重组DPP4及其制备方法、DNA片段、重组载体、重组细胞和重组大肠杆菌

本发明涉及生物，尤其涉及重组dpp4及其制备方法、dna片段、重组载体、重组细胞和重组大肠杆菌。

背景技术：

1、人源二肽基肽酶iv(dpp4，ncbi gene id:1803)全长为766个氨基酸残基，包括22个跨膜蛋白，6个胞内区域的氨基酸以及700多个胞外区域氨基酸。dpp4的功能主要是使得多肽末端倒数第二位为脯氨酸和丙氨酸的氨基酸的肽键断裂，释放出二肽。在临床上，dpp4是治疗2型糖尿病的新靶标，选择性的抑制dpp4可以改善糖尿病患者的饮食，降低血糖。

2、正因为dpp4作为一种丝氨酸蛋白酶，其可以选择性识别并切割多肽链n末端倒数第二位的脯氨酸或丙氨酸，在生理和病理条件下降解大量的细胞因子、趋化因子、激素和生长因子，因此在基础研究中制备一批dpp4蛋白，在肿瘤的机制研究中具有广阔的应用前景。现有的dpp4的制备方法是通过杆状病毒感染sf9细胞(真核细胞)去制备，制备出的重组dpp4是29-766个氨基酸的蛋白，该制备方法纯化的重组dpp4蛋白已经商品化，虽然纯度较好，但是价格昂贵，货期较长，且其活性还有待进一步提升。

3、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供重组dpp4及其制备方法、dna片段、重组载体、重组细胞和重组大肠杆菌，旨在解决现有商业化重组dpp4的活性还有待进一步提升的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供一种重组dpp4，其中，所述重组dpp4的氨基酸序列如seqid no：1所示。

4、本发明的第二方面，提供一种dna片段，其中，所述dna片段包含编码本发明如上所述的重组dpp4的核苷酸序列。

5、可选地，所述核苷酸序列如seq id no：2所示。

6、本发明的第三方面，提供一种重组载体，其中，所述重组载体含有本发明如上所述的dna片段。

7、可选地，所述重组载体为重组质粒，所述重组质粒的核苷酸序列如seq id no：3所示。

8、本发明的第四方面，提供一种重组细胞，其中，所述重组细胞含有本发明如上所述的重组载体，所述重组细胞以大肠杆菌为宿主。

9、本发明的第五方面，提供一种重组大肠杆菌，其中，所述重组大肠杆菌含有本发明如上所述的重组载体。

10、本发明的第六方面，提供一种本发明如上所述的重组dpp4的制备方法，其中，包括如下步骤：

11、将本发明如上所述的重组细胞或本发明如上所述的重组大肠杆菌接种于含有碳源的反应体系中，进行诱导表达、纯化后，得到所述重组dpp4。

12、可选地，所述诱导表达所需的温度为18-37℃，所述诱导表达所需的时间为24-48h，所述诱导表达采用的诱导剂为异丙基-β-d-硫代半乳糖苷。

13、可选地，所述重组dpp4的制备方法具体包括如下步骤：

14、将本发明如上所述的表达载体转入到大肠杆菌感受态细胞中，经过卡那霉素抗性筛选后，挑取单克隆进行培养，得到菌液；

15、将所述菌液接种于含有卡那霉素抗性的lb液体培养基中，加入异丙基-β-d-硫代半乳糖苷，进行诱导培养后，离心，收集沉淀，纯化后，得到所述重组dpp4。

16、有益效果：本发明提供的重组dpp4活性高，是商业化dpp4的两倍。本发明提供的重组dpp4的制备方法成本较低，流程简单，产量高，易于重复，适合大规模生产。

技术特征：

1.一种重组dpp4，其特征在于，所述重组dpp4的氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.一种dna片段，其特征在于，所述dna片段包含编码权利要求1所述的重组dpp4的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的dna片段，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no：2所示。

4.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有权利要求2-3任一项所述的dna片段。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为重组质粒，所述重组质粒的核苷酸序列如seq id no：3所示。

6.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求4-5任一项所述的重组载体，所述重组细胞以大肠杆菌为宿主。

7.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌含有权利要求4-5任一项所述的重组载体。

8.一种权利要求1所述的重组dpp4的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述诱导表达所需的温度为18-37℃，所述诱导表达所需的时间为24-48h，所述诱导表达采用的诱导剂为异丙基-β-d-硫代半乳糖苷。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述重组dpp4的制备方法具体包括如下步骤：

技术总结本发明公开重组DPP4及其制备方法、DNA片段、重组载体、重组细胞和重组大肠杆菌，涉及生物技术领域。所述重组DPP4的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的重组DPP4活性高，是商业化DPP4的两倍。技术研发人员：吴海强,崔杨晴,徐文秋,余熙,谭红霞,辛子瑶受保护的技术使用者：深圳大学技术研发日：技术公布日：2024/9/9