虎奶菇菌核甾醇活性物和其提取方法以及在降血脂上的应用

本技术涉及虎奶菇菌核代谢产物研究领域，尤其涉及虎奶菇菌核甾醇活性物和其提取方法以及在降血脂上的应用。

背景技术：

1、高脂血症已成为现代社会影响人体健康的严重疾病。高脂血症是指血液内脂质含量超过正常范围。血脂是指血浆中所含的脂类物质，主要包括甘油三酯(triglyceride，tg)、总胆固醇(total cholesterol，tc)、甘油一酯(monoglyceride)、甘油二酯(diglyc-eride)、磷脂(phospholipid)、胆固醇脂(cholerstery-lester)和游离脂肪酸(non-esterified fatty acid)等。其中，血清中甘油三酯(triglyceride，tg)、总胆固醇(totalcholesterol，tc)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，ldl-c)及高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，hdl-c)的含量高低与人体健康密切相关，是衡量人体内血脂水平的重要指标。

2、当tg，tc，ldlc过高及hdl-c过低，易导致血管黏连、血液通路变狭窄，由此引发动脉粥样硬化、冠心病、高血压、脑血栓等相关疾病，严重威胁人类健康，并且发病的年龄呈现低龄化趋势，因此对于高脂血症的治疗引起了全球医学界的高度重视。

3、食药用菌不仅含有丰富的营养成分，药理活性非常突出，具有抗肿瘤、调节免疫、抗氧化、保肝、溶栓等功能。《本草纲目》记载：虎奶菇子实体及菌核具有治疗胃病、高血压等疾病的药效；最新研究表明，虎奶菇菌核活性物质在治疗高血脂、肺结核、胃痛、神经系统等疾病药效突出，是一种有较好发展前景的食品和药品资源。

4、然而，针对于虎奶菇的功能性组分研究较少，特别是其对高血脂有治疗效果的机理不可得知。因此，对于珍贵食用菌虎奶菇而言，其药用价值的开发仍存在阻碍。

技术实现思路

1、本发明提供了虎奶菇菌核甾醇活性物和其提取方法以及在降血脂上的应用，针对于虎奶菇菌核甾醇活性物，揭示了作用原理以及具体的组成成分，有利于技术人员对降血脂药物的开发。同时，本研究改进乙醇回流和皂化的方法，提取虎奶菇菌核中的甾醇，考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比对提取结果的影响，再通过正交实验进行了优化，确定了最优条件，甾醇提取率提高。

2、本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

3、虎奶菇菌核甾醇活性物，以百分含量计，为谷甾醇29.6-32.5％、麦角甾醇49.3-55.2％和24-乙基-胆甾-5,23-二烯-3β-醇13.8-14.7％。

4、该虎奶菇菌核甾醇活性物的显著性进步优点：

5、药物作用于降血脂，且是否生效，是一个多指标综合评价的结果，如：

6、1、胆酸盐减小、胆固醇减少；

7、2、血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白(hdl-c)、低密度脂蛋白(ldl-c)。

8、针对点1：传统的药物(在不看其含量的前提下)，如谷甾醇和麦角甾醇在被单独地使用时，所起到的作用均是以抑制胆固醇的合成或者是促进胆固醇的分解，从而起到降血脂的目的为主。人体内胆固醇、胆酸与胆酸盐维持着一个动态平衡，当传统药物作用于体内时，仅仅是单方面地抑制胆固醇的合成或者是促进胆固醇的分解只能在短时间内起到降低血脂的作用。

9、在本技术中，通过特定比例的谷甾醇、麦角甾醇和24-乙基-胆甾-5,23-二烯-3β-醇，可结合人体内的胆酸盐，胆酸盐被结合后含量减少，会促使肝脏中的胆固醇降解生成胆酸盐以维持动态平衡。在此同时，可实现抑制胆固醇的合成，从而长期地使人体内胆固醇降低，进而达到降血脂的目的。

10、由于目前市面上的降血脂药物多为合成类药物，不免有其他化合物杂质。而本技术的虎奶菇菌核甾醇活性物来源于虎奶菇菌核，是药食两用的珍惜食用菌，长期食用没有副作用。

11、针对点2：虎奶菇菌核甾醇高剂量在小鼠模型试验后，能显著降低小鼠的体重、肝重及肝系数，能降低小鼠的血清tg和血清ldl-c，进而能达到调节血脂的目的。避免血脂异常增加心脏病和中风、动脉粥样硬化及心脑血管疾病的风险。

