一种Kombucha后生元、制备方法及其应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种kombucha后生元、制备方法及其应用

背景技术：

1、皮肤微生态由栖息于皮肤的微生物组及有关物理化学成分组成，1cm2人类皮肤上有多达10亿个微生物细胞，在皮肤表面形成共生关系，抑制病原微生物、防止炎症反应、对抗光老化，是皮肤屏障的重要组成部分。皮肤微生态失衡会导致皮肤屏障功能受损，表现为水分流失、ph值上升、剥脱、色素沉着等，严重时发生痤疮、过敏、皮炎。

2、皮肤微生态菌群可分为常驻菌(residential flora)和暂驻菌(transientbacteria)，前者常规定居于健康皮肤，后者暂驻于皮肤，源于环境接触，往往是引起皮肤感染的主要病原菌。金黄色葡萄球菌在皮肤表面过度定殖会引发特应性皮炎。丙酸杆菌是皮肤微生物组中丰度最大的优势共生细菌，其所产短链脂肪酸能维持皮肤表面弱酸性，具有营养皮肤和抑制外来菌滋生的作用，但其代谢所产生的卟啉具有促炎作用，与炎症性皮肤病有关，痤疮丙酸杆菌过度繁殖时会引发痤疮。柯氏棒状杆菌是条件致病菌，其相对丰度随年龄增长而增加，与皮肤红肿、炎症性皮肤和酒渣鼻有关。糠秕马拉色菌作为皮肤真菌的主要组成部分，其过度繁殖时引发脂溢性皮炎。

3、来自健康皮肤微生态的常驻优势菌和外源益生菌等功能微生物及其代谢产物可提过调理优化皮肤微生态从而延缓皮肤老化。后生元是益生菌代谢产物与菌体细胞结构成分所组成的复合物，可以对皮肤产生正面作用。益生菌和后生元是基于皮肤微生态调理的新兴护肤美容手段。而抗氧化则可以有效消减紫外线和蓝光导致的皮肤光老化效应。

4、江南大学公开了一种对金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌有抑菌活性的表皮葡萄球菌发酵液的制备方法(202310191536.5)，本发明对皮肤微生物表皮葡萄球菌进行发酵调控，以制备具有抑菌活性的表皮葡萄球菌发酵液，通过实验发现，添加两种不同的碳源葡萄糖和甘油后，表皮葡萄球菌的发酵液对金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌表现出明显的抑菌活性，在调理优化皮肤微生态方面具有应用潜力。

5、中国医学科学院皮肤病医院公开了一种具有良好保湿美白抗炎抗氧化抗衰老功效的表皮葡萄球菌及其应用(202310395616.2)。首先自健康皮肤上分离到表皮葡萄球菌h62-3，其保藏编号为cgmccno.26640。实验发现，本发明表皮葡萄球菌的发酵代谢产物提高保湿及屏障修复相关基因的表达，促进透明质酸的合成，抑制病原菌生长，降低lps诱导巨噬细胞产生的炎症反应，对dpph、abts及羟自由基具有良好的清除活性，同时还降低黑素合成相关基因表达，降低酪氨酸酶活性，抑制β-半乳糖苷酶活性。

6、博索思(广东)生命科学研究有限公公开了一种含二裂酵母发酵产物的乳白色精华水及其制备方法(202310068427.4)，该发明的乳白色精华水含有二裂酵母发酵产物滤液、二裂酵母发酵产物溶胞产物、麦角硫因、皮肤益生素、乙酰壳糖胺、聚甘油-10月桂酸酯、柠檬酸脂肪酸甘油酯、润肤剂、透明质酸钠、多元醇，具有优异的稳定性、吸收效果优异、涂抹性佳、增溶剂含量低，且还具有优异的抗氧抗衰和保湿效果。

