一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法

本发明属于生物，具体涉及一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法。

背景技术：

1、面对突发性或缺乏特效药物治疗的病毒性感染疾病，临床上通常使用广谱抗病毒药物进行治疗。但是，目前临床应用的广谱抗病毒药物种类较为有限，主要包括核苷类似物如利巴韦林和免疫调节剂如干扰素α。然而，这些药物在实际应用中均存在一定的局限性和明显的副作用，例如核苷类似物容易导致病毒产生耐药性突变，干扰素α对肝脏和血液系统等具有较强的副作用，无法有效应对层出不穷的突发性病毒感染大流行。

2、病毒的细胞受体、蛋白酶和核酸复制酶一直是抗病毒药物研发的首选靶标，已成功开发出了许多有效的抗病毒药物，但是这些药物通常缺乏广谱性。由于病毒结构的多样性、核酸的高突变性以及它们生命周期的差异性，针对单种病毒通常难以直接设计出具有广谱抗病毒活性的药物。目前广谱抗病毒药物的发现，主要是对已有的广谱抗病毒药物的修饰和衍生物合成，近年来少有新发现的广谱抗病毒药物。

3、公开号为cn109628647a的发明申请公开了抗病毒药物筛选方法及其应用，所述抗病毒药物筛选方法，包括以下步骤：将病毒吸附至单层细胞后，覆盖培养基并加入待筛选药物进行孵育；然后将细胞进行固定和染色现出空斑，通过观察空斑来筛选抗病毒药物。本发明的筛选方法操作简单、成本低、筛选通量大，完全模拟活病毒的感染过程，能够准确高效地筛选出针对病毒复制所有阶段的抗病毒药物，能够缓解现有抗病毒药物筛选方法筛选范围小，工艺繁琐，成本高的技术问题。将本发明提供的抗病毒药物筛选方法应用于制备治疗病毒感染性疾病的药物，用于治疗因病毒感染而导致的疾病。

4、公开号为cn102121053a的发明申请公开了一种用于抗病毒药物筛选的方法，大部分病毒在侵染人体细胞的过程中会抑制体细胞正常的5‘-帽子结构依赖的翻译方式，而启动依赖病毒mrna5’-非翻译区含有的内部核糖体进入元件(ires)的翻译方式。本方法利用病毒的这一特性，以病毒mrna5’-非翻译区ires所介导的翻译水平的高低作为评价病毒活性的强弱，进而作为抗病毒药物筛选的指标。

5、上述现有技术中提供了两种不同的抗病毒药物筛选方法。然而，新的抗病毒药物筛选方法的开发有利于筛选获得新的广谱抗病毒药物。

6、值得注意的是，所有病毒都无法独立复制，必须依赖宿主细胞并与其建立紧密的联系，才能启动病毒的生命周期。因此，从抗病毒功能的角度出发，利用多种病毒感染系统筛选同一批非核苷类似物的小分子化合物，探索研发具有广谱抗病毒活性的新型化合物是一种高效的筛选方法。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中存在的上述不足，提供了一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法。

2、一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，包括以下步骤：

3、(1)使用至少两种病毒筛选对各筛选病毒均具有抑制作用的化合物，其中，至少一种病毒为dna病毒，至少一种病毒为rna病毒，将对各病毒均有抑制作用的化合物作为潜在具有广谱抗病毒活性的药物；

4、(2)将步骤(1)筛选到的药物在另一种与步骤(1)中病毒不同的病毒感染细胞系统中验证，明确具有广谱抗病毒活性的药物；

5、(3)将步骤(2)验证具有广谱抗病毒活性的药物在单纯疱疹病毒感染导致的角膜炎动物模型中验证该药物在动物水平的抗病毒功能，验证有效的药物，即为最终筛选到的具有广谱抗病毒活性药物。

6、步骤(1)中，通过多种病毒的筛选，特别是至少一种病毒为dna病毒，至少一种病毒为rna病毒，可以初步确保筛选到的药物具有光谱抗病毒活性。步骤(1)中，选择的病毒不限制数量，理论上使用的病毒种类和数量越多，效果越好。步骤(2)中，通过区别于步骤(1)中所选病毒的新的病毒测试，进一步验证筛选到的药物具有广谱性。步骤(3)中，通过动物模型，进一步在生理水平证实，所筛选到的药物具有抗病毒活性。

