一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法

本发明涉及生物，特别是涉及一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法。

背景技术：

1、卵母细胞冷冻保存是通过抑制细胞新陈代谢，在超低温度下实现卵母细胞长期保存的技术。卵母细胞的冷冻保存旨在通过冷冻配子来保存生育能力，现已经广泛应用于珍稀物种资源保存、优质遗传资源交流、人类辅助生殖技术等。此外，卵母细胞冷冻保存可与多种胚胎生物技术，如体外受精、卵胞浆内单精子注射、胚胎移植等联用，为胚胎的体外生产提供保障。虽然卵母细胞的冷冻保存已得到了广泛应用，但是冷冻对卵母细胞造成的损伤仍无法避免。稳定的生物学模型是研究冷冻损伤的有利工具，但目前尚无理想的模拟卵母细胞冷冻损伤的细胞模型构建方法，在一定程度上阻碍了深入研究卵母细胞冷冻损伤及应激应答机制的研究进展。

2、蛋白质稳态在应对外界压力等方面具有重要作用。lon蛋白酶家族(lonprotease)是一类依赖atp的丝氨酸蛋白酶家族，能够通过降解受损或错误折叠的蛋白质在蛋白质稳态的维持中发挥关键作用。其中，lonp1作为lon蛋白酶家族的一个重要成员，在这一过程中尤其具有显著的功能。目前，lonp1在冷冻卵母细胞中的具体作用尚未被明确揭示。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法，以解决上述现有技术存在的问题。本发明证实了可以通过降低卵母细胞中lonp1的表达构建卵母细胞冷冻损伤模型，为深入揭示卵母细胞冷冻损伤及应激应答机制奠定了模型基础，具有重要的理论价值和广泛的应用前景。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供降低卵母细胞中lonp1基因表达量的试剂在构建卵母细胞冷冻损伤模型中的应用。

4、进一步的，所述卵母细胞为gv期卵母细胞。

5、本发明还提供一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法，包括以降低lonp1基因表达量的试剂处理所述卵母细胞的步骤。

6、进一步的，所述降低lonp1基因表达量的试剂包括lonp1抑制剂和沉默lonp1基因的sirna。

7、进一步的，所述sirna包括如seq id no.3所示的正义链和如seq id no.4所示的反义链。

8、进一步的，所述lonp1抑制剂包括cddo-me。

9、进一步的，所述卵母细胞为gv期卵母细胞。

10、本发明还提供所述的方法构建的卵母细胞冷冻损伤模型。

11、本发明公开了以下技术效果：

12、本发明通过对新鲜和冷冻的卵母细胞进行研究，发现lonp1表达量下降与冷冻卵母细胞蛋白稳态失衡、凋亡水平升高密切相关。进一步通过显微注射抑制lonp1基因表达的sirna，或通过lonp1抑制剂cddo-me处理卵母细胞，构建lonp1低表达卵母细胞，发现lonp1低表达卵母细胞的蛋白稳态失衡，细胞凋亡水平升高，并且与冷冻卵母细胞的相关指标相似。本发明证实了可以通过降低卵母细胞中lonp1的表达构建卵母细胞冷冻损伤模型，为深入揭示卵母细胞冷冻损伤及应激应答机制奠定了模型基础，具有重要的理论价值和广泛的应用前景。

技术特征：

1.降低卵母细胞中lonp1基因表达量的试剂在构建卵母细胞冷冻损伤模型中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述卵母细胞为gv期卵母细胞。

3.一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法，其特征在于，包括以降低lonp1基因表达量的试剂处理所述卵母细胞的步骤。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述降低lonp1基因表达量的试剂包括lonp1抑制剂和沉默lonp1基因的sirna。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述sirna包括如seq id no.3所示的正义链和如seq id no.4所示的反义链。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述lonp1抑制剂包括cddo-me。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述卵母细胞为gv期卵母细胞。

8.如权利要求3～7任一项所述的方法构建的卵母细胞冷冻损伤模型。

技术总结本发明公开了一种构建卵母细胞冷冻损伤模型的方法，属于生物技术领域。本发明通过以LonP1抑制剂或沉默LonP1基因的siRNA处理卵母细胞，降低卵母细胞中LonP1的表达，可模拟卵母细胞冷冻损伤。本发明证实了可以通过降低卵母细胞中LonP1的表达构建卵母细胞冷冻损伤模型，为深入揭示卵母细胞冷冻损伤及应激应答机制奠定了模型基础，具有重要的理论价值和广泛的应用前景。技术研发人员：傅祥伟,李俊,刘鸿宇,周桂珍,罗渝雯,刘爱菊,白佳琛,依再提古丽·热依木江,朱一笑,侯云鹏受保护的技术使用者：中国农业大学技术研发日：技术公布日：2024/11/14