一种氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的精制方法与流程

本发明属于药物化学，具体涉及一种氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的精制方法，还涉及到精制过程中新发现的二聚体杂质、其制备方法、组合物、应用和检测方法。

背景技术：

1、氨基甲酸(r)-1-芳基-2-四唑-2-基乙酯类化合物可用于治疗中枢神经系统疾病，其中氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯由韩国sk生物制药公司开发，于2019年由fda批准在美国上市，剂型为速释片剂，用于治疗成年患者的部分性癫痫发作。氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯(式i所示化合物)结构式如下：

2、

3、已知地，氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯在制备过程中有几个主要杂质比较难以清除，包括：(1)自身过度反应生成的2n醇(以下称化合物a)；(2)同分异构体杂质(以下称化合物b)，

4、

5、专利cn101228138b公开了其粗品用二氯甲烷/乙醚(体积比1:1)混合溶剂重结晶，该精制方法对2n醇清除率较高，但是对同分异构体杂质清除效果一般，无法满足药品注册法规关于有关物质限度要求，而且收率较低。

6、专利cn102574821b公开了其粗品经异丙醇/正庚烷(体积比1:2)混合溶剂重结晶，虽然该精制方法能部分去除2n醇和同分异构体杂质，但整体去除效果并不理想，尤其是在放大生产后，无法将主要工艺杂质控制在合理限度，并且该方法收率较低，导致生产成本高。

7、因此，需要开发一种新的氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的精制方法，以期在保证较高收率的同时可以整体上更好地清除制备过程中产生的杂质。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种新的氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的精制方法，该方法可以一次性清除多种主要杂质，且具有操作方法简单、重现性好、收率高、成本低，适合工业化生产中的一个或多个优势。

2、本发明第一方面，提供了一种式ii所示化合物：

3、其制备方法及应用。

4、所述式ii所示化合物的制备方法，包括：将式ii-1化合物与n,n-羰基二咪唑经缩合反应制备式ii化合物；

5、反应式如下：

6、

7、进一步，所述反应使用的溶剂为卤代烷烃、质子性溶剂、非质子性极性溶剂中的任一种或其组合，优选卤代烷烃。

8、进一步，所述卤代烷烃选自二氯甲烷、三氯甲烷、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷中的任一种或多种的组合，优选二氯甲烷和/或氯仿。

9、进一步，所述质子性溶剂为水或醇类。优选地，所述醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇中的任一种或多种的组合。

10、进一步，所述非质子性极性溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基亚砜(dmso)、丙酮中的任一种或多种的组合。

11、进一步，所述反应温度为0-30℃，优选室温。

12、本发明的式ii化合物可作为对照品用于控制氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的原料药或其制剂的质量。因此，在本发明另一方面，提供了式ii化合物在氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的原料药或其药物制剂的质量控制中作为标准品或对照品的应用。

13、式ii化合物是发明人在氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的制备过程中新发现的二聚体杂质，目前现有技术未有报道。发明人在研究中发现通过使用cn101228138b公开的重结晶试剂二氯甲烷/乙醚虽然可以有效去除该杂质，但氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯收率非常低，产业化成本较高；采用cn102574821b公开的重结晶试剂异丙醇/正庚烷无法将式ii杂质降低到0.1％以内，特别是在进行工艺放大时式ii杂质含量随之升高，无法控制在合理范围内。

14、本发明第二方面，提供了一种氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的精制方法，包括：将氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯与芳烃类溶剂混合，升温溶清后，析晶，得到纯品。

15、优选，所述芳烃类溶剂选自苯，所述苯任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素和c1～6的烷基；所述c1～6的烷基例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基，1-甲基丙基、2-甲基丙基、叔丁基、戊基、1-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、2,2-二甲基乙基、己基等；优选，所述芳烃类溶剂选自苯、甲苯、乙苯、二甲苯、三甲苯、氯苯的任一种或其组合，更优选甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、混二甲苯、均三甲苯中的任一种或其组合，进一步优选甲苯，对二甲苯或混二甲苯。

16、优选，所述芳烃类溶剂的使用量为：每克氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯使用芳烃类溶剂的体积为1～10ml，优选2-6ml，更优选2ml、3ml、4ml、5ml、5.5ml或6ml。

17、优选，所述升温可根据所选用的芳烃类溶剂进行选择，通常升温温度为50～110℃，例如50～100℃、60～100℃、60～90℃、60～80℃、60～70℃、70～80℃、70～90℃、70～100℃、80～90℃、80～100℃、或90～100℃等。

18、所述析晶温度为-10～30℃，优选0～15℃，更优选0～10℃。

19、上述精制方法得到的晶体的x射线粉末衍射图在2θ值为12.43±0.2°、13.50±0.2°、14.82±0.2°、16.55±0.2°、17.10±0.2°、18.38±0.2°、20.30±0.2°处有特征峰。

