复合佐剂及其制备方法和应用与流程
- 国知局
- 2024-10-21 14:59:51
本发明属于生物医药工程领域,特别涉及一种复合佐剂及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
背景技术:
1、toll样受体(toll-like receptors;tlrs)是参与先天免疫的一类重要蛋白质分子,可以在多种细胞(如巨噬细胞和树突状细胞)中表达。tlrs是单体跨膜的非催化性受体,可以识别由微生物(细菌、病毒和寄生虫等)产生的结构保守的分子。一旦这些微生物突破如皮肤或肠道粘膜的物理屏障,就会被tlrs识别,继而激活免疫细胞应答。免疫系统之所以具有广泛识别病原微生物的能力,某种程度上是由于toll样免疫受体的广泛存在。在哺乳动物中至少存在10种不同的tlrs。
2、tlr3是tlr家族的成员,能够介导1型干扰素(ifn-α/β)、促炎细胞因子(il-6,il-10)和趋化因子的转录诱导,从而共同建立宿主的抗病毒反应。
3、双链rna类似物(例如聚肌胞苷酸(poly(i:c)),poly iclc和poly i:c12u等)为tlr3的配体,能够被tlr3识别并激活tlr3。tlr3在胞内识别poly(i:c)并被其激活后,能够募集下游的衔接蛋白myd88和trif,tlr3可通过myd88依赖途径诱导炎症性细胞因子如il-1、tnf-α、il-6和il-12的表达,参与非特异性抗病毒反应,同时通过myd88非依赖途径诱导共刺激分子cd80和cd86以及ifn-β、ip-10等抗病毒性细胞因子的表达,参与诱导dc的分化成熟以及抗病毒免疫反应。在体内,以聚肌胞苷酸辅助的疫苗可以诱导强力的细胞毒性t细胞免疫应答。
4、现有技术中提供了包含聚肌胞苷酸的脂质体佐剂,然而脂质体的制备工艺比较复杂,成本较高,而且脂质体对不同物质的包封率差别很大,对有些抗原的包封率很低,从而影响免疫效果。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种复合佐剂,可以降低生产成本,并能增强疫苗的免疫效果。
2、为了达到上述目的,一方面,本发明提供了一种复合佐剂,包含水包油乳液和tlr3激动剂,所述水包油乳液包含阳离子脂质,所述tlr3激动剂选自poly i:c、poly iclc和poly i:c12u中的至少一种。
3、在一些实施方式中,所述阳离子脂质选自dotap、dotma、dop-deda、dodma、dmg-peg2000、dlin-mc3-dma和dogs中的一种或多种。
4、在一些实施方式中,所述水包油乳液还包含可代谢油和乳化剂。
5、在一些实施方式中,所述可代谢油为角鲨烯。
6、在一些实施方式中,所述乳化剂包含聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(吐温)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、辛苯聚醇-9(曲拉通x-100或聚乙二醇辛基苯基醚)以及卵磷脂中的一种或多种。
7、在一些实施方式中,所述乳化剂包含吐温80和司盘85中的一种或两种。
8、在一些实施方式中,所述水包油乳液进一步包含α-生育酚。
9、在一些实施方式中,所述水包油乳液包含dotap、角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
10、在一些实施方式中,所述水包油乳液包含0.01-1wt.%的dotap、2-10wt.%的角鲨烯、2-10wt.%的α-生育酚和0.3-3wt.%的吐温80。
11、在一些实施方式中,所述水包油乳液包含dotap、角鲨烯、司盘85和吐温80。
12、在一些实施方式中,所述水包油乳液包含0.01-1wt.%的dotap、2-10wt.%角鲨烯、0.2-1.0wt.%吐温80和0.1-1.0wt.%司盘85。
13、在一些实施方式中,所述复合佐剂中tlr3激动剂的含量为0.1-5mg/ml。
14、在一些实施方式中,所述人用剂量的复合佐剂包含:5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚、1-10mg吐温80、0.1-1mg dotap和0.5-2.5mg poly i:c;优选为10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚、4.86mg吐温80、0.5mg dotap和0.5mg poly i:c。
15、在一些实施方式中,所述人用剂量的复合佐剂包含:5-15mg角鲨烯、1-10mg司盘85、1-10mg吐温80、0.1-1mg dotap和0.2-2.5mg poly i:c;优选为9.75mg角鲨烯、1.175mg司盘85、1.175mg吐温80、0.5mg dotap和0.5mg poly i:c。
16、在一些实施方式中,所述tlr3激动剂为poly i:c,其分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间,特别是介于66,000至660,000道尔顿之间。
17、另一方面,本发明提供了一种制备所述复合佐剂的方法,包括将包含阳离子脂质的油相与含有乳化剂的水相混合后乳化并进行均质处理形成水包油乳液,将所述水包油乳液与tlr3激动剂混合得到所述复合佐剂。
18、在一些实施方式中,所述水相为磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、tris-hcl缓冲液、醋酸盐缓冲液或柠檬酸-磷酸缓冲液。
19、在一些实施方式中,所述方法进一步包括在均质后进行过滤。
20、另一方面,本发明还提供了另一种制备所述复合佐剂的方法,包括将含有阳离子脂质的油相与含有乳化剂的水相经微流控装置混合形成水包油乳液,将所述水包油乳液与tlr3激动剂混合得到所述复合佐剂。
21、又一方面,本发明还提供了所述复合佐剂在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
22、又一方面,本发明还提供了一种疫苗组合物,包含一种或多种抗原以及所述复合佐剂。
23、在一些实施方式中,所述抗原为来源于病毒、细菌、真菌、寄生虫或肿瘤的一种或多种抗原。
24、在一些实施方式中,所述抗原来源于人乳头瘤病毒(hpv)、引发手足口病的肠道病毒、结核杆菌、单纯疱疹病毒(hsv)、巨细胞病毒(cmv)、水痘带状疱疹病毒(vzv)、呼吸道合胞病毒(rsv)、流感病毒、新型冠状病毒(sars-cov-2)、肝炎病毒和狂犬病毒中的至少一种。
