印楝木霉3302及其在生防与促生方面的应用

本发明属于微生物。更具体地，涉及新种印楝木霉3302以及该菌株在促生、拮抗尖孢镰刀菌或白绢病菌，以及防治相关病害中的应用。

背景技术：

1、木霉(trichoderma)是国际上公认的生物防治微生物，在植物真菌病害的生物防治中具有广泛的应用。而且，木霉不仅能直接抑制病原菌的生长，还可以定殖于植物根部，通过多种作用机制与植物互作，从而直接或间接地促进植物生长。因此木霉菌作为能够抑制病菌并对植物促生的生防菌，已得到广泛应用。

2、目前国内外商业化应用于植物病害防治的木霉主要有哈茨木霉(t.harzianum)、棘孢木霉(t.asperellum)和深绿木霉(t.atroviride)等，存在明显的来源木霉种类的同质性，影响了其生防产品的新功能的挖掘和新型木霉生物农药的开发。

3、现有生防木霉菌防效不一，而且微生物存在退化变异等问题。因此，不断挖掘新的具有生防促生效果的木霉新菌对于开发新型生物源农药、植物保护、生物菌肥和防治香蕉枯萎病等各个领域具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明旨在提供一种新的具有生防促生作用的木霉菌，本发明研究获得了新种印楝木霉(trichoderma azadirachtae)3302，其不仅对尖孢镰刀菌和白绢病菌具有较强的抑制作用，能够对相关病害有很好的防效，而且具有耐盐、促进水稻、香蕉生长发育等多种作用。

2、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

3、本发明提供了一种新的印楝木霉(trichoderma azadirachtae)3302，于2024年5月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为cgmccno.3.27235。

4、进一步地，所述印楝木霉3302的tef1-α序列如seq id no.1所示，

5、进一步地，所述印楝木霉3302的rpb2序列如seq id no.2所示。

6、本发明提供了所述seq id no.1所示tef1-α序列或seq id no.2所示rpb2序列在鉴定所述印楝木霉3302中的应用。具体应用方式如：检测seq id no.1所示tef1-α序列或seq id no.2所示rpb2序列的试剂在制备鉴定所述印楝木霉3302的产品中的应用。

7、本发明还包括所述印楝木霉3302的培养物，所述培养物是将印楝木霉3302在微生物培养基中培养得到的物质。

8、进一步地，所述微生物培养基为能实现印楝木霉3302生长扩繁的培养基，包括但不限于pda、pd培养基、pdam木霉选择性培养基、cmd玉米粉葡萄糖琼脂培养基、sna低营养琼脂培养基、mea麦芽汁琼脂培养基，以及其他为实现更好印楝木霉3302生长或代谢的改进培养基。

9、进一步地，所述培养物为印楝木霉3302的孢子悬液、菌悬液和/或发酵液。

10、进一步地，所述孢子悬液为印楝木霉3302在pda固体培养基培养产孢后，用无菌水冲刷，冲刷液过滤去掉菌体所得。

11、进一步地，所述孢子悬液浓度为1.0×101个/ml-1.0×1010个/ml，优选1.0×106个/ml孢子悬浮液。

12、进一步地，所述菌悬液为将所述印楝木霉3302在pda固体培养基活化后转接至液体培养基培养，过滤去掉滤液后，将菌体沥干粉碎后加无菌水所得。可选地，液体培养基可选pd培养基。

13、进一步地，所述菌悬液浓度为1％-10％，优选2％菌悬液。

14、进一步地，所述发酵液为将所述印楝木霉3302在pda固体培养基活化后转接至液体培养基培养，过滤取滤液，滤液离心取上清液，即得印楝木霉3302的发酵液。可选地，液体培养基可选pd培养基。

