L-5-甲基四氢叶酸钙中杂质C和杂质D的制备方法与流程

本发明涉及药物合成，特别是涉及一种l-5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法。

背景技术：

1、药物杂质与药物的安全性、稳定性密切相关，因此，对杂质进行科学分析、评估和研究，是药品研发的重要内容，也是保证药品中的杂质得到全面、有效控制的前提。

2、l-5-甲基四氢叶酸钙(l-5-mthf-ca)，又称(6s)-5-甲基四氢叶酸钙，是一种新型的叶酸类药物，可以预防神经管缺陷，治疗抑郁症，治疗巨幼红细胞贫血等。研究表明，该钙盐在摄取时或溶解时，完全离解成5-甲基四氢叶酸(5-mthf)与钙，然后作为5-甲基四氢叶酸(5-mthf)发挥作用，l-5-甲基四氢叶酸是叶酸类药物中唯一可以渗透过血脑屏障的药物，具有防治阿尔茨海默病(老年痴呆症)的作用，因此，它具有其他叶酸类药物无法比拟的优越性，具有巨大的市场前景。

3、鉴于l-5-甲基四氢叶酸钙的高临床价值，需要对l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或制剂进行质量研究。而在对l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂进行质量研究时，需要高纯度的杂质c和杂质d(以5位为手性中心的一对消旋体)作为对照品，该杂质是5-甲基四氢叶酸钙的主要降解杂质，usp2040规定其杂质限度不得过1.0％；且此杂质在稳定性放置期间加速条件下会显著增大，超出usp规定限度，对人体存在一定的安全隐患。目前未发现有制备该杂质的文献报道或专利声明。因此，进行该杂质的制备方法研究具有重要意义。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种l-5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，该方法所制得的杂质c、d可作为对照品用于l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量研究。

2、技术方案如下：

3、本发明的第一方面，提供一种5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，包括以下步骤：

4、将l-5-甲基四氢叶酸钙与氢氧化钠水溶液混合进行反应，制备破坏溶液；

5、对所述破坏溶液进行第一次液相制备色谱分离，收集馏分；

6、对所得馏分浓缩后进行第二次液相制备色谱分离，制得杂质c和杂质d；

7、所述第一次液相制备色谱分离的条件包括：流动相a为磷酸盐缓冲液，流动相b为甲醇，等度洗脱；

8、所述第二次液相制备色谱分离的条件包括：流动相c为甲醇，流动相d为水，等度洗脱。

9、在其中一个实施例中，所述氢氧化钠水溶液中，氢氧化钠与水的质量体积比为1g：(150-200)ml。

10、在其中一个实施例中，所述l-5-甲基四氢叶酸钙与氢氧化钠水溶液的质量体积比为5g：(100-800)ml。

11、在其中一个实施例中，所述第一次液相制备色谱分离的条件包括：流动相a与流动相b的体积比为(90-95)：(10-5)。

12、在其中一个实施例中，第二次液相制备色谱分离的条件包括：流动相c与流动相d的体积比为(5-10)：(95-90)。

13、在其中一个实施例中，所述第一次液相制备色谱分离还满足如下条件的至少一个：

14、(1)流速为12ml/min-15ml/min；

15、(2)检测波长为270nm-290nm；

16、(3)进样量为1ml-3ml；

17、(4)柱温为30℃-35℃；

18、(5)色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱。

19、在其中一个实施例中，所述第二次液相制备色谱分离还满足如下条件的至少一个：

20、(1)流速为12ml/min-15ml/min；

21、(2)检测波长为270nm-290nm；

22、(3)进样量为1ml-3ml；

23、(4)柱温为30℃-35℃。

24、在其中一个实施例中，所述反应的温度为室温；及/或

25、所述反应的时间为3天-5天；及/或

26、所述第二次液相制备色谱分离结束后，还包括如下步骤：收集目标馏分并蒸干，得所述杂质c和所述杂质d；

27、其中，所述蒸干的温度为60℃-90℃。

28、本发明的第二方面，提供如上所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法所制成的杂质c和杂质d，所述杂质c和杂质d具有式(i)所示的结构：

29、

30、本发明的第三方面，提供如上所述的杂质c和杂质d在l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量研究中的应用。

31、与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：

32、本申请提供了一种l-5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，该方法简单可行、分离时间短、分离效果好，可实现l-5-甲基四氢叶酸钙杂质c和杂质d的制备，所制得的杂质c和杂质d可以为l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量研究提供杂质对照品，对有效控制l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量具有重要的意义。

技术特征：

1.一种5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述氢氧化钠水溶液中，氢氧化钠与水的质量体积比为1g：(200-500)ml。

3.根据权利要求2所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述l-5-甲基四氢叶酸钙与氢氧化钠水溶液的质量体积比为5g：(100-800)ml。

4.根据权利要求1-3任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述第一次液相制备色谱分离的条件包括：流动相a与流动相b的体积比为(90-95)：(10-5)。

5.根据权利要求1-3任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述第二次液相制备色谱分离的条件包括：流动相c与流动相d的体积比为(5-10)：(95-90)。

6.根据权利要求1-3任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述第一次液相制备色谱分离还满足如下条件的至少一个：

7.根据权利要求1-3任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述第二次液相制备色谱分离还满足如下条件的至少一个：

8.根据权利要求1-3任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为室温；及/或

9.权利要求1-8任一项所述的5-甲基四氢叶酸钙中杂质c和杂质d的制备方法所制成的杂质c和杂质d，其特征在于，所述杂质c和杂质d具有式(i)所示的结构：

10.权利要求9所述的杂质c和杂质d在l-5-甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量研究中的应用。

技术总结本发明涉及一种L‑5‑甲基四氢叶酸钙中杂质C和杂质D的制备方法，包括以下步骤：将L‑5‑甲基四氢叶酸钙与氢氧化钠水溶液混合进行反应，制备破坏溶液；对所述破坏溶液进行第一次液相制备色谱分离，收集馏分；对所得馏分浓缩后进行第二次液相制备色谱分离，制得杂质C和杂质D。该方法简单可行、分离时间短、分离效果好，可实现L‑5‑甲基四氢叶酸钙杂质C和杂质D的制备，所制得的杂质C和杂质D可以为L‑5‑甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量研究提供杂质对照品，对有效控制L‑5‑甲基四氢叶酸钙原料药或其制剂的质量具有重要的意义。技术研发人员：李雪莲,易斌,王家龙,解艳,张红梅,张磊,李爱琴,宋新华,秘效媛受保护的技术使用者：北京斯利安药业有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/29