一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒与流程

本发明涉及生物试剂抽提辅助工具，具体涉及一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒。

背景技术：

1、为了节约时间、方便使用，越来越多的实验步骤与检测方法被开发为试剂盒，但是传统的试剂盒为简单的单层包装盒，内部空间为封闭的单一结构，所有内容物被叠放于盒内；细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒是用于从细胞中提取膜蛋白和细胞浆蛋白的试剂盒；这些试剂盒通常包含一系列化学和生物学试剂，可以破坏细胞膜、溶解脂质，并将膜蛋白和细胞浆蛋白从细胞中释放出来；在使用过程中，技术人员很难准确迅速地获得所需组分，给实际操作带来不便，而且在产品运输过程中，里面各种组分容易出现相互碰撞而造成损坏，对运输条件要求较高；从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白，操作过程复杂，因此，亟需提供一种相关的试剂盒。

2、在公开号为：cn206127178u的一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，包括盒体、铰链、盒盖、固定座、第一孔槽、装膜蛋白抽提试剂a的试管、标签、第二孔槽、装膜蛋白抽提试剂b的试管和说明书安放槽，盒盖通过铰链连接盒体，盒体的底部设有固定座，固定座的顶部设有第一孔槽，第一孔槽的内部设置有装膜蛋白抽提试剂a的试管，第一孔槽的一侧设有第二孔槽，第二孔槽的内部设有装膜蛋白抽提试剂b的试管，第二孔槽的一侧设有说明书安放槽。装膜蛋白抽提试剂a的试管和装膜蛋白抽提试剂b的试管的顶端均粘贴有对应的标签，装膜蛋白抽提试剂a的试管和装膜蛋白抽提试剂b的试管的壳体上均设有刻度。

3、为了解决细胞蛋白抽提操作复杂的问题，现有技术是采用优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白的方式进行处理，但是还会出现在实际使用过程中当提取的细胞蛋白质需要放置存放时缺乏稳定试管的结构容易造成试剂存放不妥导致倾洒的情况，进而导致降低试剂盒的实用性和存放的有效性的问题。

技术实现思路

1、本发明提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、s1、细胞收集与预处理

3、步骤s1.1：收集细胞，培养至约2000～5000万细胞数量。此步骤确保了细胞数量的充足，为后续操作提供了足够的样本。

4、步骤s1.2：采用磷酸盐缓冲液(pbs)对细胞进行洗涤，以去除细胞表面的杂质和残留培养基。

5、步骤s1.3：使用细胞刮子轻轻刮下细胞，或用含有edta但不含胰酶的细胞消化液处理细胞，使细胞不再贴壁过紧。edta能够螯合细胞表面的钙离子，降低细胞间的粘附力，便于细胞的分离。

6、步骤s1.4：用移液器轻轻吹打下细胞，使细胞从培养皿或培养瓶中完全脱落，形成细胞悬液。

7、s2、细胞裂解与沉淀

8、步骤s2.1：在4℃条件下，将细胞沉淀物重新悬浮于15ml含有冰浴预冷的pbs和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液中。冰浴预冷的pbs有助于保持细胞的完整性，蛋白酶抑制剂则能有效抑制裂解过程中蛋白酶的活性，防止蛋白的降解。

9、s3、核周质溶液的制备

10、步骤s3.1：将裂解缓冲液加入到含有细胞的离心管中，并充分混合，确保裂解缓冲液与细胞充分接触。

11、步骤s3.2：在4℃条件下离心15分钟，离心后的液体即为裂解后的核周质溶液。离心过程有助于将细胞核和未裂解的细胞沉淀下来，而上清液则主要含有核周质成分。

12、s4、胞质蛋白的提取

13、步骤s4.1：将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的含β-巯基乙醇的溶液。β-巯基乙醇能够还原蛋白质中的二硫键，有助于蛋白质的溶解和稳定。

14、步骤s4.2：充分混合后，将混合液煮沸5分钟。此步骤有助于进一步破坏细胞结构，释放胞质蛋白，并使蛋白变性，便于后续的分离纯化。

15、s5、胞质蛋白的分离与储存

16、步骤s5.1：在4℃条件下，以1000rpm的转速离心15分钟，取上清液。离心过程能够去除不溶性的杂质和颗粒，使上清液中的蛋白更加纯净。

17、步骤s5.2：上清液中的主要成分为胞质蛋白。为了保持蛋白的稳定性和活性，使用专用的试剂盒与相应的试管对细胞蛋白进行储存。试剂盒中的保存液能够提供良好的保存环境，防止蛋白的降解和失活。

18、第二方面，一种试剂盒，包括试剂盒外壳和盒盖，所述试剂盒外壳的内表面固定安装有隔板，所述隔板的下端内部设置有存放抽拉屉，所述试剂盒外壳的内部设置有存放机构，所述试剂盒外壳与盒盖的两侧外表面分别设置有盖设机构；