25、相比现有技术,本发明具有如下有益效果:
26、本发明所述复合佐剂中各组分的原料较易获得,制备工艺简单且成本低;本发明采用包含阳离子脂质的水包油乳液与poly i:c形成的复合佐剂,性质稳定,副作用小,polyi:c与包含阳离子脂质的水包油乳液发挥协同作用,可以增强免疫效果。
技术特征:1.一种复合佐剂,其特征在于,包含水包油乳液和tlr3激动剂,所述水包油乳液包含阳离子脂质,所述tlr3激动剂选自polyi:c、polyiclc和polyi:c12u中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的复合佐剂,其特征在于,所述阳离子脂质选自dotap、dotma、dop-deda、dodma、dmg-peg2000、dlin-mc3-dma和dogs中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液还包含可代谢油和乳化剂,优选的,所述可代谢油为角鲨烯。
4.根据权利要求3所述的复合佐剂,其特征在于,所述乳化剂包含聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(吐温)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、辛苯聚醇-9(曲拉通x-100或聚乙二醇辛基苯基醚)以及卵磷脂中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的复合佐剂,其特征在于,所述乳化剂包含吐温80和司盘85中的一种或两种。
6.根据权利要求3所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液进一步包含α-生育酚。
7.根据权利要求6所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液包含dotap、角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
8.根据权利要求7所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液包含0.01-1wt.%的dotap、2-10wt.%的角鲨烯、2-10wt.%的α-生育酚和0.1-3wt.%的吐温80。
9.根据权利要求5所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液包含dotap、角鲨烯、司盘85和吐温80。
10.根据权利要求9所述的复合佐剂,其特征在于,所述水包油乳液包含0.01-1wt.%的dotap、2-10wt.%角鲨烯、0.2-1.0wt.%吐温80和0.1-1.0wt.%司盘85。
11.根据权利要求1-10任一项所述的复合佐剂,其特征在于,所述复合佐剂中tlr3激动剂的含量为0.1-5mg/ml。
12.根据权利要求11所述的复合佐剂,其特征在于,所述人用剂量的复合佐剂包含:5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚、1-10mg吐温80、0.1-1mg dotap和0.2-2.5mg poly i:c;优选为10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚、4.86mg吐温80、0.5mg dotap和0.5mg poly i:c。
13.根据权利要求11所述的复合佐剂,其特征在于,所述人用剂量的复合佐剂包含:5-15mg角鲨烯、1-10mg司盘85、1-10mg吐温80、0.1-1mg dotap和0.2-2.5mg poly i:c;优选为9.75mg角鲨烯、1.175mg司盘85、1.175mg吐温80、0.5mg dotap和0.5mg poly i:c。
14.根据权利要求12或13所述的复合佐剂,其特征在于,所述tlr3激动剂为polyi:c,其分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间,特别是介于66,000至660,000道尔顿之间。
15.一种制备权利要求1-14任一项所述复合佐剂的方法,其特征在于,包括将含有阳离子脂质的油相与含有乳化剂的水相混合后乳化并进行均质处理形成水包油乳液,将所述水包油乳液与tlr3激动剂混合得到所述复合佐剂。
16.根据权利要求15所述的方法,其特征在于,所述方法进一步包括在均质后进行过滤。
17.一种制备权利要求1-14任一项所述复合佐剂的方法,其特征在于,包括将含有阳离子脂质的油相与含有乳化剂的水相经微流控装置混合形成水包油乳液,将所述水包油乳液与tlr3激动剂混合得到所述复合佐剂。
18.权利要求1-14任一项所述复合佐剂在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。
19.一种疫苗组合物,其特征在于,包含权利要求1-14任一项所述复合佐剂和至少一种抗原。
20.根据权利要求19所述的疫苗组合物,其特征在于,所述抗原为来源于病毒、细菌、真菌、寄生虫或肿瘤的一种或多种抗原,优选的,所述抗原来源于人乳头瘤病毒(hpv)、引发手足口病的肠道病毒、结核杆菌、单纯疱疹病毒(hsv)、巨细胞病毒(cmv)、水痘带状疱疹病毒(vzv)、呼吸道合胞病毒(rsv)、流感病毒、新型冠状病毒(sars-cov-2)、肝炎病毒和狂犬病毒中的至少一种。
技术总结本发明涉及一种复合佐剂,包含水包油乳液和TLR3激动剂,所述水包油乳液包含阳离子脂质,所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C<subgt;12</subgt;U中的至少一种。本发明所述复合佐剂组分的原料较易获得,制备工艺简单且成本低;本发明包含阳离子脂质的水包油乳液与TLR3激动剂形成的复合佐剂性质稳定,副作用小,可以提高免疫效果。技术研发人员:袁楚晓,姚文荣,吴双,王维龙,李超,罗士强,虎丽兴,梁婧,闫梅,张琼月,洪坤学,刘勇受保护的技术使用者:江苏瑞科生物技术股份有限公司技术研发日:技术公布日:2024/10/17本文地址:https://www.jishuxx.com/zhuanli/20241021/320123.html
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