一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法及应用

本发明属于分子鉴定，具体涉及一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法及应用。

背景技术：

1、食用菌具有高蛋白的特点，可作为优质的替代蛋白以保证蛋白的可持续供应和绿色低碳生产。金针菇含有丰富的氨基酸，是优良蛋白的新型植物蛋白源之一，还能与动物蛋白结合达到互补作用，以满足人们多元化食品需求。金针菇含有18种水解氨基酸，其中必需氨基酸含量接近who/fao模式，其中赖氨酸含量尤为丰富。高含量的赖氨酸能促进儿童生长发育，增强记忆，提高智力，因此金针菇又称“增智菇”。

2、此外，赖氨酸在蛋白质合成中发挥着重要作用，缺少赖氨酸会使其他氨基酸的利用受阻，是人体的第一必需氨基酸。成年人赖氨酸摄取量建议为30mg/kg。由于谷物中的赖氨酸含量甚低，且在加工过程中易被破坏而缺乏，以谷物作为主要蛋白质和氨基酸地区的人们存在营养平衡摄取问题。因此，提高金针菇中赖氨酸含量对提高其单位食物量的营养价值具有非常重要的意义，高赖氨酸金针菇新品种的选育工作成为食用菌的一个新方向。

3、混合分析法(bulked segregate analysis，bsa)是一种快速定位控制目标性状基因的方法，即对目标性状关联基因进行筛选和定位。针对研究的目标性状，选择表型差异显著的亲本构建出分离群体(或家系群体)，同时对两亲本及其目标性状表型极端的子代分别混合得到的两个混池进行全基因组重测序，检测到的两混池间dna差异片段即为候选区域，并注释该区域基因，可进一步定位到目标性状相关的基因或标记。再利用筛选出的分子标记对分离群体中的个体进行验证，通过判断与目标性状基因的连锁程度以及在某个已知遗传图谱中的位置，完成对目标性状的基因定位，进而达到定向选育的目的。

技术实现思路

1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。

2、作为本发明其中一个方面，本发明提供一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其中：采用8对引物对金针菇进行pcr扩增；所述8对引物序列分别为：

3、上游引物：5’-tcccatcgacaaagccttcc-3’，下游引物：5’-ccaacgatgccgaattcgtc-3’；

4、上游引物：5’-tgctcaactcccaagcacaa-3’，下游引物：5’-ggcgagggaaacttgaagga-3’；

5、上游引物：5’-tccttctgacgccacacttc-3’，下游引物：5’-attcctcagaaagggccagc-3’；

6、上游引物：5’-aacgatcaccaacgacacga-3’，下游引物：5’-atgtttgctcgtaactgcgc-3’；

7、上游引物：5’-aacgatcaccaacgacacga-3’，下游引物：5’-accattattcgcgtcaccca-3’；

8、上游引物：5’-tcaactgacagaggttgggc-3’，下游引物：5’-accattattcgcgtcaccca-3’；

9、上游引物：5’-tcagacaggtttgagtgccc-3’，下游引物：5’-atctccaactggttgtgggc-3’；

10、上游引物：5’-acttgaaagccacaccccaa-3’，下游引物：5’-cactcaccaacgttgtgctg-3’。

11、作为本发明所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法的优选方案：当金针菇基因组中含有以下突变位点的碱基时，鉴定为高产赖氨酸菌株：

12、scaffold10_2028634位点碱基为c，

13、scaffold10_737778位点碱基为c，

14、scaffold4_1392222位点碱基为t，

15、scaffold4_1464316位点碱基为a，

16、scaffold4_1464321位点碱基为a，

17、scaffold4_1464322位点碱基为a，

18、scaffold4_1792254位点碱基为c，

19、scaffold4_1793138位点碱基为c。

20、作为本发明所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法的优选方案：金针菇基因组的genbank序列号为jbdpie000000000。

21、作为本发明所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法的优选方案：所述pcr扩增反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，60℃退火45s，72℃延伸2min，循环35次；72℃终延伸7min。

22、作为本发明所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法的优选方案：pcr扩增反应体系为：2×r premix taqtm：10μl，正反向引物各1μl，dna 1μl，ddh2o 7μl。

23、作为本发明所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法的优选方案：所述采用8对引物对金针菇进行pcr扩增，包括对金针菇菌丝体或子实体进行pcr扩增。

24、本发明的有益效果：本发明提供一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，用于金针菇赖氨酸含量的定向筛选工作，可以在不需要栽培出菇即可进行检测的前提下，在实验室可筛选到高产赖氨酸的金针菇菌株，具有良好的应用前景。

技术特征：

1.一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：采用8对引物对金针菇进行pcr扩增；所述8对引物序列分别为：

2.根据权利要求1所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：当金针菇基因组中含有以下突变位点的碱基时，鉴定为高产赖氨酸菌株：

3.根据权利要求2所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：金针菇基因组的genbank序列号为jbdpie000000000。

4.根据权利要求2所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：所述pcr扩增反应程序为：94℃预变性4min；94℃变性30s，60℃退火45s，72℃延伸2min，循环35次；72℃终延伸7min。

5.根据权利要求4所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：pcr扩增反应体系为：2×r premix taqtm：1oμl，正反向引物各1μl，dna 1μl，ddh2o 7μl。

6.根据权利要求1所述的金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法，其特征在于：所述采用8对引物对金针菇进行pcr扩增，包括对金针菇菌丝体或子实体进行pcr扩增。

7.权利要求1所述的分子标记鉴定方法在筛选高赖氨酸含量金针菇中的应用。

技术总结本发明公开了一种金针菇高赖氨酸位点的分子标记鉴定方法及应用，采用8对引物对金针菇进行PCR扩增；当金针菇基因组中含有特定突变位点的碱基时，鉴定为高产赖氨酸菌株；本发明可以在不需要栽培出菇即可进行检测的前提下，在实验室可筛选到高产赖氨酸的金针菇菌株，具有良好的应用前景。技术研发人员：王瑞娟,陆欢,刘建雨,尚晓冬,徐珍,杨慧,宋春艳,谭琦受保护的技术使用者：上海市农业科学院技术研发日：技术公布日：2024/9/9