19、所述盖设机构包括有固定单元和弹性插接单元，所述弹性插接单元与固定单元之间活动连接；

20、所述存放机构包括有置放单元和缓冲夹紧单元，所述缓冲夹紧单元设置在置放单元的内侧。

21、本发明技术方案的进一步改进在于：所述固定单元包括有固定板和固定槽座，所述固定板固定安装在盒盖的两侧外表面，所述固定板的下端固定连接有固定槽框，且所述固定槽框的内壁上开设有辅助限位的限位孔，所述固定槽座固定安装在试剂盒外壳的上侧外表面，固定槽框以固定板的中轴线镜像分布设置。

22、本发明技术方案的进一步改进在于：所述弹性插接单元包括有中心块，所述中心块固定安装在固定槽座的中心内表面，所述中心块的两侧外表面固定连接有复位弹簧，且所述复位弹簧的另一端固定安装有滑动块，所述滑动块的外表面与固定槽座上端内壁预设的滑动槽内壁滑动连接，中心块固定安装在固定槽座的中心轴线上，且复位弹簧与滑动块分别以固定槽框为中心线镜像分布。

23、本发明技术方案的进一步改进在于：所述滑动块的外侧表面固定安装有拉板，且所述拉板的外表面分别与预设在固定槽座前端内壁的条形槽内壁滑动连接，所述滑动块远离复位弹簧的一侧外表面固定安装有插接条，所述插接条的外表面与限位孔的内壁活动插接，插接条远离滑动块的一端设置为直角三角结构，用于与固定槽框设置限位孔之间的相互插接。

24、本发明技术方案的进一步改进在于：所述置放单元包括有细胞试剂管存放框和十字板，所述细胞试剂管存放框固定安装在隔板的上端，所述细胞试剂管存放框的一侧固定安装有竖板，所述竖板的另一侧与十字板的一端固定连接，且所述十字板的内侧之间活动安装有细胞缓冲液存放箱，所述盒盖的内腔底面固定安装有缓冲板，所述缓冲板的下端固定连接有橡胶压块，橡胶压块设置为柔性材质。

25、本发明技术方案的进一步改进在于：所述缓冲夹紧单元包括有试管固定板，所述试管固定板的外侧面分别与细胞试剂管存放框的内壁固定连接，所述细胞试剂管存放框的内腔底面固定增设有海绵垫，通过海绵垫的增设，用于对试剂管的底部进行柔性防护，防止试管之间相互晃动碰撞的情况。

26、本发明技术方案的进一步改进在于：所述试管固定板的内壁上滑动安装有限位柱，所述限位柱的外表面设置有压缩弹簧，且所述压缩弹簧的一端与试管固定板的上端固定连接，压缩弹簧与限位柱的外表面之间滑动连接，且限位柱与压缩弹簧的数量分别设置为四组。

27、本发明技术方案的进一步改进在于：所述限位柱及压缩弹簧的另一端固定连接有挤压板，所述挤压板的下端内侧固定安装有弧形囊板，所述弧形囊板的下侧与试管固定板的上端固定连接，所述挤压板的上端与橡胶压块的下端活动抵接，弧形囊板分别设置为柔质弹性材质，不会造成试剂管过度压迫。

28、由于采用了上述技术方案，本发明相对现有技术来说，取得的技术进步是：

29、1、本发明提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒，通过拉板的手动拨动，当手动将两组拉板同时向中心块一侧推动时，复位弹簧受到外力的挤压产生压缩形变，拉板带动插接条和滑动块脱离固定槽框设置的限位孔，便于盒盖与试剂盒外壳之间的脱离，便于细胞蛋白质抽提的便捷性。

30、2、本发明提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒，通过手动松开拉板，使得复位弹簧不受外力的压迫，弹性受到释放，推动滑动块和插接条向固定槽框上增设的限位孔进行插接，完成对盒盖的快速盖设，便于使用者使用时的便捷性，保证细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂储存的密封性。

31、3、本发明提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒，通过细胞试剂管存放框、十字板与细胞缓冲液存放箱共同配合，实现对细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂及细胞裂解缓冲液的分类存放，便于使用者直观地使用，结构简单，实用性高。

32、4、本发明提供一种细胞膜蛋白与细胞浆蛋白制备方法及试剂盒，通过海绵垫对试管的下端部位进行柔性承接，当试剂管由上至下放置进试管固定板时，盖设盒盖，使得橡胶压块和缓冲板挤压挤压板，压缩弹簧受到外力的压迫，且弧形囊板受到弹性挤压形变，实现对试剂管外壁的夹紧，同时不会因压迫力度过大而损坏试剂管，保证提取试剂稳定储存的效果，进一步提升试剂管存放的稳定性，避免在移动时产生晃动。