一种具有调控斜纹夜蛾抗药性的长链非编码RNA基因及其应用

本发明属于生物，更具体地，涉及一种具有调控斜纹夜蛾抗药性的长链非编码rna基因及其应用。

背景技术：

1、斜纹夜蛾(spodoptera litura)是一种暴食性和间歇性猖獗危害的重要农业害虫，对我国多种经济粮食作物造成严重危害。由于在大量使用杀虫剂对其进行化学防治，目前斜纹夜蛾田间种群对多种杀虫剂产生了严重的抗药性。茚虫威(indoxacarb)作为一种新型噁二嗪类杀虫剂，其不仅作用机理独特，而且具有高效的杀虫活性。但在长期大量使用防治斜纹夜蛾的过程中，也不可避免地产生了抗药性问题。

2、近年来，长链非编码rna(lncrna)已经成为表观遗传学领域一个备受关注的新研究焦点，其不仅作用机制比microrna(mirna)更为复杂多样，而且发挥着更加强大的生物学功能。随着越来越多的lncrna被挖掘出来，lncrna和mirna之间的联系也逐渐被关注，由此竞争性内源rna(cerna)机制被推上舞台，成为研究热点。目前关于cerna参与调控害虫抗药性研究还较少。有文献报道，多个过表达羧酸酯酶基因参与了斜纹夜蛾茚虫威抗性的形成，两个mirnas(mir-305、mir-92b)可分别调控两个羧酸酯酶基因(slitucoe050、slitucoe074)的过表达介导斜纹夜蛾对茚虫威的抗性。进一步分析了lncrna、mirna和羧酸酯酶基因之间的调控关系，暗示出cerna在斜纹夜蛾对茚虫威抗性形成中的重要作用。

技术实现思路

1、基于现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种具有调控斜纹夜蛾杀虫剂抗性的长链非编码rna基因及其应用，降低斜纹夜蛾对茚虫威的抗药性。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

3、一种具有调控斜纹夜蛾杀虫剂抗性的长链非编码rna基因，所述基因为lnc_002857，其核苷酸序列如seq id no：1所示。

4、一种干扰上述基因lnc_002857在斜纹夜蛾体内表达的dsrna，所述dsrna获得方法为：

5、以克隆获得的lnc_002857基因部分序列为模板，然后利用含t7聚合酶启动子序列的引物对a进行pcr扩增，扩增产物胶回收后进行dsrna体外合成，并利用dsrna纯化试剂盒纯化获得目标dsrna；引物对a具体为：

6、f：ccaaatacgaaatcag seq id no：6；

7、f+t7：ggatcctaatacgactcactataggccaaatacgaaatcag seq id no：7；

8、r：ctccaaacgaactcattgt seq id no：8；

9、r+t7：ggatcctaatacgactcactataggctccaaacgaactcattgt seq id no：9。

10、一种上述基因在防控斜纹夜蛾中的应用，通过抑制斜纹夜蛾基因lnc_002857表达，降低斜纹夜蛾对茚虫威的抗药性。

11、进一步地，通过rnai技术沉默lnc 002857表达。

12、相较于现有技术，本发明的有益效果如下：

13、本发明提供了一种能够干扰lnc_002857在斜纹夜蛾体内表达的dsrna，将lnc_002857基因的对应dsrna微量转染到斜纹夜蛾spli221细胞或注射到斜纹夜蛾幼虫体内后，lnc_002857基因的表达水平均显著降低。经茚虫威处理后，细胞存活率显著降低以及幼虫死亡率显著提高。可见，该dsrna能够显著抑制或沉默lnc_002857的表达，降低斜纹夜蛾对茚虫威的抗药性。减少了害虫对化学杀虫剂的依赖，为害虫抗药性治理和未来研发新型杀虫剂提供了理论基础。

技术特征：

1.一种具有调控斜纹夜蛾杀虫剂抗性的长链非编码rna基因，其特征在于，所述基因为lnc_002857，其核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.一种干扰权利要求1所述lnc_002857基因在斜纹夜蛾体内表达的dsrna，其特征在于，所述dsrna获得方法为：

3.权利要求1所述基因在防控斜纹夜蛾中的应用，其特征在于，通过抑制斜纹夜蛾lnc_002857基因表达，降低斜纹夜蛾对茚虫威的抗药性。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过rnai技术沉默lnc_002857表达。

技术总结本发明公开了一种具有调控斜纹夜蛾抗药性的长链非编码RNA基因及其应用，涉及生物技术领域。本发明的LNC_002857基因通过斜纹夜蛾总RNA提取、cDNA合成和设计特异引物扩增获得。同时提供了干扰LNC_002857基因表达的dsRNA的制备。将LNC_002857基因的对应dsRNA微量转染到斜纹夜蛾Spli221细胞或注射到斜纹夜蛾幼虫体内后，LNC_002857基因的表达水平均显著降低。经茚虫威处理后，细胞存活率显著降低以及幼虫死亡率显著提高，表明LNC_002857基因具有调控斜纹夜蛾抗杀虫剂的作用，可作为斜纹夜蛾害虫防治的可能靶标。本发明也可为新的害虫综合防治方法提供理论基础。技术研发人员：石力,杨文,廖晓兰受保护的技术使用者：湖南农业大学技术研发日：技术公布日：2024/11/4