一种ITPRIPL1重组蛋白和抗体

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种itpripl1重组蛋白和itpripl1抗体。

背景技术：

1、itpripl1编码蛋白为inositol 1,4,5-trisphosphate receptor-interactingprotein-like 1(肌醇1,4,5-三磷酸受体相互作用蛋白样1)，既往未见到关于itpripl1功能的报道。根据uniprotkb数据库的注释，人类的itpripl1包括555个氨基酸，分为胞外区(1-103氨基酸)、跨膜区(104-124氨基酸)、胞内区(125-555氨基酸)。

2、t细胞是适应性免疫反应的关键效应细胞，在消除病原体和自身免疫性疾病中具有许多重要作用。t细胞有几个亚群，每个亚群具有不同的功能。在t细胞表面上发现的tcr(t细胞受体)是由α和β多肽链组成的异二聚体，构成大约95％的tcr群体，或者是γ和δ多肽链(pitcher和van oers，2003年)。每种多肽均包含恒定(c)和可变(v)区域。恒定区锚定在细胞膜中，而可变区在细胞外延伸并负责结合抗原。tcr的细胞质短尾缺乏转导信号的能力。细胞内信号传导由cd3蛋白复合物启动，该复合物包含细胞内免疫受体酪氨酸激活基序(itam)。

3、cd3(分化簇3)t细胞共受体是一种蛋白质复合物，由四个不同的链组成。在哺乳动物中，复合物包含一条cd3γ(γ)链，一条cd3δ(δ)链和两条cd3ε(ε)链。这些链与tcr和ζ链(zeta链)相关，在t淋巴细胞中产生激活信号。tcr，ζ链和cd3分子一起构成tcr复合物。cd3γ，cd3δ和cd3ε链是包含单个细胞外免疫球蛋白结构域的免疫球蛋白超家族的高度相关的细胞表面蛋白。tcr不能结合游离的表位/抗原，相反，tcr会结合酶切的与主要组织相容性复合物(mhc)相关的较大多肽的片段，这与人的人类白细胞抗原(hla)系统同义。这种相互作用发生在被称为免疫突触的空间中。i类mhc分子在人体所有有核细胞上表达，并向细胞毒性t细胞呈递抗原，这些细胞毒性t细胞上的cd8稳定mhc/tcr相互作用。细胞毒性t细胞的活化随后导致靶细胞的破坏。在巨噬细胞，b细胞和树突状细胞上发现ii类mhc。这些免疫细胞将抗原呈递给辅助性t细胞，并带有稳定mhc/tcr相互作用的cd4。mhc ii类和tcr之间的相互作用最终导致抗体介导的免疫反应。其他共刺激分子，例如cd45，cd28和cd2有助于免疫突触中的t细胞活化并启动tcr信号体的形成，tcr信号体是负责细胞内信号传导的大分子蛋白质复合物。

4、结合人cd3ε的几种抗体曾被报道，例如抗体okt3(参见例如kung，p.等人，science206(1979)347-349；salmeron，a.等人，j immunol 147(1991)3047-3052)，抗体ucht1(参见例如callard，re等，clin exp immunol 43(1981)497-505)或抗体sp34(参见例如pessano，s。等，embo j 4(1985)337-344)。目前已知的抗体中sp34是人食蟹猕猴交叉反应性的(conrad m.l.等人，cytometry a71(2007)925-933)。既往已知直接结合cd3ε胞外区的蛋白质都是抗体类分子，并未见到过天然的非抗体类蛋白(例如跨膜蛋白、分泌型蛋白等典型配体)结合cd3ε胞外区的报道。

5、神经纤毛蛋白-2即nrp-2(neuropilin-2)是一种可调节免疫细胞功能的受体(amj physiol lung cell mol physiol.2018)，被报道调控抗原递呈细胞的功能，并促进肿瘤的免疫逃逸(sohini roy等，cancer res.2018)；nrp2可影响免疫细胞的迁移、吞噬功能，以及免疫细胞间的接触(s schellenburg等，mol immunol.2017)。nrp2和plexin形成的共受体对淋巴管内皮细胞的迁移具有反趋化作用(liu x等，cell rep.2016)。nrp2还可调控细胞的nfkb信号通路，见(rizzolio,s.等.cancer research.2017)等报道。既往已经被发现的nrp2配体包括semaphorin家族成员，但其它类型的配体未见报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种调节免疫反应和抑制肿瘤的方法，以及itpripl1的调节剂在制备调节免疫反应或抗肿瘤的药物中的用途。

