抗猪IgG抗体、抗体组合物及其应用的制作方法

本发明属于免疫学检测领域，具体地说，涉及一种抗猪igg抗体、抗体组合物及其应用。

背景技术：

1、近年来随着非洲猪瘟以及新型猪传染病的流行，对我国生猪的养殖业造成了严重损失，因此快速准确的发现病猪显得尤为重要。igg是动物血清中浓度最高的一类免疫球蛋白，约占免疫球蛋白含量的70％-80％，在抗体介导的反应中起主要作用，同时igg水平也是临床免疫检验和体液免疫研究常用的指标，全面、系统地了解猪体对病原体感染的免疫应答反应并采取相应的防制措施有重要意义。同时免疫球蛋白整体含量的高低也能间接反映出机体免疫力的强弱。对群体检测血液中igg的含量可以用来评价群体的健康状况，可以对不同配方的饲料或者营养添加剂的效果做辅助性的评判。

2、抗猪igg的单克隆抗体与多抗相比，具有特异性高、效价稳定等优点，但是同类进口试剂存在价格昂贵，国产试剂效价不高，批间差大以及灵敏度不够的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种抗猪igg抗体、抗体组合物及其应用。

2、本发明根据kohler和milstrin杂交瘤细胞建株的原理，利用peg融合技术，建立分泌抗猪igg单克隆抗体的杂交瘤细胞株，旨在为猪igg的检测提供高质量、标准化试剂。

3、为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种抗猪igg抗体（单克隆抗体9g5）或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为gytftsyv、inpyndgt、arydgygfpy（seq id no:9-11），轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为qdvgtt（seq id no:12）、ras、qqytrypyt（seq id no:13）。

4、进一步地，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示或与如seq id no:7所示序列具有至少80%、85%、90%、95%或98%的相似性，重链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示或与如seq id no:8所示序列具有至少80%、85%、90%、95%或98%的相似性。

5、本发明中，所述抗体或其抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv或单链抗体。

6、第二方面，本发明提供编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子。

7、第三方面，本发明提供含有所述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或宿主细胞。

8、第四方面，本发明提供一种抗体偶联物，所述抗体偶联物是将所述抗体或其抗原结合片段与标记物偶联得到，所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、放射性标记等中的一种或多种。

9、第五方面，本发明提供一种抗猪igg的抗体组合物，所述抗体组合物包含所述抗体9g5或其抗原结合片段以及抗猪igg抗体4h1或其抗原结合片段。

10、所述抗体4h1或其抗原结合片段的重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为gftfsnhp、istggsyt、srhgydperswyfdv（seq id no:14-16），轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为ssvsy（seq id no:17）、sts、qqrsrypyt（seq id no:18）。

11、第六方面，本发明提供所述抗体或其抗原结合片段或所述核酸分子或所述生物材料或所述抗体偶联物或所述抗体组合物在制备用于定性或定量检测猪igg的产品中的应用。

12、第七方面，本发明提供所述抗体或其抗原结合片段或所述抗体偶联物或所述抗体组合物的以下任一应用：

13、（1）用于猪igg定性或定量检测（含非疾病诊断和治疗目的）；

14、（2）用于疫苗免疫原性或免疫效果检测；

15、（3）用于含猪igg产品的质量控制。

16、第八方面，本发明提供一种猪igg双抗夹心酶联免疫检测试剂盒，以所述抗体9g5或其抗原结合片段作为第一抗体，以所述抗猪igg抗体4h1或其抗原结合片段作为第二抗体；或者，

17、以所述抗猪igg抗体4h1或其抗原结合片段作为第一抗体，以所述抗体9g5或其抗原结合片段作为第二抗体。

18、在本发明的一个具体实施方式中，将所述抗体9g5固定于固相载体上，所述固相载体可选自酶标板、微球、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜等，优选酶标板。

19、用酶标记所述抗体4h1，所述酶标记的酶可选自如下任一种：辣根过氧化酶（hrp）、碱性磷酸酶（ap）、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶等，优选辣根过氧化酶。

20、进一步地，所述试剂盒还包括底物显色液、封闭液或终止液等中的至少一种。

21、常用底物包括但不限于邻苯二胺(o-phenylenediamine，opd)、四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,tmb)和abts[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobinesulfonate-6)]等，优选tmb。

22、所述封闭液如2% bsa溶液等，所述终止液如1.5-2.5m（优选2m）的硫酸溶液等。

23、采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术检测猪igg含量的原理如下：将抗猪igg单克隆抗体1包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的猪igg会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入hrp标记的抗猪igg抗体2，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的猪igg发生特异性结合；洗板后加入显色剂底物tmb，若反应孔中样品存在不同浓度的猪igg，则hrp会使无色tmb变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450 nm处测定反应孔样品吸光度（od450nm），样本中的猪igg浓度与od成正比，通过标准曲线便可计算出样本中猪igg的浓度。该方法借助了酶显色放大体系，其检测灵敏度较高，可以检测含量比较低的样本，检测范围为0.4-25ng/ml。

24、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

25、本发明提供的猪igg的抗体能够特异性结合猪igg，与其他类似蛋白无交叉反应，与猪igg具有较高的亲和力，且具有较高的稳定性；基于该抗体利用双抗夹心elisa法检测猪igg具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够实现准确、高通量地检测猪血清或其他含有猪igg的血清类似物或产品中的igg含量，在猪igg检测中具有较好的应用前景。

技术特征：

1.抗猪igg抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为gytftsyv、inpyndgt、arydgygfpy，轻链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为qdvgtt、ras、qqytrypyt。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示或与如seq id no:7所示序列具有至少80%的相似性，重链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示或与如seq id no:8所示序列具有至少80%的相似性。

3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv或单链抗体。

4.编码权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子。

5.含有权利要求4所述核酸分子的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或宿主细胞。

6.抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物是将权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段与标记物偶联得到，所述标记物选自酶标记、生物素标记、荧光染料标记、化学发光染料标记、放射性标记中的一种或多种。

7.抗猪igg的抗体组合物，其特征在于，所述抗体组合物包含权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段以及抗猪igg抗体4h1或其抗原结合片段；

8.权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段或权利要求4所述核酸分子或权利要求5所述生物材料或权利要求6所述抗体偶联物或权利要求7所述抗体组合物在制备用于定性或定量检测猪igg的产品中的应用。

9.权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段或权利要求6所述抗体偶联物或权利要求7所述抗体组合物的以下任一应用：

10.猪igg双抗夹心酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，以权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段作为第一抗体，以权利要求7中所述抗猪igg抗体4h1或其抗原结合片段作为第二抗体；或者，

技术总结本发明属于免疫学检测领域，提供一种抗猪IgG抗体、抗体组合物及其应用。本发明提供的猪IgG的抗体能够特异性结合猪IgG，与其他类似蛋白无交叉反应，与猪IgG具有较高的亲和力，且具有较高的稳定性；基于该抗体利用双抗夹心ELISA法检测猪IgG具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够实现准确、高通量地检测猪血清或其他含有猪IgG的血清类似物或产品中的IgG含量，在猪IgG检测中具有较好的应用前景。技术研发人员：苑晓松,陈新新,潘悦,王河川,路轲,王芳,马玉岭,王永明,石元朔受保护的技术使用者：北京索莱宝科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/26