。

48、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为选自下组的一种或多种氨基酸所形成的点突变：his(h)、glu(e)。

49、在另一优选例中，所述的abin1基因点突变包括：将abin1蛋白(登录号为np_001186204)的第478位的氨基酸q突变为h。

50、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。