从新疆沙冬青茎中分离得到的黄酮类化合物及其制备方法与应用与流程

本发明属于中药提取分离、植物化学及医药领域，涉及从豆科植物新疆沙冬青茎中分离得到的黄酮类化合物及其制备方法与应用。

背景技术：

1、新疆沙冬青(ammopiptanthus nanus(m.pop.)cheng f.)，又称矮沙冬青、小沙冬青，为豆科沙冬青属植物，是新疆特有的药用植物，仅产于我国克州乌恰县内，集抗旱、抗高温、抗冻、耐盐碱、耐腐蚀等多种抗逆性与一身，既能防风固沙，结瘤固氮，又能保持水土，改善土壤状况，是一种优良的沙区绿化树种。新疆沙冬青的药用价值高，以其茎、叶入药，有祛风除湿、活血散瘀、镇痛和防治冻伤的功效，将其茎叶煮水内服可以治疗肺痨、腹痛、咳嗽痰多、预防感染，外用浸泡伤处，可用于治疗冻伤和慢性风湿性关节炎。

2、迄今为止，从新疆沙冬青中分离得到的化合物有30个，包括黄酮类、生物碱类、苯丙素类、环多醇类等成分。其中，黄酮类化合物是新疆沙冬青中的主要化学成分，多来自于新疆沙冬青的茎皮。现代研究表明，新疆沙冬青中含有的黄酮类化合物芒柄花素具有很强的抗肿瘤活性，可用于治疗膀胱癌、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌等。

技术实现思路

1、发明人以从豆科沙冬青属植物新疆沙冬青(ammopiptanthus nanus(m.pop.)cheng f.)为研究目标，对其化学成分进行研究，得到了新型黄酮类化合物，并评价其抗肿瘤活性，发现其具有抗肿瘤细胞增殖活性，为临床研究和开发新型抗肿瘤药物提供了可靠依据，对新疆沙冬青的合理开发和利用具有重要的社会意义和经济价值。

2、为实现上述目的，本发明具体采用如下技术方案：

3、从新疆沙冬青茎中分离得到的结构如ⅰ、ⅱ所示的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐：

4、

5、其中，r1、r2分别独立的选自h、oh；

6、r3选自h、oh，r4选自h、oh，或r3、r4互相连接与苯环共同形成5元环且5元环上至少一个氢可被甲基、甲氧基取代；

7、r5选自h，r6选自oh，或r5、r6互相连接与苯环共同形成含两个氧原子的五元杂环；

8、r7选自h、oh。

9、作为本发明所述的优选技术方案，从新疆沙冬青茎中分离得到的结构如下所示的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐：

10、

11、本发明还提供了一种所述的黄酮类化合物的提取分离方法，包括：以干燥的新疆沙冬青茎为原料，95％乙醇浸泡提取、减压浓缩、萃取、mci柱层析、正相硅胶柱层析以及制备型高效液相色谱分离等步骤得到的。

12、具体包括以下步骤：

13、步骤(1)、取干燥的新疆沙冬青的茎，粉碎成粗粉，在室温下，用95％乙醇溶液浸泡提取3次，每次提取的料液比为1:4～1:5kg/l，每次提取5～7天，合并提取液，提取液浓缩得到干浸膏；

14、步骤(2)、干浸膏分散在水中得到浸膏分散液，采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次进行萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；

15、步骤(3)、乙酸乙酯部位用甲醇溶解，mci填料进行拌样，干法上样，进行mci柱层析，使用甲醇-水洗脱体系进行梯度洗脱，得到10个馏分，记为fr.a～fr.j；

16、步骤(4)、馏分fr.f进行正相硅胶柱层析，使用二氯甲烷-甲醇体系梯度洗脱，划分成5个组分，记为fr.f1～fr.f7；

17、步骤(5)、馏分fr.f2进行正相硅胶柱层析，使用石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，划分成5个组分，记为fr.f21～fr.f25；

18、fr.f23进行sephadex lh-20柱色谱，使用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，得到6个组分，记为fr.f231～fr.f236；fr.f235经过正相硅胶柱层析和制备型高效液相色谱，得到化合物1和化合物2；

