一种诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的细胞培养基配方及其应用

本发明涉及生物医学、干细胞与再生、遗传与育种和药物筛选等，具体而言，涉及一种细胞培养基在制备猪诱导型滋养层干细胞中的应用。

背景技术：

1、滋养层干细胞是一类具有自我更新能力，并能分化为各种类型滋养层细胞（合体滋养层细胞，绒毛外细胞滋养层细胞等）的特殊细胞。1998年，首次成功分离了鼠的原代滋养层干细胞。2015年，研究人员发现可将鼠的纤维细胞诱导为滋养层干细胞。人原代滋养层干细胞于2018年首次从囊胚和早孕期胎盘中分离获得。然而，至今尚无用于高效分离或制备猪滋养层干细胞的细胞培养基配方。跟当前采用的各种研究滋养层细胞发育的细胞模型相比，猪诱导型滋养层干细胞具有以下优势。

2、目前，原代滋养层干细胞通常只能通过囊胚或者早孕期胎盘获取，构建原代滋养层干细胞的同时也破坏了胚胎或发育中的胎盘，因此，原代滋养层干细胞在取材方面十分不便，并且利用废弃胚胎或终止妊娠后绒毛资源也极其有限。本发明中猪滋养层干细胞的诱导培养基可诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞，无需取猪胎盘相关组织分离原代细胞，该细胞培养基可在体外源源不断的从猪扩展多能干细胞中转化而来；利用本发明中猪滋养层干细胞的诱导培养基制备得到的猪诱导型滋养层干细胞可以作为一种研究猪胚胎发育谱系分化的模型。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种细胞培养基以制备猪滋养层干细胞。

2、本发明是这样实现的：

3、实施例提供一种诱导猪扩展多能干细胞分化为猪诱导型滋养层干细胞的细胞培养基，该细胞培养基将猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞。

4、所述细胞培养基包括基础培养液，且所述细胞培养基中至少含有以下组分: 50～100 μg/ml维生素c、5～20 ng/ml白细胞介素6、5～20 ng/ml可溶性白细胞介素6受体alpha，5～20 ng/ml激活素a，0.2～6 μm wnt通路激活剂、0.5～4 μm parp1通路抑制剂、5～10 μm rock通路抑制剂。

5、本发明具有以下有益效果：本发明实施例提供了一种诱导猪扩展多能干细胞分化为猪诱导型滋养层干细胞的细胞培养基，该特定的细胞培养基转化得到的猪诱导型滋养层干细胞具有无限增殖和分化成亚型滋养层细胞的能力，其建立将有助于猪繁殖与发育的研究。

技术特征：

1.一种诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的细胞培养基，其特征在于：采用特定细胞培养基配方将猪扩展多能干细胞分化成滋养层干细胞；

2.根据权利要求1所述的诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的细胞培养基，其特征在于：所述细胞培养基中还包括以下一种或多种组分：0.5～1.5%胰岛素样转铁蛋白添加剂、0.5% n2补充剂、1% b27补充剂、0.05～0.15mm β-巯基乙醇和0.1%～0.5% 牛血清白蛋白；

3.根据权利要求2所述的诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的细胞培养基，其特征在于：所述诱导的猪滋养层干细胞可以进一步分化为绒毛外细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞。

4.根据权利要求1～3任一项所述的诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的培养体系，其特征在于：应用该细胞培养基配方时，猪扩展多能干细胞的接种密度为(1～9)×105个cell/cm2 ；

5.一种诱导猪扩展多能干细胞分化为滋养层干细胞的培养基配方，其特征在于，其采用权利要求1～4任一项所述的培养基应用方式可制得猪滋养层干细胞。

6.根据权利要求5所制得的猪诱导型滋养层干细胞，其特征在于：可利用实时荧光定量pcr和免疫荧光染色鉴定。

技术总结本发明公开了一种诱导猪扩展多能干细胞分化为猪滋养层干细胞的细胞培养基，其应用方法为：将猪扩展多能干细胞接种在基质胶上，24 h后将猪扩展多能干细胞培养基更换为猪滋养层干细胞诱导培养液，每24 h换液，培养5天后可形成滋养层干细胞。本发明可为研究猪胚胎发育谱系分化提供一种模型，也可为猪类囊胚的自我组装提供滋养层细胞。技术研发人员：张仕强,楼姣,廖政,王妍受保护的技术使用者：西北农林科技大学技术研发日：技术公布日：2024/9/29