一种专一选择性识别D-苏氨酸荧光探针的制备方法

本发明属于手性荧光检测，具体涉及一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法。

背景技术：

1、苏氨酸属于手性氨基酸，按空间构型可分为l型和d型，除了α位氨基的空间取向不同其他结构特征完全一致。虽然二者非常相似但它们发挥着不同的作用。体内的苏氨酸主要以l型存在，而且l-苏氨酸是人体的必需氨基酸，它具有恢复人体体力，促进生长发育的作用，同时也是重要的营养强化剂。相比于l-苏氨酸，d-苏氨酸几乎不具备生理活性，但也是一种重要的有机手性源，在某些手性化合物的不对称合成过程中具有不可替代的作用。有研究表明，在人体体液中存在极少量的d-苏氨酸，但目前d-苏氨酸在体内的形成途径、发挥的作用尚不清楚，对d-苏氨酸的研究还有待深入，因此实现d-苏氨酸的精准检测，对生命科学，医疗诊断，健康科学等领域具有重要意义。

2、但由于体内大量的l-氨基酸、多肽和其他胺类物质的干扰，人体内d-型氨基酸的分析非常困难，因此迫切需要开发新型检测分析技术，实现d-苏氨酸的高通量精准检测。目前针对手性氨基酸的检测分析方法包括：高效液相色谱法、液质联用法、电化学法、氨基酸自动分析仪法、离子色谱法、气质联用法等。不过这些方法都需要柱前衍生化处理，前处理过程复杂，耗时时间长，并且以上方法仅适用于体外检测，无法对手性氨基酸参与体内的生理活动进行实时准确的分析。相比而言，手性荧光检测技术具有选择性好、灵敏度高、检测时间短、操作难度低、无需前衍生化、同时检测多个信号分子、适用细胞内检测等优点。

3、随着科研人员对手性氨基酸荧光探针研究的逐渐深入，目前已开发了多种类型的手性荧光骨架。但目前针对对映选择性识别d-苏氨酸的手性荧光探针总体数量仍然十分稀少，可检测的d-苏氨酸浓度范围很小，无法实现高浓度下的d-苏氨酸检测，并且有的探针在识别过程中需要借助金属离子的络合作用，更重要的是专一性识别d-苏氨酸的手性荧光探针还未见报道。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，以实现高浓度下对d-苏氨酸的专一性荧光识别。

2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，包括以下步骤，

4、s1、将(r)-联萘酚、三乙胺与三氟甲磺酸酐共同反应，去除溶剂后，再与nicl2(dddp)和mebrmg分别作用，经硅胶柱纯化得(r)-2,2'-二甲基-1,1'-联萘；

5、s2、将(r)-2,2'-二甲基-1,1'-联萘的ccl4溶液与偶氮二异丁腈、n-溴代琥珀酰亚胺反应后，再加入dmso和碳酸氢钠反应，经硅胶柱纯化得(r)-[1,1'-联萘]-2,2'-二甲醛；

6、s3、将(r)-[1,1'-联萘]-2,2'-二甲醛与三乙酰氧基硼氢化钠混合充分反应，经硅胶柱纯化得目标化合物(r)-d1；

7、s4、结合s1-s3方法使用(s)-联萘酚同步合成(s)-d1。

8、进一步地，所述步骤s1中，(r)-联萘酚、三乙胺、三氟甲磺酸酐的当量比为1：2：2；nicl2与mebrmg的当量比为0.1：2。

9、进一步地，所述步骤s1中，硅胶柱纯化时，采用的洗脱剂由体积比为10：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

10、进一步地，所述步骤s2中，硅胶柱纯化时所用洗脱剂由体积比为6：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

11、进一步地，所述步骤s3中，硅胶柱纯化时所用洗脱剂由体积比为1：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

12、本发明的有益效果在于：

13、1、采用本发明制备方法成功地制备了一对基于联萘骨架的新型手性荧光探针(r)-d1、(s)-d1，本发明的荧光探针合成路线短，操作难度低。

14、2、本发明的荧光探针(r)-d1的醛基可与苏氨酸的氨基发生亚胺缩合反应，进一步地形成亚胺键后的d-苏氨酸可与探针的羟基形成分子内氢键，提高探针骨架刚性，从而产生专一性荧光增强效果。

15、3、本发明的荧光探针实现了对0-500当量d-苏氨酸的专一性荧光识别，其检测稳定性高，且不受氨基酸浓度影响。

16、4、本发明的荧光探针可实现未知对映体组成的苏氨酸溶液的对映体组成分析。

17、本发明的其他优点、目标和特征将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上对本领域技术人员而言是显而易见的，或者本领域技术人员可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

技术特征：

1.一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，(r)-联萘酚、三乙胺、三氟甲磺酸酐的当量比为1：2：2；nicl2与mebrmg的当量比为0.1：2。

3.根据权利要求1所述的一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，硅胶柱纯化时，采用的洗脱剂由体积比为10：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

4.根据权利要求1所述的一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，硅胶柱纯化时所用洗脱剂由体积比为6：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

5.根据权利要求1所述的一种专一选择性识别d-苏氨酸荧光探针的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中，硅胶柱纯化时所用洗脱剂由体积比为1：1的石油醚与乙酸乙酯组成。

技术总结本发明公开了一种专一选择性识别D‑苏氨酸荧光探针的制备方法，属于手性荧光检测技术领域，包括以下步骤，S1、将(R)‑联萘酚、三乙胺与三氟甲磺酸酐共同反应，去除溶剂后，再与NiCl<subgt;2</subgt;(dddp)和MeBrMg分别作用，经硅胶柱纯化得(R)‑2,2'‑二甲基‑1,1'‑联萘；S2、将(R)‑2,2'‑二甲基‑1,1'‑联萘的CCl<subgt;4</subgt;溶液与偶氮二异丁腈、N‑溴代琥珀酰亚胺反应后，再加入DMSO和碳酸氢钠反应，经硅胶柱纯化得(R)‑[1,1'‑联萘]‑2,2'‑二甲醛；S3、将(R)‑[1,1'‑联萘]‑2,2'‑二甲醛与三乙酰氧基硼氢化钠混合充分反应，经硅胶柱纯化得目标化合物(R)‑D1；S4、结合S1‑S3方法使用(S)‑联萘酚同步合成(S)‑D1。本发明的荧光探针(R)‑D1实现了对0‑500当量D‑苏氨酸的专一性荧光识别，其检测稳定性高，且不受氨基酸浓度影响。技术研发人员：曾潮元,余贤哲,董勤喜,樊彩玲,陈春妹,李丹,张斌杰受保护的技术使用者：海南大学技术研发日：技术公布日：2024/11/4