19、fr.f24进行sephadex lh-20柱色谱，使用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，得到4个组分，记为fr.f241～fr.f244；fr.f243经过正相硅胶柱层析(洗脱剂为石油醚:丙酮＝9:1～2:1v/v)和制备型高效液相色谱，得到化合物3。

20、步骤(3)中，所述的mci填料为chp20p填料(粒径75～150μm)。

21、所述的甲醇-水洗脱体系为甲醇:水＝30:70～100:0v/v。

22、步骤(4)中，所述的二氯甲烷-甲醇体系为二氯甲烷:甲醇＝150:1～0:1v/v。

23、步骤(5)中，所述的石油醚-乙酸乙酯体系为石油醚:乙酸乙酯＝6:1～0:1v/v。

24、分离化合物1和化合物2时，正相硅胶柱层析的洗脱剂为石油醚:丙酮＝12:1～2:1v/v；制备型高效液相色谱采用ymc-pack ods-a色谱柱(250×20mm，5μm)，检测波长为210nm和254nm，流动相为甲醇:水＝50:50v/v，流速为8ml/min。

25、分离化合物3时，正相硅胶柱层析的洗脱剂为石油醚:丙酮＝9:1～2:1v/v；制备型高效液相色谱采用ymc-pack ods-a色谱柱(250×20mm，5μm)，检测波长为210nm和254nm，流动相为甲醇:水＝45:55v/v，流速为8ml/min。

26、本发明所述的黄酮类化合物具有抗肿瘤细胞增殖活性，为发掘潜在的抗肿瘤新药提供了有力依据。

27、本发明的另一个目的是提供制备所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

28、所述的肿瘤为肺癌；所述肺癌为非小细胞肺癌。

29、本发明的另一个目的是提供一种药物组合物，它是以所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐为有效成分，与药学上可接受的载体制成药学上可接受的剂型。

30、与现有技术相比，本发明的有益效果：

31、本发明从豆科沙冬青属植物新疆沙冬青的干燥茎中分离得到了具有新型结构的黄酮类化合物。体外细胞实验表明，黄酮类化合物具有抗肿瘤细胞增殖活性，在制备治疗肿瘤的药物中具有良好的应用前景。

技术特征：

1.结构如ⅰ、ⅱ所示的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐：

2.结构如下所示的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐：

3.一种权利要求2所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述的mci填料为chp20p填料；所述的甲醇-水洗脱体系为甲醇:水＝30:70～100:0v/v。

5.根据权利要求3所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，所述的二氯甲烷-甲醇体系为二氯甲烷:甲醇＝150:1～0:1v/v。

6.根据权利要求3所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述的石油醚-乙酸乙酯体系为石油醚:乙酸乙酯＝6:1～0:1v/v；

7.权利要求1-2任一项所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肺癌。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述肺癌为非小细胞肺癌。

10.一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1-2任一项所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐为有效成分，与药学上可接受的载体制成药学上可接受的剂型。

技术总结本发明公开了结构如Ⅰ、Ⅱ所示的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐，R<subgt;1</subgt;、R<subgt;2</subgt;分别独立的选自H、OH；R<subgt;3</subgt;选自H、OH，R<subgt;4</subgt;选自H、OH，或R<subgt;3</subgt;、R<subgt;4</subgt;互相连接与苯环共同形成5元环且5元环上至少一个氢可被甲基、甲氧基取代；R<subgt;5</subgt;选自H，R<subgt;6</subgt;选自OH，或R<subgt;5</subgt;、R<subgt;6</subgt;互相连接与苯环共同形成含两个氧原子的五元杂环；R<subgt;7</subgt;选自H、OH。所述的黄酮类化合物具有抗肿瘤细胞增殖活性。本发明公开了所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明还公开了一种药物组合物，它是以所述的黄酮类化合物或其药学上可接受的盐为有效成分，与药学上可接受的载体制成药学上可接受的剂型。技术研发人员：陈立娜,章睿丽,金阳,陈冠汝,孙焱培,张宏娟,高艳坤,孟响,木尼热·萨提瓦力迪,地里努尔·玉山,季晶受保护的技术使用者：克孜勒苏柯尔克孜自治州人民医院技术研发日：技术公布日：2024/9/12