7、内蒙古科拓生物有限公司公开了一种益生菌后生元制品及其在促进皮肤健康中的应用(202211328785.6)，该发明的益生菌后生元制品包括：益生菌经发酵后的灭活菌体及其代谢产物；所述益生菌至少包括副干酪乳杆菌probiosci-101和发酵乳杆菌prosci-602；所述副干酪乳杆菌pro biosci-101的保藏编号为cgmccno.25085，所述发酵乳杆菌prosci-602的保藏编号为cgmcc no.25451。通过2种菌株相互配合，可以获得能更有效改善皮肤状态的代谢产物，效果显著。

8、江南大学公开了副干酪乳酪杆菌制备的具有促进宿主ha合成并增强ha应用效果的后生元(202310059270.9)，所提供的副干酪乳酪杆菌ccfm1293制备的后生元具有促进宿主透明质酸(ha)合成并增强其应用效果的作用：促进肠道细胞、皮肤细胞的ha合成；增加衰老小鼠皮肤、关节、脑等组织的ha合成；增加衰老小鼠皮肤、关节、脑等组织的ha水平；增强ha提升小鼠背部皮肤的角质层含水量、提升小鼠背部的皮肤弹性、提升衰老小鼠皮肤的gsh含量和cat、gsh-px的活性。

9、江南大学公开了副干酪乳酪杆菌ccfm1294制备的具有改善皮肤细胞ha含量的后生元(202310064736.4)，该发明所制备的后生元具有促进宿主透明质酸(ha)合成的作用：显著上调皮肤细胞的ugdh mrna表达；显著上调皮肤细胞的has1 mrna表达；显著上调皮肤细胞的has2 mrna表达；显著上调皮肤细胞的has3mrna表达；增加皮肤细胞中ha含量。

10、康普茶是以茶(camellia sinensis)和可发酵性糖(如蔗糖)为发酵底物，传统上以细菌(醋酸菌与乳酸菌)和酵母形成的共生体(symbiotic culture of bacteria andyeasts，scoby)所形成的菌膜为发酵剂，静置发酵而成的酸甜可口饮料，也可在分离纯化发酵菌种的基础上开展纯菌种复合发酵(defined-strains-mixed fermentation)。

11、kombucha是一种由酿酒酵母菌和醋酸菌为主、乳酸菌参与所构成的食品级共发酵体系，后生元是其益生菌代谢产物及其菌体结构组分的混合物。

12、以上这些研究成果充分说明，益生菌或其产物具有皮肤美容功效，可应用于化妆品，但以上研究成果所采用的益生菌均以细菌为主(二裂酵母在分类上也属于细菌，即双歧杆菌)，在发酵产物及后生元组成上不够丰富多样，效果还不是特别显著，特别是同时取得抗氧化性和抗菌效果上效果不太明显。

技术实现思路

1、本发明的目的在于，提供一种kombucha后生元、制备方法及其应用。本发明具有抗氧化性好和抗菌效果好的优点。

2、本发明的技术方案：一种kombucha后生元，包括kombucha纯菌种复合发酵体系发酵产生的代谢产物及菌体，所述kombucha纯菌种复合发酵体系中至少包括酿酒酵母菌、醋酸菌和乳酸菌三种益生菌。

3、前述的kombucha后生元中，三种益生菌均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，酵母菌为saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05、乳酸菌为lactobacillus rhamnosus zju2303-rh11、醋酸菌为acetobacter pasteuriumuszju2306-rh24，保藏编号分别为cgmcc 2.6673，cgmcc 1.60148，cgmcc 1.62051。

4、前述的kombucha后生元的制备方法，包括以下步骤，

5、a、kombucha纯菌种复合发酵体系，

6、b、将kombucha纯菌种复合发酵体系加入到kombucha培养基中发酵，得到包括发酵后的代谢产物及菌体的混合物，

7、c、干燥混合物，得到kombucha后生元的成品。

8、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，按质量百分数计，所述kombucha培养基包括茶叶0.5％-1.5％，蔗糖2％-4％，余量为水；