20、进一步，所述晶体的x射线粉末衍射图还包括在2θ值为21.89±0.2°、23.08±0.2°、24.16±0.2°、24.70±0.2°、25.25±0.2°、26.49±0.2°、27.15±0.2°、30.04±0.2°、30.64±0.2°、32.77±0.2°、34.46±0.2°处中的一个或多个特征峰。

21、进一步，所述晶体具有基本上如图4所示的x射线粉末衍射图。

22、本发明第三方面，提供了一种药物组合物，其含有氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯，所述药物组合物中化合物a的含量不高于0.05％，化合物b的含量不高于0.05％，式ii化合物的含量不高于0.05％。

23、进一步，所述药物组合物，其中氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的hplc纯度不低于99.90％，优选不低于99.95％，更优选不低于99.96％。

24、进一步，所述药物组合物，其中化合物a的含量不高于0.03％，优选不高于0.01％，更优选不含化合物a。

25、进一步，所述药物组合物中化合物b的含量不高于0.04％，优选不高于0.03％。

26、进一步，所述药物组合物中式ii化合物的含量不高于0.03％，优选不高于0.02％，更优选不高于0.01％。

27、在另一个优选实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其含有氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯，所述药物组合物中化合物a的含量不高于0.05％，例如不高于0.03％、或者不高于0.02％、或者不高于0.01％，化合物b的含量不高于0.05％，例如不高于0.04％、或者不高于0.03％，式ii化合物的含量不高于0.05％，例如不高于0.03％、或者不高于0.02％、或者不高于0.01％，所述氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的hplc纯度不低于99.90％，例如不低于99.95％，或者不低于99.96％；进一步优选，所述药物组合物是由本发明所述精制方法获得。

28、在另一个优选实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其含有氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯，所述氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的hplc纯度不低于99.90％，例如不低于99.95％，或者不低于99.96％，所述药物组合物的制备方法包括，使氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯粗品加入到芳烃类溶剂中进行重结晶得到；优选所述芳烃类溶剂为苯、甲苯、乙苯、二甲苯、三甲苯、氯苯的中的一种或多种，更优选甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、混二甲苯、均三甲苯，特别优选甲苯或对二甲苯；进一步优选，所述氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯粗品与芳烃类溶剂的重量体积比为1:1～10(单位：g/ml)，例如1:2～6(单位：g/ml)；进一步优选，所述重结晶过程包括先将氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯粗品加入到芳烃类溶剂中升温溶解，然后降温析晶步骤，优选所述升温温度为50～110℃，例如50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃等任意两个数之间的范围；所述析晶温度为-10～30℃，例如0～15℃，更优选0～10℃。

29、进一步，所述药物组合物还包含药学上可接受的辅料。本发明所述的药学上可接受的辅料为本领域所熟知。适合于本发明组合物的制剂可选自口服制剂(如片剂)、肠胃外液体制剂等。口服制剂常用的辅料包括但不仅限于稀释剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂、着色剂等。稀释剂，如玉米淀粉、预胶化淀粉、马铃薯淀粉、小麦粉淀粉、糯米淀粉、甘薯淀粉、木薯淀粉、大米淀粉、蜂蜡玉米淀粉、蔗糖、无水乳糖、乳糖水合物、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、合成硅酸铝、羟丙基淀粉、微晶纤维素和结晶纤维素。崩解剂，如羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、无水乳糖、乳糖水合物、淀粉乙醇酸钠、交联聚维酮、羧甲基纤维素及其药学上可接受的盐、羟丙基纤维素、玉米淀粉和交联羧甲基纤维素及其药学上可接受的盐。润滑剂，如二氧化硅、胶体无水二氧化硅、三硅酸镁、磷酸三钙、硅酸钙、硅酸镁、胶体二氧化硅、粉状纤维素、淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、轻质无水硅酸、硬脂富马酸钠、聚乙二醇、矿物油、氢化植物油、硬脂酸锌和硬脂酸。表面活性剂，如聚山梨醇酯、油酰聚氧乙烯甘油酯、亚油酰/辛酰/己酰聚氧乙烯甘油酯、聚氧甘油酯、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、月桂基硫酸钠、油酸钠和磺基琥珀酸二辛酯钠。着色剂，如氧化铁红、氧化铁黄、铝色锭。

30、本发明第四方面，提供了上述精制方法获得的产品或上述药物组合物在制备治疗中枢神经系统疾病中的用途。

31、进一步，所述疾病选自焦虑症、抑郁症、惊厥症、癫痫症、偏头痛、双相性精神障碍、睡眠障碍、中风、神经性疼痛、认知缺陷、注意力缺陷多动障碍、神经变性和肌肉痉挛。

32、本发明第五方面，提供了一种检测氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的原料药或制剂中有关物质的方法，其中，所述有关物质包括化合物a、化合物b和式ii化合物；所述方法包括采用高效液相色谱方法，使用反相色谱柱，以磷酸二氢钾溶液与有机溶剂的混合液作为流动相，进行梯度洗脱，所述有机溶剂为乙腈或甲醇。

