一种含芬式别样杆菌的肠溶胶囊的制作方法

本发明属于活体生物药领域，具体涉及一种含芬式别样杆菌的肠溶胶囊。

背景技术：

1、化疗相关性腹泻(chemotherapy induced diarrhea，cid)是肿瘤患者因化疗引起的一种常见消化道毒副反应，轻度腹泻可使患者的生活质量下降，频繁性的严重腹泻可能会导致患者脱水、感染、休克、甚至死亡。因此，严重腹泻患者需要减少化疗药物的剂量甚至中断化疗，影响肿瘤的治疗。

2、常用化疗方案中，capeiri方案(卡培他滨+伊立替康)和folfoxiri方案(氟尿嘧啶+亚叶酸钙+奥沙利铂+伊立替康)最容易引起cid，3～4级腹泻的发生率可高达20～47％。其中，5-氟尿嘧啶(5-fu)和伊立替康是最容易引起cid的药物：5-fu相关腹泻多为水样或血性，容易引起脓毒血症，程度相对较重，偶尔致命；伊立替康可引起迟发腹泻，一般在24小时之后发生，持续6～14天，与剂量无关且不可预测。

3、相比普通腹泻而言，cid的发病机制更为复杂。一方面，化疗药物(例如，5-fu)治疗后可导致dna损伤和线粒体功能障碍，肠上皮细胞凋亡，转录因子nf-κb的过度激活，促炎细胞因子的上调表达，最终导致上皮、内皮和结缔组织的损伤。另一方面，还有更多其他因素具有导致使用5-fu或伊立替康治疗的癌症患者腹泻的风险，例如，由于肠屏障受到损伤，粘膜完整性和肠道菌群被破坏，有害菌极易增殖，比如艰难梭菌等医院感染高危病原菌。

4、根据2018esmo(european society for medical oncology，欧洲肿瘤内科学会)成人癌症腹泻指南，目前临床多运用止泻药、生长抑素类似物、糖皮质激素、抗生素等对症治疗，缺乏专用特效药及预防措施，副作用大。例如，阿片类药物(派洛丁胺)大剂量使用时可能引起麻痹性肠梗阻的风险；生长抑素类似物(奥曲肽)可引发胆结石、高血糖、糖耐量异常等副作用；糖皮质激素可能产生系统性影响，增加感染风险，加剧病毒或细菌感染等。流行病学数据显示全球肿瘤患者人数每年大幅增加，预计到2040年，约有300～700万人受化疗相关副作用困扰，但目前治疗方案缺乏专用特效药及预防措施，难以满足不断增长的临床需求。

5、肠道微生态系统是机体最庞大最重要的微生态系统，肠道微生态失衡与多种疾病的发病机制密切相关。大量研究表明肠道益生菌可通过肠神经、免疫系统、肠内分泌信号等途径，调节机体组织、器官功能及行为，进而有益于宿主健康。然而，对于益生菌防治放化疗相关腹泻的疗效，近年来缺乏大规模高质量前瞻性随机对照试验，且目前系统分析所纳入的研究具有明显异质性，尚不能形成有力的确定性证据，仍需后续进行严谨的临床研究以明确。并且，市场上缓解腹泻症状的益生菌产品均为传统一代益生菌，很难针对cid复杂发病机制起到较好的治疗作用。

6、目前，尚未有研究报道过芬氏别样杆菌可用于治疗和/或预防化疗相关性腹泻。专利cn113999922a公开了急性腹泻标志微生物及其应用，其侧重于研究急性腹泻患者粪便样本中微生物丰度的改变。化疗相关性腹泻的发病机制与一般腹泻相比更为复杂，并且在临床上既有急性也有慢性腹泻表现。因此，为了满足化疗相关性腹泻患者对有针对性治疗效果的活菌制剂的需求，有必要开发一种新型益生菌制剂。

7、此外，益生菌类药物抗逆性较差，在口服经过胃部时，容易受到低ph值和低氧化还原电位的伤害，而且益生菌产品通常以冻干菌粉为活性成分，对水也很敏感，遇水活化后耐性更差，这些综合因素使得极少的益生菌能活着达到肠道发挥作用。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术治疗化疗药物引起的腹泻存在的不足，提供了一种含芬式别样杆菌的肠溶胶囊，所述胶囊内填充芬式别样杆菌冻干菌粉和药学上可接受的吸水剂，所述冻干菌粉与吸水剂的质量比为1：(3-8)，所述芬氏别样杆菌是保藏编号为cctcc no：m20221759的菌株或其子代菌株、克隆菌株和纯培养物。