7、优选的，步骤(1)中，病毒选自：戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、脑心肌炎病毒、仙台病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小dna病毒、腺相关病毒、sars-cov-2、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、猴痘病毒、寨卡病毒、西尼罗病毒、风疹病毒、eb病毒、轮状病毒、诺如病毒、登革热病毒、埃博拉病毒、sars病毒、mers病毒、丙型肝炎病毒。

8、更优选的，步骤(2)中，病毒选自：戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、脑心肌炎病毒、仙台病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小dna病毒、腺相关病毒、sars-cov-2、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、猴痘病毒、寨卡病毒、西尼罗病毒、风疹病毒、eb病毒、轮状病毒、诺如病毒、登革热病毒、埃博拉病毒、sars病毒、mers病毒、丙型肝炎病毒；

9、并且，步骤(2)中选择的病毒未被步骤(1)中选择使用。

10、优选的，步骤(1)中，病毒选择戊型肝炎病毒、水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒这三种。

11、优选的，步骤(2)中，病毒选择sars-cov-2。

12、优选的，所述化合物为小分子化合物、天然活性产物、多肽、sirna或sgrna。

13、本发明又提供了小分子化合物在制备广谱抗病毒的药物中的应用，所述小分子化合物为ptc-209或其药学上可接受的盐，

14、ptc-209的化学式如式i：

15、

16、优选的，所述药物还包括药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体为以下至少一种：缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂、消泡剂。

17、本发明的有益效果在于：

18、(1)该小分子化合物广谱抗病毒活性的高效筛选方法，通过细胞的培养、小分子化合物的准备、多病毒系统的抗病毒活性筛选，感染性病毒实验及实验结果分析形成了一个完整的筛选体系，且在各个环节均涉及到了具体的实验步骤以及对实验结果的分析，同时还提供各个环节中的具体操作步骤，体现了本筛选方法的高效性、可靠性和科学性。

19、(2)该小分子化合物广谱抗病毒活性的高效筛选方法，通过对不同类型病毒的小分子化合物筛选，并在病毒感染系统及动物水平验证，能够获得对病毒具有广谱抑制作用的小分子化合物。

20、(3)该小分子化合物广谱抗病毒活性的高效筛选方法，通过对筛选的具有广谱抗病毒作用的小分子化合物靶点分析，能够发现新的广谱抗病毒药物靶点。

技术特征：

1.一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，步骤(1)中，病毒选自：戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、脑心肌炎病毒、仙台病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小dna病毒、腺相关病毒、sars-cov-2、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、猴痘病毒、寨卡病毒、西尼罗病毒、风疹病毒、eb病毒、轮状病毒、诺如病毒、登革热病毒、埃博拉病毒、sars病毒、mers病毒、丙型肝炎病毒。

3.根据权利要求2所述用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，步骤(2)中，病毒选自：戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、脑心肌炎病毒、仙台病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小dna病毒、腺相关病毒、sars-cov-2、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、猴痘病毒、寨卡病毒、西尼罗病毒、风疹病毒、eb病毒、轮状病毒、诺如病毒、登革热病毒、埃博拉病毒、sars病毒、mers病毒、丙型肝炎病毒；

4.根据权利要求1所述用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，步骤(1)中，病毒选择戊型肝炎病毒、水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒这三种。

5.根据权利要求1所述用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，步骤(2)中，病毒选择sars-cov-2。

6.根据权利要求1所述用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法，其特征在于，所述化合物为小分子化合物、天然活性产物、多肽、sirna或sgrna。

7.小分子化合物在制备广谱抗病毒的药物中的应用，其特征在于，所述小分子化合物为ptc-209或其药学上可接受的盐，

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体为以下至少一种：缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂、消泡剂。

技术总结本发明公开了一种用于筛选广谱抗病毒活性药物的方法。本发明方法先使用至少两种病毒筛选，且至少一种病毒为DNA病毒，至少一种病毒为RNA病毒；然后再使用另外一种病毒进行验证；最后再用动物模型进行验证。本发明方法通过细胞的培养、小分子化合物的准备、多病毒系统的抗病毒活性筛选，感染性病毒实验及实验结果分析形成了一个完整的筛选体系，且在各个环节均涉及到了具体的实验步骤以及对实验结果的分析，同时还提供各个环节中的具体操作步骤，体现了本筛选方法的高效性、可靠性和科学性。技术研发人员：徐平龙,张飞,黄耀伟,徐令东,吴世英,刘盛铎受保护的技术使用者：浙江大学杭州国际科创中心技术研发日：技术公布日：2024/11/18