33、进一步地，提供了一种检测氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯的原料药或制剂中有关物质的方法，其中，所述有关物质包括化合物a、化合物b和式ii化合物；所述方法包括采用高效液相色谱方法，使用反相色谱柱，以磷酸二氢钾溶液-乙腈作为流动相，进行梯度洗脱。

34、进一步，所述反相色谱柱为五氟苯基色谱柱或者十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，所述五氟苯基色谱柱优选为ultimate pfp，更优选规格为4.6mm×250mm，5μm，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱优选poroshell c18柱，如cs-c18，hph-c18，ec-c18等。

35、进一步，所述磷酸二氢钾溶液的ph为2.0-4.0，优选2.5-3.5，更优选3.0，进一步优选所述磷酸二氢钾溶液的ph值是通过使用磷酸调节得到。。

36、进一步，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.005-0.050mol/l，例如0.005mol/l，0.006mol/l，0.007mol/l，0.008mol/l，0.009mol/l，0.010mol/l，0.011mol/l，0.012mol/l，0.013mol/l，0.014mol/l，0.015mol/l，0.020mol/l，0.025mol/l，0.030mol/l，0.035mol/l，0.040mol/l，0.045mol/l或0.050mol/l及任意两个值之间的数。进一步，所述流动相包括流动相a和流动相b，其中流动相a为磷酸二氢钾溶液与有机溶剂的混合液，所述磷酸二氢钾溶液与有机溶剂的体积比为60-80：20-40，优选65-70：30-35；流动相b为磷酸二氢钾溶液与有机溶剂的混合液，所述磷酸二氢钾溶液与有机溶剂的体积比为40-60：40-60，优选50：50；其中所述有机溶剂为甲醇或乙腈，优选流动相a中的有机溶剂为甲醇或乙腈，流动相b中的有机溶剂为乙腈；

37、进一步，所述流动相使用0.005-0.050mol/l磷酸二氢钾溶液-乙腈，优选0.005-0.015mol/l磷酸二氢钾溶液-乙腈，更优选0.010mol/l磷酸二氢钾溶液-乙腈。

38、进一步，所述流动相包括流动相a和流动相b，其中流动相a中磷酸二氢钾溶液与乙腈体积比为60-80：20-40，优选70：30；流动相b中磷酸二氢钾溶液与乙腈体积比为40-60：40-60，优选50：50。

39、进一步，流速为0.5-1.5ml/min，优选0.5～1.0ml/min。

40、进一步，检测波长为205-225nm，优选215nm。

41、进一步，柱温为20-40℃，优选30-40℃，更优选35℃。

42、进一步，进样体积为5-15μl，优选5～10μl。

43、进一步，供试品使用乙腈/水的混合液作为稀释剂；优选乙腈与水体积比为1-2：1，更优选为1：1，或者用流动相a或流动相b作为稀释剂配制供试品溶液。

44、进一步，供试品溶液浓度为0.5-2.0mg/ml，优选0.5-1.5mg/ml，更优选1.0mg/ml。

45、进一步，所述梯度洗脱条件如下表：

46、 时间(min) 流动相a(体积％) 流动相b(体积％) 0 90-100 0-10 5 90-100 0-10 20 0-10 90-100 30 0-10 90-100 31 90-100 0-10 40 90-100 0-10

47、。

48、优选地，所述梯度洗脱条件如下表：

49、

50、

51、本发明所述的梯度洗脱，也可以根据流动相a和流动相b的比例调整以及分离度要求等需求进行调整，例如延长或缩短洗脱时间。

52、与现有技术相比，本发明具有下述优点：

53、本发明的精制方法采用甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、混二甲苯、均三甲苯等芳烃类溶剂，相比现有技术使用的二氯甲烷/乙醚、异丙醇/正庚烷体系，可以基本上将2n醇杂质(化合物a)清除干净，并将同分异构体杂质(化合物b)和式ii所示二聚体杂质的含量降到较低水平，工艺放大后较稳定，各杂质的含量仍在标准范围内，且氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯收率较高。

54、除非另有说明，本发明所述的百分含量均为质量百分含量。

55、本发明上下文中所述“式i化合物”是指氨基甲酸(r)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基乙酯，结构式如下：

56、

57、本发明上下文所述“室温”指25±5℃；

58、所述c1～6烷基是指具有1～6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，戊基，己基等；

59、所述“混二甲苯”是指工业上常用的二甲苯混合液，其主要是邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯的混合物。