2、在一些具体实施方式中，所述吸水剂选自无水氯化钙、无水醋酸钠、无水乙酸钠、无水硫酸钠、无水硫酸镁、无水氯化镁、无水磷酸钠、无水硫酸钙中的一种或几种。

3、在一些具体实施方式中，所述冻干菌粉与吸水剂的质量比为1：(3-7)；在一些具体实施方式中，所述冻干菌粉与吸水剂的质量比为1：(3-6)；在一些具体实施方式中，所述冻干菌粉与吸水剂的质量比为1：(3-5)。吸水剂的含量过低影响胶囊对胃酸或水的隔离效果，益生菌的耐酸存活率不能满足要求；吸水剂的含量过高则导致载药量低，增加单次用药的胶囊数量，患者依从性差。

4、在一些具体实施方式中，所述冻干菌粉通过将活菌数在1×107-1×1011cfu/ml的菌泥浓缩液加入含有蔗糖120g/l、山梨醇40g/l、精氨酸盐酸40g/l、维生素c钠40g/l的冻干保护剂中，冻干得到。

5、在一些具体实施方式中，单个肠溶胶囊含有30-100mg菌粉；在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40-90mg菌粉；在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40-80mg菌粉；在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40-70mg菌粉；在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40-60mg菌粉，在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40-50mg菌粉；在一些具体实施方式中，所述肠溶胶囊含有40或50mg菌粉。

6、在一些具体实施方式中，单个肠溶胶囊含有100-150mg吸水剂。

7、本发明的芬式别样杆菌(alistipes finegoldii)在bhi+mrs+改良gam三混培养基上的菌落培养特征为：较小的白色不透明状、凸起状圆形、表面光滑湿润的菌落；应用结晶紫染色法对菌株形态进行鉴定，上述芬氏别样杆菌在光学显微镜下呈短杆状。

8、本发明的芬式别样杆菌对以下9种抗生素中的至少一种敏感：亚胺培南、万古霉素、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、呋喃妥因、高浓度庆大霉素、利福平。

9、本发明的芬式别样杆菌基因组无毒力基因，体外不溶血(即γ溶血)。

10、本发明还提供了上述芬式别样杆菌(alistipes finegoldii)在制备微生物制剂中的应用，所述微生物制剂用于治疗和/或预防化疗药物引起的腹泻或/和抑制肠道病原菌的繁殖。

11、优选地，所述微生物制剂对艰难梭菌具有抑制作用。

12、优选地，所述化疗药物包括但不限于：氟尿嘧啶类、拓扑异构酶i抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、紫杉烷类、铂类化疗药以及其他类化疗药。

13、可选地，所述氟尿嘧啶类包括5-氟尿嘧啶、替加氟、卡培他滨等；所述拓扑异构酶i抑制剂包括伊立替康、拓扑替康等；所述酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、阿法替尼、达可替尼、凡德他尼、来那替尼、奥希替尼、伊马替尼、达沙替尼、尼罗替尼、博舒替尼、普纳替尼等；所述紫杉烷类化疗药包括紫杉醇、多西他赛等；所述铂类化疗药包括顺铂、奥沙利铂等。

14、优选地，所述化疗药物为5-氟尿嘧啶和(或)伊立替康；

15、优选地，所述微生物制剂用于缓解5-氟尿嘧啶和(或)伊立替康引起的腹泻症状；

16、优选地，所述微生物制剂能够显著降低thp-1细胞促炎因子tnf-α的表达，具有抗炎作用；

17、优选地，所述微生物制剂具有显著的抗氧化能力。

18、在本发明应用较佳的实施方式中，上述微生物制剂可以包括芬式别样杆菌菌体和/或芬式别样杆菌发酵上清液和/或芬式别样杆菌裂解液。

19、本发明具有以下有益效果：

20、1、本发明的芬氏别样杆菌afine-1，不同于市场上的传统益生菌和其它现有在研产品，属于较新的种属。实验证实，该菌株对多种抗生素敏感，不具有溶血性，并且经全基因组分析表明无毒力因子，说明该菌株具有良好的安全性。有效性方面，该菌株不但能够显著改善化疗药物5-氟尿嘧啶和伊立替康诱导的腹泻症状，还具有抗炎作用和抗氧化能力，并且能够抑制病原体艰难梭菌的生长。因此，本发明的芬氏别样杆菌afine-1可应用于新一代活菌微生态制剂，从多个方面为cid的预防和(或)治疗提供新的思路和策略。

21、2、本发明针对芬氏别样杆菌afine-1提供了一种肠溶胶囊，与普通的肠溶胶囊相比，通过填充吸水剂极大提高了耐酸存活率。

22、菌株保藏信息：2022年11月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(cctcc，武汉大学保藏中心)，保藏号为cctcc no：m 20221759。