一种转运RNA衍生片段在制备黑色素瘤制剂、产品中的应用

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种转运rna衍生片段在制备黑色素瘤制剂、产品中的应用。

背景技术：

1、皮肤黑色素瘤(cutaneous melanoma,cm)为一种高度恶性的皮肤肿瘤，具有强侵袭转移性和很高的致死率。近年来，cm发病率在全世界范围内以2～7％的速度递增，成为严重的公共卫生问题，引起社会公众越来越多的关注。处于早期阶段的黑素瘤患者经手术切除治疗后预后较好，5年生存率可达90％以上，而中晚期阶段的黑素瘤致死率较高，病人预后差，5年生存率仅为5～16％。尽管近年新型治疗策略如分子靶向治疗及免疫治疗等中晚期cm的治疗手段取得了一定进步，但疗效甚微，响应率低，仍有大量患者死于转移性疾病。因此，控制皮肤黑素瘤的转移是改善患者预后的关键所在。探索与鉴别cm恶性进展期的重要调控分子，能够为研发新的药物作用靶点，以及肿瘤转移的预防、治疗及预后判断提供有价值的帮助，具有重要的理论以及临床意义。

2、转运rna衍生片段(trna-derived fragments,trfs)是一类由转运rna(trna)剪切形成的长度小于50nt的非编码rna。按来源不同可分为：trf-5、trf-3和trf-1等。研究显示，trf并非trna随机降解产物，而是在特定条件下由特定的rna剪切酶精确剪切产生，而且其异常表达往往与特定生理病理状态高度相关，为一类具有重要功能的新型小rna分子。trf可以多种模式发挥广泛性调控作用，如类mirna作用模式及竞争结合蛋白(rbps)模式等。现有研究发现，与正常细胞相比，肿瘤中诸多trfs存在着差异性表达并能通过抑癌或致癌途径扮演着抑癌或致癌基因的角色。trfs有多种核苷酸修饰，结构稳定不易降解，保守性高，并具有较强的组织表达特异性。以上这些特征，使得trfs在肿瘤诊断及治疗方法的开发上具有广阔的前景。trfs的异常表达可能成为肿瘤潜在的诊疗、预防及预后判断的靶点，有望成为肿瘤诊疗的新方向。因此，从trfs角度挖掘cm新型分子靶标并探讨机制十分必要。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种转运rna衍生片段在制备黑色素瘤制剂、产品中的应用。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

3、一种转运rna衍生片段在制备抑制黑色素瘤细胞增殖、细胞凋亡制剂中的应用。

4、其中，所述的转运rna衍生片段为3'u-trna-ser-tga-1-1_l20，其基因在基因组上的定位为：chr10-69524261-69524342，对应的trna为chr10.trna2-ser tga。

5、具体的，所述的转运rna衍生片段，其核苷酸序列如seq id no.1所示，即gaagcgggug cucuu auuuu。

6、其中，所述的黑色素瘤细胞包括黑色素瘤细胞a375、黑色素瘤细胞a2058、黑色素瘤细胞sk-mel-28、黑色素瘤细胞wm3211和/或黑色素瘤细胞wm793b。

7、一种转运rna衍生片段在制备抑制黑色素瘤细胞迁移、侵袭制剂中的应用。

8、其中，所述的转运rna衍生片段为3'u-trna-ser-tga-1-1_l20，其基因在基因组上的定位为：chr10-69524261-69524342，对应的trna为chr10.trna2-ser tga。

9、具体的，所述的转运rna衍生片段，其核苷酸序列如seq id no.1所示，即gaagcgggug cucuu auuuu。

10、其中，所述的黑色素瘤细胞包括黑色素瘤细胞a375、黑色素瘤细胞a2058、黑色素瘤细胞sk-mel-28、黑色素瘤细胞wm3211和/或黑色素瘤细胞wm793b。

11、上述转运rna衍生片段在制备预防、治疗和/或预后黑色素瘤疾病产品中的应用也在本发明所保护的范围之内。

12、其中，所述的产品为试剂或试剂盒。

13、其中，所述的产品中包括特异性引物。

14、在本发明的一些实施例中，所述的特异性引物包括但不限于上游引物f：5'-ggtgaagcgggtgctct-3'和下游引物r：5'-gtgcgtgtcgtggagtcg-3'。

