黑松露发酵液及其制备方法、用途和化妆品与流程

本技术属于化妆品，尤其涉及一种黑松露发酵液及其制备方法、用途和化妆品。

背景技术：

1、随着科技的飞速发展，人类物质生活条件改善，人口老龄化不断加剧，积极探索和开发抗氧化、抗衰老产品对减缓社会人口老龄化具有重要意义。在大量实验证据的基础上,现代衰老学说中自由基学说最受重视。该学说指出,机体细胞在正常代谢过程中产生较多的活性氧自由基。自由基在人体内处于不断产生和不断清除的动态平衡之中，当人体受到外源性因素以及内源性因素的影响时，自由基产生过多或者清除过少都有可能造成组织细胞的损伤，进而引起机体的衰老以及其它的疾病。

2、黑松露(truffle tuber melanosporum)，又称块菌、块菇、猪拱菌和无娘果等，是一类蕈类的总称，属子囊菌门西洋块菌科西洋块菌属，是一类与树木共生的药食两用珍惜名贵食用菌。我国的云南、四川、新疆和西藏等地为主要分布区，研究表明，黑松露含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸和多不饱和脂肪酸，同时，还含有丰富的矿物质和固醇类物质。黑松露在化妆品领域的应用相对较少，现有技术中心黑松露以初级加工为主，会造成一定的黑松露营养物质流失和资源浪费。

技术实现思路

1、本技术实施例提供一种黑松露发酵液的制备方法，通过微生物发酵的方法能够对黑松露中的活性成分进行提取，不仅可以减少活性成分的流失，还可以更好的发挥其护肤效果。

2、第一方面，本技术提供一种黑松露发酵液的制备方法，方法包括：

3、将黑松露粉料和去离子水混合，以得到发酵原料液；

4、制备初始发酵体系的步骤，包括向发酵原料液中加入纤维素酶进行酶解处理并灭菌冷却，以得到初始发酵体系；

5、发酵培养步骤，包括向初始发酵体系中接种发酵菌进行培养发酵，以得到黑松露发酵液；其中，以初始发酵体系中去离子水的体积为基准，初始发酵体系中发酵菌的活菌数为104cfu/ml～108cfu/ml。

6、以初始发酵体系中去离子水的体积为基准，初始发酵体系中的发酵菌的活菌数优选为104cfu/ml～108cfu/ml，进一步优选为105cfu/ml～107cfu/ml；

7、本技术实施例的黑松露发酵液的制备方法，将黑松露粉料和去离子水进行混合制备发酵原料液，然后向发酵原料液加入纤维素酶酶解处理并灭菌冷却得到初始发酵体系，接着加入发酵菌进行培养发酵，使得黑松露中所包含的活性物质能够完全被发酵菌开发出来，得到黑松露发酵液，避免黑松露中的活性物质的流失和浪费。利用微生物发酵菌对黑松露进行发酵，制备得到的发酵产物具有较好的肤感，其中的活性成分具有更好的安全性，并能够将黑松露充分利用，减少活性物质的流失和资源的浪费。

8、在本技术一实施例中，将黑松露粉料和去离子水混合，以得到发酵原料液的步骤将粒径为50目～150目的黑松露粉料和去离子水混合，黑松露粉料的粒径优选为100目～120目。

9、在本技术一实施例中，将黑松露粉料和去离子水混合，以得到发酵原料液的步骤包括将黑松露粉料和去离子水以1:50～400的质量比混合。黑松露粉料和去离子水的质量比进一步优选为1:100～300，更进一步优选为1:180～200。

10、在本技术中，黑松露粉料是通过将黑松露粉碎并经过筛处理得到。

11、在本技术一实施例中，制备初始发酵体系的步骤包括向发酵原料液中加入与去离子水的质量比为1:100～400的纤维素酶，并在40℃～65℃下进行酶解处理，酶解时间为45分钟～70分钟，搅拌转速为200r/min～500r/min。即纤维素酶和去离子水的质量比为1:100～400。

