一种嵌合抗原受体、表达载体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法、用途和制成的药物

本发明属于肿瘤免疫治疗，具体涉及一种嵌合抗原受体、表达载体、嵌合抗原受体t细胞及其制备方法、用途和制成的药物。

背景技术：

1、嵌合抗原受体t(chimeric antigen receptor t cell，car-t)细胞治疗是一种过继性免疫治疗，其通过基因工程技术将来自患者外周血的t细胞在体外进行修饰，使t细胞表面表达嵌合抗原受体从而特异性地识别体内表达相应靶点的肿瘤细胞，并通过免疫作用大量释放多种效应因子，高效地清除肿瘤细胞，达到治疗恶性肿瘤的目的。

2、car是一种人工合成的受体蛋白，主要包括四个结构域：(1)细胞外靶抗原识别结合结构域，来源于单克隆抗体的可变重链(vh)和可变轻链(vl)，二者通过一个柔性连接物连接组成单链可变片段(single-chain variable fragment，scfv)。scfv具有免疫原性、亲和力、特异性和抗原结合表位四个重要特征；(2)铰链区，又称间隔区，多来自cd8α、cd28、igg1或igg4的氨基酸序列，主要功能是提供灵活性，以利于抗原结合区接触到靶抗原表位。(3)跨膜区，主要功能是将car锚定在t细胞膜上，通常由cd28或cd8α等免疫球蛋白超家族成员构成；(4)细胞内信号转导结构域，由共刺激分子和信号转导结构域组成。共刺激域通常来自cd28受体家族(cd28或icos)或肿瘤坏死因子受体家族(4-1bb、ox40或cd27)，负责给t细胞提供激活信号，使t细胞持续增殖并释放细胞因子，提高t细胞的抗肿瘤能力。

3、目前，car-t细胞疗法应用于实体瘤的治疗仍然存在一些困难。car-t细胞治疗实体瘤的第一步是选择一个理想的肿瘤相关性抗原(tumor-associated antigens，taas)，其需要在肿瘤细胞表面高水平选择性表达，但在重要正常组织的表面不表达或低水平的表达。目前正在研究开发的实体瘤taas包括cea、her2、egfr、egfrviii、gpc3、psma和claudin18.2等。如何选择合适的taas，并针对该taas设计car分子，这是提高car-t细胞抗肿瘤活性的关键因素之一。例如，目前已有相关研究尝试开发以her2作为肿瘤相关性抗原的car-t细胞(如cn116355859b包含shp2 n-sh2结构域的靶向her2阳性肿瘤的car-t及制备方法和应用)，然而，这些研究中所开发的car-t细胞的抗实体瘤疗效仍然有所不足，还有待于进一步提升。

4、car-t细胞治疗实体瘤的另一个关键是促进car-t细胞向肿瘤局部迁移、增加瘤内浸润并克服抑制性的肿瘤微环境。目前，在临床前研究中通过改造car分子的结构、扩增趋化因子受体信号传导、靶向肿瘤微环境(tumormicroenvironment，tme)中的肿瘤基质和/或抑制性免疫细胞及car-t细胞的局部递送等方式来应对这些挑战。然而，实现肿瘤的持续缓解仍然具有挑战性，需要进行新的尝试来提高car-t细胞治疗实体瘤的疗效。

技术实现思路

1、针对现有技术的问题，本发明提供一种嵌合抗原受体、表达载体、嵌合抗原受体t细胞及其制备方法、用途和制成的药物。

2、一种以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体的编码核苷酸序列如seq id no.1所示。

3、本发明还提供一种表达载体，它能够表达上述以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体。

4、优选的，它是重组质粒载体、重组病毒或它们的组合。

5、优选的，所述重组病毒为慢病毒载体或逆转录病毒载体。

6、本发明还提供一种嵌合抗原受体t细胞，它是表达了权利要求1所述的以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体的t细胞。

7、优选的，包括将表达了权利要求1所述的以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体转入t细胞，并进行细胞培养，即得。

8、本发明还提供上述嵌合抗原受体t细胞在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。

9、优选的，所述药物用于治疗经过大分割放疗或立体定向放疗预处理后的实体肿瘤；

10、和/或，所述药物用于治疗her2阳性肿瘤。

11、本发明还提供一种药物，它是以上述嵌合抗原受体t细胞作为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的。

12、优选的，所述药物用于治疗经过放疗预处理后的实体肿瘤；

13、和/或，所述药物用于治疗her2阳性肿瘤。

14、本发明中，所述“经过大分割放疗或立体定向放疗预处理后的实体肿瘤”是指在使用本发明的car-t细胞进行实体肿瘤的治疗之前，首先采用大分割放疗(hypofracfionatedradiotherapy，hfrt)或立体定向放疗(stereotactic body radiation therapy，sbrt)对实体肿瘤进行预处理，使得实体肿瘤的微环境与预处理前发生变化，更加有利于car-t细胞的瘤内浸润而增强her2car-t细胞的抗肿瘤作用。

15、本发明以her2作为car-t细胞治疗实体瘤的靶点，构建靶向her2的特异性car分子并制备car-t细胞(her2 car-t)。本发明的her2car-t细胞具有特异性裂解杀伤her2阳性肿瘤的效果，能够抑制肿瘤生长，且效果优于现有技术中其他靶向her2的car-t细胞。此外，本发明还发现，对于实体瘤的治疗，在使用本申请的her2 car-t进行治疗前，利用放射处理能够通过肿瘤消融作用和对tme重塑，实现提升her2 car-t治疗效果的作用。因此，本发明在肿瘤免疫治疗中具有很好的应用前景。

16、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

17、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的编码核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种表达载体，其特征在于：它能够表达权利要求1所述的以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体。

3.按照权利要求2所述的表达载体，其特征在于：它是重组质粒载体、重组病毒或它们的组合。

4.按照权利要求3所述的表达载体，其特征在于：所述重组病毒为慢病毒载体或逆转录病毒载体。

5.一种嵌合抗原受体t细胞，其特征在于：它是表达了权利要求1所述的以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体的t细胞。

6.权利要求5所述的嵌合抗原受体t细胞，其特征在于：包括将表达了权利要求1所述的以her2作为相关性抗原的嵌合抗原受体转入t细胞，并进行细胞培养，即得。

7.权利要求6所述的嵌合抗原受体t细胞在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。

8.按照权利要求7所述的用途，其特征在于：所述药物用于治疗经过大分割放疗或立体定向放疗预处理后的实体肿瘤；

9.一种药物，其特征在于：它是以权利要求6所述的嵌合抗原受体t细胞作为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的。

10.按照权利要求9所述的药物，其特征在于：所述药物用于治疗经过放疗预处理后的实体肿瘤；

技术总结本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体、表达载体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法、用途和制成的药物。本发明以HER2作为CAR‑T细胞治疗实体瘤的靶点，构建了一种靶向HER2的特异性CAR分子并制备了对应的CAR‑T细胞(HER2CAR‑T)。相比与现有的其他以HER2为靶点的CAR‑T细胞，本发明提供的HER2CAR‑T细胞对HER2阳性肿瘤具有更好的治疗效果。此外，通过HFRT、SBRT等放疗手段预处理后，能够进一步提升HER2CAR‑T细胞的治疗效果。因此，本发明提供的HER2CAR‑T细胞在肿瘤的免疫治疗中具有很好的应用前景。技术研发人员：陈念永,杨江萍,王玮受保护的技术使用者：四川大学华西医院技术研发日：技术公布日：2024/9/29