15、具体的，通过检测转运rna衍生片段的表达量对黑色素瘤疾病进行检测或诊断评估。

16、在本发明的一些实施例中，通过甲基化和胆固醇修饰以及在两端添加修饰序列化学合成3'u-trna-ser-tga-1 -1_l20模拟物，发现其可以抑制人黑素瘤细胞的增殖，促进细胞的凋亡，同时使得细胞的迁移、侵袭能力下降，从而抑制皮下移植瘤的生长。说明对3'u-trna-ser-tga-1-1_l20表达的检测有助于对皮肤黑素瘤疾病进展及预后进行判断，对3'u-trna-ser-tga-1-1_l20表达的上调可抑制黑素瘤的发展进程，从而为疾病治疗提供有价值的帮助。

17、有益效果：

18、本发明经高通量小分子rna测序及qrt-pcr验证首次发现了一种在转移性黑素瘤中低表达的trna来源的片段3'u-trna-ser-tga-1-1_l20，其可以抑制细胞的增殖及迁移侵袭能力，并促进细胞凋亡。trf分子具有稳定性高不易降解，组织特异性强、灵敏度高等优点，另外通过trizol、异丙醇等试剂，仅需少量组织(5-15mg左右)即可提取出纯度浓度较好，满足trf检测的rna；实时定量sybr荧光染料法检测具有快捷，经济，方便，特异性强等特点。

19、本发明公开的3'u-trna-ser-tga-1-1_l20检测方法或试剂盒为病理分级，为临床分期及疾病进展及预后判断的有效工具开发提供了帮助，具有良好的临床应用前景。3'u-trna-ser-tga-1-1_l20或其激活剂可以用于制备治疗转移性黑素瘤的药物，或用于筛选适合于治疗黑素瘤的药物，为基因治疗药物开发等应用提供了重要依据和治疗新策略。

技术特征：

1.一种转运rna衍生片段在制备抑制黑色素瘤细胞增殖、细胞凋亡制剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的转运rna衍生片段，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的黑色素瘤细胞包括黑色素瘤细胞a375、黑色素瘤细胞a2058、黑色素瘤细胞sk-mel-28、黑色素瘤细胞wm3211和/或黑色素瘤细胞wm793b。

4.一种转运rna衍生片段在制备抑制黑色素瘤细胞迁移、侵袭制剂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的转运rna衍生片段，其核苷酸序列如seq id no.1所示。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的黑色素瘤细胞包括黑色素瘤细胞a375、黑色素瘤细胞a2058、黑色素瘤细胞sk-mel-28、黑色素瘤细胞wm3211和/或黑色素瘤细胞wm793b。

7.转运rna衍生片段在制备预防、治疗和/或预后黑色素瘤疾病产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的产品为试剂或试剂盒。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，通过检测转运rna衍生片段的表达量对黑色素瘤疾病进行检测或诊断评估。

技术总结本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种转运RNA衍生片段在制备黑色素瘤制剂、产品中的应用。本发明经高通量小分子RNA测序及qRT‑PCR验证首次发现了一种在丝氨酸tRNA来源的3'U‑tRNA‑Ser‑TGA‑1‑1_L20在皮肤黑素瘤转移组织中较原位组织发生了差异性表达下调。使用3'U‑tRNA‑Ser‑TGA‑1‑1_L20模拟物上调黑素瘤细胞内该tRF分子的表达，可抑制体内外细胞的增殖，促进细胞凋亡，同时细胞迁移、侵袭能力亦下降。说明对3'U‑tRNA‑Ser‑TGA‑1‑1_L20表达的检测有助于对皮肤黑素瘤疾病进展及预后进行判断，对3'U‑tRNA‑Ser‑TGA‑1‑1_L20表达的上调可抑制黑素瘤的发展进程，从而为后续用于制备治疗转移性黑素瘤的药物，或用于筛选适合于治疗黑素瘤的药物，为基因治疗药物开发等应用提供了重要依据和治疗新策略。技术研发人员：倪娜娜,孙建方,陈浩,徐秀莲,王小坡受保护的技术使用者：中国医学科学院皮肤病医院（中国医学科学院皮肤病研究所）技术研发日：技术公布日：2024/10/17