12、在本技术一实施例中，酶解处理的温度优选为48℃～50℃。

13、在本技术一实施例中，制备初始发酵体系的步骤包括将完成酶解处理的发酵原料液进行高温灭菌，高温灭菌的条件为：将发酵原料液置于灭菌温度为110℃～125℃、灭菌压强为0.1mpa～0.13mpa的高压灭菌锅中灭菌15分钟～35分钟，灭菌后冷却至室温，以得到初始发酵体系。室温是指20℃～30℃。

14、在本技术一实施例中，高温灭菌的温度优选为115℃～121℃，更优选的灭菌温度为120℃～121℃。

15、对初始发酵体系进行灭菌以避免初始发酵体系，即避免酶解处理后的发酵原料液在后续的发酵过程中受其他杂菌的影响。本技术的初始发酵体系灭菌完成后需将初始发酵体系冷却至室温，然后再进行发酵菌接种培养发酵。

16、在本技术一实施例中，发酵培养步骤包括接种保藏编号为ciccno.20261的植物乳杆菌植物亚种(lactobacillus plantarum subsp.plantarum)和保藏编号为ciccno.20243的瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus)的发酵菌。

17、本技术的黑松露发酵液的制备方法采用瑞士乳杆菌和植物乳杆菌植物亚种的混合菌种对黑松露和去离子水混合得到的发酵原料液进行发酵，发酵所需条件温和，有效的提高了黑松露的生物活性，减少了黑松露中活性成分的损失，制备得到的黑松露发酵液具有较好的肤感以及较好的抗氧化、滋养皮肤的效果，制备发酵产物滤液的过程中不添加任何化学成分，肌肤零负担，具有较好的安全性，属于纯天然植物原料，在化妆品领域具有很好的应用前景。

18、本技术实施例的黑松露发酵液的制备方法，采用瑞士乳杆菌和植物乳杆菌植物亚种对发酵原料液进行发酵，发酵条件温和，发酵周期短，生产成本低，有利于大规模生产。

19、在本技术一实施例中，发酵培养步骤以菌液的形式对初始发酵体系进行发酵菌的接种，其中菌液的制备方式包括：

20、将瑞士乳杆菌粉和植物乳杆菌植物亚种菌粉溶解于无菌去离子水中，获得活菌数优选为105cfu/ml～109cfu/ml的接种菌液，进一步优选为活菌数为106cfu/ml～108cfu/ml的接种菌液；

21、将上述接种菌液加入初始发酵体系进行培养发酵。

22、在本技术一实施例中，发酵培养步骤包括向初始发酵体系中加入体积比为1～4:1～4包括瑞士乳杆菌(lactobacillus helveticus)和植物乳杆菌植物亚种(lactobacillusplantarum subsp.plantarum)在内的接种菌液，接入发酵菌的接种菌液后摇匀，以得到初始发酵混合液；

23、将初始发酵混合液在32℃～40℃的恒温培养箱中静置培养发酵8小时～20小时，进一步优选为8小时～16小时，，以得到黑松露发酵液。发酵培养的温度进一步优选为35℃～40℃。

24、在本技术一实施例中，瑞士乳杆菌与植物乳杆菌植物亚种的菌液中的体积比为1:1，菌液中两种发酵菌的活菌数均为107cfu/ml，菌液添加量为4ml。

25、在本技术一实施例中，发酵培养步骤还包括：

26、将发酵结束后的黑松露发酵液进行发酵菌灭菌处理，以得到发酵菌灭菌的黑松露发酵液；将发酵结束后的黑松露发酵液在高压蒸汽灭菌锅中进行发酵菌灭菌处理，灭菌处理的条件为：灭菌温度为100℃～125℃，优选为100℃～115℃；灭菌压强为0.1mpa～0.14mpa，较佳的为0.1mpa～0.13mpa；灭菌时间为15分钟～35分钟，较佳的为15分钟～25分钟，更佳的为20分钟；以得到发酵菌灭菌的黑松露发酵液；