9、作为优选，所述kombucha培养基包括茶叶1％，蔗糖3％，余量为水。

10、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，进行发酵时，saccharomycescerevisiae zju2014-rh05、lactobacillus rhamn osus zju2303-rh11、acetobacterpasteuriumus zju2306-rh24的起始密度分别为1×106～3×106cfu/ml、1×106～3×106cfu/ml、1×107～3×107cfu/ml；

11、作为优选，saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05、lactoba cillusrhamnosus zju2303-rh11、acetobacter pasteuriumus zju2306-rh24的起始密度分别为2×106cfu/ml、2×106cfu/ml、2×107cfu/ml。

12、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，进行发酵时，发酵温度30±5℃，发酵时间120±20小时，发酵时处于静置状态；

13、作为优选，发酵温度30±1℃，发酵时间120小时，发酵时处于静置状态。

14、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，发酵结束后，发酵液ph值为3.5-4.0，发酵液酸度为1.5％-2.0％；

15、作为优选，发酵结束时，发酵液ph值为3.7-3.8，发酵液酸度为1.7％-1.8％。

16、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，发酵结束时，saccharomycescerevisiae zju2014-rh05，lactobacillus rhamn osus zju2303-rh11，acetobacterpasteuriumus zju2306-rh24的密度分别为1×107～4×107cfu/ml，1×108～4×108cfu/ml，1×109～6×109cfu/ml；

17、作为优选，步骤b中，发酵结束时，saccharomyces cerevisiae zju2014-rh05，lactobacillus rhamnosus zju2303-rh11，acetoba cter pasteuriumus zju2306-rh24的密度分别为2×107～3×107cfu/ml，2×108～3×108cfu/ml，3×109～4×109cfu/ml。

18、前述的kombucha后生元的制备方法中，步骤b中，所述混合物是发酵形成的发酵液，发酵液中含有中发酵后的代谢产物及菌体；

19、步骤c中，所述混合物经喷雾干燥或其它方式干燥，形成粉末状的kombucha后生元。

20、前述的kombucha后生元在化妆品中的应用，所述化妆品具有抗氧化功能、抑制金黄色葡萄球菌功能、抑制痤疮丙酸杆菌功能、抑制糠秕马拉色菌功能、抑制柯氏棒状杆菌功能中的一种或多种。

21、与现有技术相比，本发明构建由酵母菌、乳酸菌和醋酸菌组成的kombucha纯菌种复合发酵体系，所制得后生元所包含成分更加的丰富多样，并优选特定菌种的酿酒酵母菌、乳酸菌和醋酸菌形成kombucha纯菌种复合发酵体系，在整个kombucha发酵体系中，酿酒酵母菌可以利用还原糖发酵成有机酸和酒精，醋酸菌可以利用还原糖发酵成乙酸并将酵母发酵出身的酒精转化为乙酸，乳酸菌可参与发酵体系起辅助作用并产生乳酸，茶叶则为酵母、醋酸菌和乳酸菌提供生长因子，并转化生成丰富的小分子多酚。通过三种益生菌的共生协同发酵，最终形成的发酵产物包括：类黄酮，酚酸，乳酸、乙酸等中短链脂肪酸和柠檬酸、苹果酸等其它有机酸，氨基酸，维生素，酿酒酵母菌、醋酸菌、乳酸菌菌体细胞。通过喷雾干燥等手段干燥后，成为集酵母、乳酸菌和醋酸菌发酵产物及菌体细胞为一体的后生元，较之以单独一类微生物所制备的后生元，具有更丰富的有益成分，并表现出优越的抗氧化和抗菌作用，特别是对致病菌金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、糠秕马拉色菌、柯氏棒状杆菌具有明显抑制活性作用，作为新原料用于化妆品中具有广阔的市场前景。综上所述，本发明具有抗氧化性好和抗菌效果好的优点。