2、为了达到上述目的，本发明提供了itpripl1的调节剂在制备调节免疫反应或抗肿瘤的药物中的用途，所述的调节剂用于提高或降低机体的itpripl1基因或蛋白的表达或功能。

3、优选地，所述的调节剂包含以下任意一种：

4、(1)使细胞内itpripl1基因被敲除或突变的基因编辑系统；

5、(2)降低itpripl1基因表达水平的rna分子；

6、(3)用于导入细胞内的核酸分子，所述核酸分子编码itpripl1并提高itpripl1的表达量；

7、(4)分离的itpripl1重组蛋白；

8、(5)识别并结合itpripl1的抗体。

9、优选地，所述的基因编辑系统为crispr/cas9基因编辑系统；用于所述crispr/cas9基因编辑系统的靶序列选自seq id no:11-13所示的任意一条序列，用于编码sgrna的寡聚dna序列选自seq id no:14-19；所述的核酸分子包含：seq id no:8、seq id no:9或seq id no:10所示的序列；所述的itpripl1重组蛋白包含：itpripl1蛋白胞外区中能够结合cd3ε或nrp2蛋白的功能片段；所述的识别并结合itpripl1的抗体为多克隆抗体、单克隆抗体、单链抗体、抗原结合结构域、双特异性抗体、多特异性抗体，或嵌合抗原受体中的抗原结合部。

10、优选地，所述的功能片段的序列选自seq id no:1至seq id no:4中任意一条，或为其衍生序列，衍生方法包括：将一个以上的氨基酸进行替换、删除或插入但并未改变序列的功能。

11、优选地，所述的itpripl1重组蛋白与抗体恒定区形成融合蛋白(如seq id nos:5-7所示)或与凝血因子形成融合蛋白；或者，对所述的itpripl1重组蛋白进行修饰，修饰的方式包括：聚乙二醇修饰、糖基化修饰、多聚唾液酸修饰、脂肪酸修饰、klh修饰、生物素修饰。

12、优选地，通过药物传递系统将所述的核酸分子导入细胞内，所述的药物传递系统包括：重组表达载体、病毒、脂质体或纳米材料。

13、优选地，所述的调节免疫反应包括：在自身免疫反应、抑制移植排斥免疫反应、过敏反应、抗感染免疫反应、抗肿瘤免疫反应的过程中，抗原递呈细胞和t淋巴细胞的功能的调节。

14、优选地，所述的免疫反应包括：i型糖尿病、免疫性不孕不育、器官移植后排斥反应、过敏反应、全身炎症或细胞因子风暴、感染。

15、优选地，所述的肿瘤为实体瘤或血液系统肿瘤；所述的实体瘤包括：胶质瘤、肺癌、头颈部癌、胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、食管癌、尿路上皮癌、睾丸癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌，黑色素瘤、胰腺癌或肝癌；所述的血液系统肿瘤包括：白血病或淋巴瘤。

16、本发明还提供了一种药物组合物，其包含上述的用途中采用的调节剂，以及药学上可接受的载体。

17、本发明还提供了一种分离的itpripl1重组蛋白，所述的重组蛋白为itpripl1蛋白胞外区中能够结合cd3ε或nrp2蛋白的功能片段。

18、本发明还提供了一种识别并结合itpripl1的抗体，所述的抗体识别并结合itpripl1蛋白的胞外区。

19、本发明还提供了一种用于鉴定上述的抗体的方法，通过检测受试抗体的以下一种或多种性质：特异性结合itpripl1蛋白的能力；对itpripl1与cd3ε结合的影响；对itpripl1与nrp2结合的影响；对免疫细胞或肿瘤细胞功能的影响。

20、本发明还提供了分离的itpripl1重组蛋白的应用，其用于检测自身抗itpripl1抗体的存在，其中检测的主要步骤包括将所述的itpripl1重组蛋白与受试者的血液样本直接接触，以及洗涤去除非特异性结合。

21、本发明还提供了上述的抗体用于检测itpripl1在样本中的含量的应用，识别并结合itpripl1的抗体用于判断细胞、组织、器官或个体内itpripl1的表达，或用于判断是否适合施用本发明的通过靶向itpripl1调节免疫反应和抑制肿瘤的方法。

22、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

23、本发明公开了一种调节免疫反应和抑制肿瘤的方法，通过调控itpripl1基因的表达或功能实现上述目的。本发明基于新的科学发现，即itpripl1蛋白结合cd3ε与nrp2受体调节不同免疫细胞的功能，进而参与免疫反应的调节和肿瘤的免疫逃逸过程。本发明证实itpripl1的调节剂可用于制备药物或药物组合物，在抑制肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应、过敏和感染等疾病方面具有应用前景。