15、进一步地，所述发酵液浓度为1％-10％。

16、本发明还提供了一种微生物菌剂或肥料，该微生物菌剂或肥料含有所述印楝木霉3302，和/或印楝木霉3302的培养物。

17、进一步地，所述微生物菌剂或肥料的剂型为片剂、种衣剂、干悬浮剂、水分散粒剂或可湿性粉剂。

18、本发明提供了上述技术方案所述的印楝木霉3302或印楝木霉3302的培养物或印楝木霉3302的微生物菌剂或肥料在促进水稻或香蕉生长、抑制尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum f.sp.cubense tropical race 4，foctr4)或白绢病菌(sclerotium rolfsiisacc)，或防治尖孢镰刀菌和/或白绢病菌引起的植物病害中的应用。

19、本发明还提供了上述技术方案所述的印楝木霉3302或印楝木霉3302的培养物或印楝木霉3302的微生物菌剂或肥料在制备能够促进水稻或香蕉生长、抑制尖孢镰刀菌或白绢病菌，和/或防治尖孢镰刀菌和/或白绢病菌引起的植物病害的产品中的应用。

20、本发明具有以下有益效果：

21、本发明分离得到一种木霉新种，即印楝木霉(trichoderma azadirachtae)3302，该菌具有拮抗尖孢镰刀菌和白绢病菌的作用，可用于粮食作物、经济作物等植物的相关病害防治，同时具有较好的耐盐胁迫能力，环境适应性好。另外，该菌株还具有较好的促进水稻和香蕉生长发育的作用，对种子的萌发、根长、根系和幼苗的生长具有显著促进作用，具有很好的应用价值。

技术特征：

1.一种新的印楝木霉(trichoderma azadirachtae)3302，于2024年5月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为cgmcc no.3.27235。

2.权利要求1所述印楝木霉3302的tef1-α序列，其特征在于，序列如seq id no.1所示。

3.权利要求1所述印楝木霉3302的rpb2序列，其特征在于，序列如seq idno.2所示。

4.seq id no.1所示tef1-α序列或seq id no.2所示rpb2序列在鉴定权利要求1所述印楝木霉3302中的应用。

5.权利要求1所述印楝木霉3302的培养物，其特征在于，所述培养物是将权利要求1所述的印楝木霉3302在微生物培养基中培养得到的物质。

6.根据权利要求5所述的培养物，其特征在于，所述培养物为印楝木霉3302的孢子悬液、菌悬液和/或发酵液。

7.一种微生物菌剂或肥料，其特征在于，含有权利要求1所述的印楝木霉3302，和/或权利要求5-6任一所述的培养物。

8.根据权利要求7所述的微生物菌剂或肥料，其特征在于，所述微生物菌剂或肥料的剂型为片剂、种衣剂、干悬浮剂、水分散粒剂或可湿性粉剂。

9.权利要求1所述的印楝木霉3302或权利要求5-6任一所述的培养物或权利要求7-8任一所述微生物菌剂或肥料在促进水稻或香蕉生长、抑制尖孢镰刀菌或白绢病菌，或防治尖孢镰刀菌和/或白绢病菌引起的植物病害中的应用。

10.权利要求1所述的印楝木霉3302或权利要求5-6任一所述的培养物或权利要求7-8任一所述微生物菌剂或肥料在制备能够促进水稻或香蕉生长、抑制尖孢镰刀菌或白绢病菌，和/或防治尖孢镰刀菌和/或白绢病菌引起的植物病害的产品中的应用。

技术总结本发明属于微生物技术领域，公开了一种新的印楝木霉(Trichoderma azadirachtae)3302菌株及其在生防促生上的应用。印楝木霉3302已于2024年5月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.3.27235。本发明的印楝木霉3302是一个新种，具有拮抗尖孢镰刀菌和白绢病菌的作用，对相关病害，如香蕉枯萎病有较好的防治效果，可用于粮食作物和经济作物等相关病害的防治；同时具有较好的耐盐胁迫能力，环境适应性好；另外，该菌株还具有较好的促进植物生长发育的作用，对水稻种子的萌发和根长、香蕉幼苗的生长均具有显著的促进作用，具有很好的应用价值。技术研发人员：董章勇,黄秋荣,罗梅,宋汉达受保护的技术使用者：仲恺农业工程学院技术研发日：技术公布日：2024/10/17