一种预防和修复肾损伤的缩醛磷脂及其制备方法

本发明涉及一种预防和修复肾损伤的缩醛磷脂及其制备方法，属于生物医药。

背景技术：

1、顺铂(cisplatin，cp)，是治疗癌症患者的主要化疗药物之一，被用于治疗各种恶性肿瘤。尽管顺铂表现出广谱的抗癌活性，但在其实际临床使用过程中出现多种副作用，包括肾毒性、肝毒性和耳毒性，在给患者带来痛苦的同时严重限制了顺铂在治疗过程中的给药剂量，导致治疗周期延长。顺铂可以通过改变dna二级结构、干扰dna复制和细胞分裂来抑制癌细胞生长，但同时也会引起线粒体dna损伤，导致活性氧(ros)积累并对肾脏造成损伤。顺铂对非靶向组织的损伤也是导致癌症幸存者在生命后期死亡的重要因素之一。

2、急性肾损伤(acute kidney injury,aki)是一种复杂的综合症，发生在各种临床环境中，临床表现包括败血症、肾毒性和急性心力衰竭。顺铂的肾毒性主要表现为肾小管上皮细胞的炎症、凋亡和坏死，以及氧化应激和线粒体功能障碍，而肾小管是肾脏中负责过滤和排除废物的结构，肾小管受损将导致影响肾脏行使正常功能。常见的肾损伤症状包括尿量减少、尿液异常及肾功能恶化，对血清检测会发现肌酐及尿素氮含量上升。

3、现在预防顺铂引起的肾损伤的主要方式为对顺铂进行水化，此外还需控制顺铂给药剂量和给药频率，避免用药过度。临床上还需定期检测肾功能并对尿液及其他相关指标进行分析。这些都极大限制了顺铂的使用，因此开发新的能够有效缓解顺铂所引起的急性肾损伤的相关药物具有重要的临床意义。

技术实现思路

1、针对于现存状况，本发明的目的是提供一种从海鞘中提取的缩醛磷脂在预防和治疗急性肾损伤中的应用，并通过与大豆卵磷脂、鸡蛋卵磷脂和百令片比较研究缩醛磷脂的护肾作用。顺铂作为常用的抗癌药物可能会导致肾脏损伤，极大限制了其在临床中的使用，本发明提供的缩醛磷脂可以降低顺铂造成的急性肾损伤，从而达到保护化疗患者接受顺铂治疗的目的。

2、为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供的缩醛磷脂在制备预防和/或修复肾损伤的药物中的应用。

4、进一步的，所述缩醛磷脂的制备方法，包括以下步骤：

5、(a)取海鞘肉，之后将海鞘肉和水混合打成匀浆，离心，得到沉淀；

6、(b)将步骤(a)制得的沉淀和氯仿、水、和甲醇混合，振荡混匀，离心，保留上清液；

7、(c)将步骤(b)制得的上清液和水、氯仿，振荡混匀，静置，离心，取下层溶液，真空干燥，得到粗提物；

8、(d)将步骤(c)制得的粗提物洗涤，得到总脂；

9、(e)将步骤(d)制得的总脂用氯仿溶解，并采用柱层析法脱除中性酯，氯仿和甲醇作为洗脱液洗脱总脂，收集洗脱液；洗脱液进行硅胶板层析，显色确认后旋蒸，得到海鞘磷脂粗提物；

10、(f)将步骤(e)制得的海鞘磷脂粗提物用正己烷溶解，加入磷脂酶a1和柠檬酸钠缓冲液孵育后，用正己烷和异丙醇萃取经磷脂酶a1处理的海鞘磷脂粗提物，收集己烷层，并洗涤，旋蒸得到缩醛磷脂。