27、将发酵菌灭菌的黑松露发酵液冷却至室温进行离心处理，以得到黑松露发酵液的上清液；离心处理的工艺参数为：离心转速为3000r/min～9000r/min，较佳的为4000r/min～6000r/min，更佳的为5000r/min；离心半径为8cm～15cm；离心时间为10分钟～40分钟，较佳的为20分钟～40分钟，更佳的为30分钟；

28、离心结束后，对黑松露发酵液的上清液进行二次灭菌，以得到黑松露发酵液；二次灭菌采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度为110℃～125℃，更佳的为115℃～121℃；灭菌压强为0.1mpa～0.14mpa，更佳的为0.1mpa～0.13mpa；灭菌时间为20分钟～40分钟，更佳的为25分钟～35分钟；以得到黑松露发酵液。

29、发酵菌灭菌的黑松露发酵液即将黑松露发酵液中的发酵菌灭活，终止发酵。对发酵菌灭菌的离心处理可以除杂得到上清液，对黑松露发酵液的上清液进行二次灭菌能够防止离心过程中发酵液与离心杯接触，使黑松露发酵液避免离心杯上的杂菌可能带来的污染。

30、在本技术一实施例中，黑松露发酵液的制备方法还包括：

31、加入防腐剂的步骤，包括向完成二次灭菌的黑松露发酵液中加入防腐剂，以得到黑松露发酵液。

32、在本技术一实施例中，加入防腐剂的步骤包括在50℃～80℃的混合温度下，向完成二次灭菌的黑松露发酵液中加入对羟基苯乙酮和/或1,2-己二醇作为防腐剂。

33、在本技术一实施例中，较佳的混合温度为70℃～75℃。

34、在本技术一实施例中，防腐剂包括对羟基苯乙酮和1,2-己二醇，以制得的黑松露发酵液的质量为基准，分别加入占黑松露发酵液总质量0.5wt％～2wt％的对羟基苯乙酮和1,2-己二醇作为防腐剂，与完成二次灭菌的黑松露发酵液混合均匀得到黑松露发酵液。

35、在本技术一实施例中，以制得的黑松露发酵液的质量为基准，分别加入占黑松露发酵液总质量0.5wt％～2wt％的对羟基苯乙酮或0.5wt％～2wt％的1,2-己二醇作为防腐剂，与完成二次灭菌的黑松露发酵液混合均匀得到黑松露发酵液。第二方面，本技术提供了一种黑松露发酵液，根据上述的黑松露发酵液的制备方法得到。

36、第三方面，本技术提供了一种上述的黑松露发酵液用于制备化妆品的用途。

37、第四方面，本技术提供了一种化妆品，包括上述的黑松露发酵液。

38、本技术实施例的黑松露发酵液，既可以作为化妆品直接使用，也可以添加到化妆品基础配方中使用，即作为功能组分添加到化妆品基础配方中使用。

39、本技术利用黑松露制备得到的黑松露发酵液，既可以作化妆品直接使用，也可以添加到化妆品基础配方中作为功能组分使用，具有较好的抗氧化、抗衰老、滋养肌肤的效果。

40、示例性的，在本技术一实施例中，化妆品中黑松露发酵液的含量为100％wt。在本技术另一实施例中，化妆品中黑松露发酵液的含量为5％wt～99％wt，黑松露发酵液的含量进一步优选为60％wt～99％wt。

41、本技术实施例的黑松露发酵液的制备方法，对黑松露粉料和去离子水混合制备发酵原料液，然后向发酵原料液中加入纤维素酶酶解处理并灭菌冷却得到初始发酵体系，以及接种发酵菌进行静置培养发酵，使得黑松露中所包含的活性物质能够完全被发酵菌开发出来，得到黑松露发酵液，避免黑松露中的活性物质的流失和浪费。利用微生物发酵菌对黑松露进行发酵，制备得到的发酵产物具有较好的肤感，其中的活性成分具有更好的安全性，并能够将黑松露充分利用，减少活性物质的流失和资源的浪费。