一种铁皮石斛ABA关键合成酶DoNCED1编码基因与应用

本发明涉及基因工程，具体涉及铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因与应用。

背景技术：

1、铁皮石斛是传统名贵中药材，《神农本草经》将其列为上品中药，对其显著疗效和安全性给予了充分肯定。正是由于其药用价值之高，野生资源被过渡采挖，致使其当前成为珍稀濒危药用植物，人工栽培已成为满足社会需求的主要途径。我省是铁皮石斛人工栽培的重要产地，但是铁皮石斛生长习性及各环境因子严重制约其在该产地的自然分布和高产栽培，亟需对铁皮石斛的生长发育特点以及响应逆境胁迫的分子机制进行研究。脱落酸(aba)是调控植物生长发育与抵御逆境胁迫的重要激素，9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(nced)是aba合成途径中的关键限速酶，因此，筛选调控铁皮石斛aba合成途径中的关键限速酶基因意义重大，可为铁皮石斛抗逆分子育种提供理论指导和技术支持。

2、目前，拟南芥、水稻、玉米、油菜、棉花、甘草等植物中nced基因已被克隆出来，确定nced是调控内源aba合成的关键酶基因，nced通过迅速高效的策略实时调控着植物中aba的含量，从而调控植物的生长发育和响应逆境胁迫。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因及其在提高耐盐及渗透胁迫中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，探索高盐及渗透胁迫对铁皮石斛种质资源的影响，并从形态指标来评定donced1可能参与的高盐及渗透胁迫，从而阐明donced1在响应高盐和渗透胁迫中的作用，并为研究铁皮石斛抗逆分子机理等提供理论依据。

2、为达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

3、本发明提供一种铁皮石斛aba关键合成酶donced1，该基因是从铁皮石斛中分离、克隆出来的一种氧化酶，将其命名为donced1，其氨基酸序列如seq id no.1所示：

4、msssisisissnliqnphhrqhrrtsvinnlnhpnalskppggcrrpvgtthcsl

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15、本发明所述铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因的核苷酸序列如seq idno.2所示：

16、atgtcctcttccatttccatatcaatctcatcaaacctaatacaaaatcccc

17、accaccgccaacatcgccggacctctgtgatcaacaatctcaaccatccga

18、acgctctcagtaaaccacccggcggctgccggaggccagtcggaaccact

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35、gagaaatccgctgacgtggcgatcccgttggatcagcccacgatgacgca

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37、gttcaagttgcaggaaatgatcgccggtggttcgccggtggtttacgataa

38、ggagaagacggcgcggttcggagttcttccgaagcgcgccgttgatggtt

39、ccgagatgatttgggtcgatgtgccggattgcttctgcttccatttttgga

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41、atgaccccggcggattccatcttcaacgagtcggaggagaacctgcggag

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48、tgattgcgtttgtgcacgacgaggaatcggcgaaatcagagctgcttata

49、gtgaacgcctccgacatgaaagtggaagctgtcgtgaagctgccatcgcg

50、agtaccttatggattccatggaacgtttgtcagtgaagggagtctggagtt

51、tcaggactga

52、本发明所述铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因，含有铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因的表达载体，命名为：pegoep-35s-h-donced1。

53、本发明所述表达载体pegoep-35s-h-donced1是以过表达载体pegoep-35s-h为载体骨架构建donced1过表达载体。

54、本发明所述过表达载体构建引物序列如下：

55、oe-nced1-f：5'-actagggtctcgcaccatgtcctcttccatttccatat caa-3'；

56、oe-nced1-r：5'-actagaggtctctaccgtcagtcctgaaactccagac tccct-3'；

57、nos-r：atcatcgcaagaccggcaac。

58、本发明所述铁皮石斛aba关键合成酶donced1编码基因在控制植物幼苗响应高盐和渗透胁迫中的应用。

59、本发明所述的一种提高植物幼苗耐盐和渗透胁迫的方法，利用pegoep-35s-h-donced1表达载体，采用农杆菌介导的遗传转化方法将铁皮石斛耐盐及渗透胁迫基因donced1导入植株中。

60、所述农杆菌为农杆菌gv3101。

61、本发明的有益效果如为：

62、1.本发明从铁皮石斛中分离、克隆出铁皮石斛编码基因donced1，并阐明其生物学功能。

63、2.本发明通过分析donced1转基因株系幼苗阶段在正常、高盐和渗透胁迫下的表型，结果表明：相对于野生型株系，donced1转基因株系在高盐和高渗透胁迫处理下，donced1转基因株系的根系均显著要长于野生型，且地上部分也要长得比野生型好，表明donced1基因是一个潜在的耐盐和耐渗透育种基因，可用于植物耐盐和耐渗透遗传改良。