11、进一步的，步骤(a)中海鞘肉和水的质量比为1:0.5～3。

12、进一步的，步骤(a)中所述离心为在8000～10000rpm下离心0.5～1小时。

13、进一步的，步骤(b)中沉淀和水的质量体积比为1:3～5。

14、进一步的，步骤(b)中沉淀和氯仿的质量体积比为1:3～6。

15、进一步的，步骤(b)中沉淀和甲醇的质量体积比为1:8～12。

16、进一步的，步骤(b)中所述离心为在3000～5000rpm下离心0.2～0.6小时。

17、进一步的，步骤(c)中上清液和水体积比为2～8:1。

18、进一步的，步骤(c)中上清液和氯仿体积比为2～6:1。

19、进一步的，步骤(c)中所述离心为8000～10000rpm下离心0.2～0.6小时。

20、进一步的，步骤(e)中氯仿和甲醇的体积比为8～10:1。

21、进一步的，步骤(f)中海鞘磷脂粗提物的质量和正己烷的体积之比为50mg:8～15ml。

22、进一步的，步骤(f)中柠檬酸钠缓冲液的ph为4～5。

23、进一步的，步骤(f)中海鞘磷脂粗提物的质量和柠檬酸钠缓冲液的体积之比为50mg:8～15ml。

24、进一步的，步骤(f)中加入磷脂酶a1使得体系的酶活力为30～50lu/ml。

25、进一步的，步骤(f)中孵育时间为2～5小时。

26、进一步的，步骤(f)中正己烷和异丙醇的体积比为3～5:1。

27、进一步的，所述药物剂型为液体试剂、粉剂、粒剂中的一种或多种。

28、进一步的，所述药物中还含有药用辅料。

29、进一步的，所述药用辅料包括：增溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、消泡剂、增稠剂、保湿剂、助滤剂以及释放阻滞剂中任意一种或多种。

30、有益效果

31、1、本发明通过海鞘制备缩醛磷脂，相较于其他海洋生物海鞘价格便宜，养殖成本低，具有大规模养殖的潜力。海鞘中磷脂含量丰富，可以广泛用于食品保健行业。

32、2、本发明提供了一种提取缩醛磷脂的方法，具体是通过化学萃取法从海鞘肉中提取出总脂，并通过硅胶柱层析和酶解法对总脂进行纯化，最终制得了一种缩醛磷脂占总磷脂更高比例的缩醛磷脂，比现有技术中的常规提取效果要更好，并且所取得的缩醛磷脂也能够起到更好的防治效果。

33、3、本发明通过顺铂在小鼠体内诱导急性肾损伤模型上使用缩醛磷脂，探讨本发明中缩醛磷脂对于预防和治疗顺铂诱导的急性肾损伤中的用途。通过小鼠组织病理学研究以及血清中肌酐及尿素氮指标检测，发现该缩醛磷脂可以有效改善顺铂诱导的急性肾损伤。

34、4、本发明通过验证缩醛磷脂减少了hk-2细胞对顺铂的摄入并减少了顺铂损伤下hk-2细胞对钙黄绿素的摄取，为缩醛磷脂与细胞膜之间潜在的相互作用及细胞膜保护机制提供数据支持。

技术特征：

1.缩醛磷脂在制备预防和/或修复肾损伤的药物中的应用，其特征在于，所述缩醛磷脂的制备方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(a)中，海鞘肉和水的质量比为1:0.5～3。

3.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(b)中，沉淀和水的质量体积比为1:3～5；沉淀和氯仿的质量体积比为1:3～6；沉淀和甲醇的质量体积比为1:8～12。

4.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(c)中，上清液和水体积比为2～8:1；上清液和氯仿体积比为2～6:1。

5.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(f)中，海鞘磷脂粗提物的质量和正己烷的体积之比为50mg:8～15ml。

6.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(f)中，柠檬酸钠缓冲液的ph为4～5；海鞘磷脂粗提物的质量和柠檬酸钠缓冲液的体积之比为50mg:8～15ml。

7.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，步骤(f)中，加入磷脂酶a1使得体系的酶活力为30～50lu/ml；孵育时间为2～5小时。

8.根据权利要求1中所述的应用，其特征在于，所述药物剂型为液体试剂、粉剂、粒剂中的一种或多种。

9.根据权利要求1～8任一项所述的应用，其特征在于，所述药物中还含有药用辅料。

10.根据权利要求9中所述的应用，其特征在于，所述药用辅料包括：增溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、消泡剂、增稠剂、保湿剂、助滤剂以及释放阻滞剂中任意一种或多种。

技术总结本发明公开了一种预防和修复肾损伤的缩醛磷脂及其制备方法，属于生物医药技术领域。所述缩醛磷脂的制备方法是通过化学萃取法将海鞘肉中的总脂提取出来，并通过硅胶柱层析和酶解法对总脂进行纯化，得到缩醛磷脂。本发明通过验证缩醛磷脂在预防和治疗顺铂诱导急性肾损伤的作用，为预防和治疗顺铂诱导急性肾损伤的临床用药提供了实验数据支持，同时也扩大了海鞘及缩醛磷脂的使用范围。技术研发人员：陆乃彦,林泉,孙旦芹,向文,唐雪,杨国锋受保护的技术使用者：江南大学技术研发日：技术公布日：2024/9/9