12、综述：虎奶菇菌核甾醇，与普通的植物甾醇类似。植物甾醇的结构与胆固醇相似，可在机体内竞争结合胆汁酸，从而使胆固醇的吸收受阻；植物甾醇不仅通过抑制胆固醇合成中的调控因子来抑制胆固醇的合成，还可干扰甘油三酯与脂肪酸的吸收，影响其代谢，减少甘油三酯的分泌以降低血脂。

13、作为优选地，虎奶菇菌核甾醇活性物，以百分含量计，为谷甾醇30.6％、麦角甾醇55.2％和24-乙基-胆甾-5,23-二烯-3β-醇14.2％。

14、在做了多组平行的检测后，发现该组方比例的效果最佳。

15、对虎奶菇菌核甾醇进行gc-ms进行分离和鉴定，所得各峰的质谱经计算机检索和数据库比对鉴定出各个甾醇的结构。结果表明，虎奶菇菌核中甾醇的种类较少，主要含有谷甾醇、麦角甾醇和24-乙基-胆甾-5,23-二烯-3β-醇。上述虎奶菇菌核甾醇活性物作为一个整体的组合物而言，经过实验证实，对降血脂具备显著的功效。

16、本发明还提供了一种虎奶菇菌核甾醇活性物的提取方法，该提取方法包括如下步骤：

17、s01、取虎奶菇菌核，加入乙醇，在80-90℃温度条件下回流提取4h，得到提取完成的料液混合物；其中，虎奶菇菌核和乙醇的料液比为1：10-20；

18、s02、料液混合物经真空抽滤后，得到滤液；

19、s03、滤液在35℃下减压蒸干，得到固体提取物；

20、s04、固体提取物用10％ koh-乙醇溶液复溶，得到提取液；

21、s05、提取液在65℃温度条件下皂化3h，得到皂化物；

22、本研究改进乙醇回流和皂化的方法，提取虎奶菇菌核中的甾醇，先考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比对提取结果的影响，再进行提取条件的优化，并确定了最优条件：提取时间80min、料液比1:10、乙醇浓度95％、提取温度90℃，该条件下甾醇含量为1.16mg/g。

23、s06、皂化物经离心后，取上清液；并于上清液中加入正己烷和水进行萃取，分层后得到上层有机相和下层水相；

24、水相用正己烷反复萃取后，直至得到的正己烷相为无色，随后合并多次得到的正己烷相；

25、所述的上层有机相与水相中多次萃取得到的正己烷相合并后，记为有机相；

26、s07、有机相经30％乙醇溶液洗涤至乙醇相无色且呈中性后，取出正己烷相经无水na2so4脱水10min，再加入少量活性炭粉末，于60℃下水浴搅拌脱色20min，抽滤后得到滤液，滤液在35℃温度条件下减压蒸干得到所述的虎奶菇菌核甾醇活性物。

27、作为优选，在步骤s01中，虎奶菇菌核和乙醇的料液比为1：20。

28、作为优选，在步骤s01中，提取温度为90℃。

29、本发明还提供了虎奶菇菌核甾醇活性物的应用，该应用包括如下(1)～(6)：

30、(1)结合血清中的胆酸盐；

31、(2)降低血清中的总胆固醇；

32、(3)降低血清中的甘油三酯；

33、(4)降低血清中的低密度脂蛋白；

34、(5)减轻肝脏重量；

35、(6)降血脂药物。

36、与现有技术相比，本技术的技术方案所具备的优点或有益效果包括：

37、1、植物甾醇的结构与胆固醇相似，可在机体内竞争结合胆汁酸，从而使胆固醇的吸收受阻；植物甾醇不仅通过抑制胆固醇合成中的调控因子来抑制胆固醇的合成，还可干扰甘油三酯与脂肪酸的吸收，影响其代谢，减少甘油三酯的分泌以降低血脂。

38、2、本研究改进乙醇回流和皂化的方法，提取虎奶菇菌核中的甾醇，先考察了提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比对提取结果的影响，再通过正交实验进行了优化，确定了最优条件。在该条件下，虎奶菇菌核中的甾醇得率提升，且得到的奶菇菌核甾醇纯度更好。