抗PSMA抗体、其变体及其用途的制作方法

本技术涉及改进的抗psma抗体及其使用方法。

背景技术：

1、前列腺特异性膜抗原(psma)已被证实是前列腺上皮细胞的特异性标志物，这为开发靶向前列腺癌的精准医学奠定了基础。组织学研究表明，几乎所有的前列腺癌都表达psma，并且具有更高的恶性或转移，或对雄激素剥夺治疗有抗性的癌症，通常表达更高的psma(ananias,h.j.,et al.(2009)prostate,69(10):1101-8；wright,g.l.,jr.,et al.(1995)urol oncol,1(1):18-28；wright,g.l.,jr.,et al.(1996)urology,48(2):326-34；sweat,s.d.,et al.(1998)urology,52(4):637-40)。值得注意的是，正常组织中的psma表达水平比肿瘤中的低100至1000倍(sokoloff,r.l.,et al.(2000)prostate,43(2):150-7)，并且这些正常组织通常不容易接近循环抗体(troyer,j.k.et al.(1995)int jcancer,62(5):552-8)，其进一步确保psma靶向成像和治疗的安全性。除了前列腺外，psma还在许多实体瘤中的新血管系统中高度表达，而在正常血管中不存在(sokoloff,r.l.,etal.(2000)prostate,43(2):150-7)。因此，psma不仅对于前列腺癌是理想的标志物，而且对于其它实体肿瘤的新血管系统靶向治疗也是理想的标志物。

2、抗体是最有效的肿瘤靶向工具，因为它们能够特异性识别肿瘤细胞上表达的肿瘤相关或肿瘤特异性抗原，这为基于抗体的精准医学开辟了途径，包括肿瘤靶向成像和治疗，例如用于早期肿瘤检测的光学、pet、spect或mri成像、抗体药物偶联物和放射治疗、双特异性或多特异性抗体、用于癌症治疗的嵌合抗原受体t细胞或nk细胞治疗。

3、然而，蛋白质药物例如抗体的稳定性受到许多不同因素的不利影响。蛋白质的降解和随后的蛋白质活性的降低是制药行业中的反复出现的问题。因此，仍然需要具有改善的稳定性的作为治疗剂的抗体。

技术实现思路

1、本公开在多个方面解决了上述需求。在一方面，本公开提供了特异性结合psma(例如人psma)的抗体或其抗原结合片段或其变体。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：(i)轻链可变区(lcvr)，其包含三个轻链互补决定区(lcdr)(lcdr1、lcdr2和lcdr3)，其中lcdr1包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:13或seq id no:41的氨基酸序列，lcdr3包含氨基酸序列seq id no:17；和/或(ii)重链可变区(hcvr)，其包含三个重链互补决定区(hcdr)(hcdr1、hcdr2和hcdr3)，其中hcdr1包含seq id no:25或seq idno:45的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列，其中变体在lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2或hcdr3中包含一个或多个保守的氨基酸取代。

2、在一些实施方案中，lcdr1包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:13的氨基酸序列，lcdr3包含seq id no:17的氨基酸序列；hcdr1包含seq id no:25的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:33的氨基酸序列。

3、在一些实施方案中，lcdr1包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:13的氨基酸序列，lcdr3包含seq id no:17的氨基酸序列；hcdr1包含seq id no:45的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:33的氨基酸序列。

4、在一些实施方案中，lcdr1包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:41的氨基酸序列，lcdr3包含seq id no:17的氨基酸序列；hcdr1包含seq id no:45的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:33的氨基酸序列。

5、在一些实施方案中，lcdr1包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:13的氨基酸序列，lcdr3包含seq id no:17的氨基酸序列；hcdr1包含seq id no:45的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:49的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，轻链可变区包含seq id no:5、seq id no:7、seq id no:11、seq id no:15、seq id no:19、seq id no:39、seq id no:43、seq id no:61、seq id no:63、seq id no:65、seq id no:67和seq id no:69的氨基酸序列中的一个或多个。

7、在一些实施方案中，重链可变区包含seq id no:21、seq id no:23、seq id no:27、seq id no:31、seq id no:35、seq id no:47、seq id no:51、seq id no:53、seq idno:55、seq id no:57、seq id no:59和seq id no:68的氨基酸序列中的一个或多个。

8、在一些实施方案中，轻链可变区包含与seq id no:5的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:5的氨基酸序列；和/或重链可变区包含与seq idno:21的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:21的氨基酸序列。

9、在一些实施方案中，轻链可变区包含与seq id no:70的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:70的氨基酸序列；和/或重链可变区包含与seq idno:72的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:72的氨基酸序列。

10、在一些实施方案中，轻链可变区包含与seq id no:71的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:71的氨基酸序列；和/或重链可变区包含与seq idno:73的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:73的氨基酸序列。

11、在一些实施方案中，轻链可变区包含与seq id no:5的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:5的氨基酸序列；和/或重链可变区包含与seq idno:74的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列，或包含seq id no:74的氨基酸序列。

12、在一些实施方案中，轻链可变区和重链可变区包含seq id no:5和seq id no:21、seq id no:70和seq id no:72、seq id no:71和seq id no:73，或seq id no:5和seq idno:74的lcvr和hcvr氨基酸序列对。

13、在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或其变体包含seq id no:75和seq idno:77、seq id no:76和seq id no:78、seq id no:69和seq id no:68，或seq id no:75和seq id no:79的重链/轻链序列对。

14、在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或其变体包含seq id no:3和seq idno:37的氨基酸序列中的至少一个。

15、在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段选自igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igasec、igd和ige；或具有igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igasec、igd和ige的野生型或无糖基化免疫球蛋白恒定区和/或可变区。

16、在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段是重组抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆和/或多克隆抗体的混合物、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

17、在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段或其变体结合到细胞毒性剂、药物、生长抑制剂、毒素、酶、标签、标记、放射性同位素或纳米颗粒。

18、在另一方面，本公开还提供了双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段，其结合相同或不同抗原上的两个或更多个不同表位。在一些实施方案中，表位之一在人前列腺特异性膜抗原(psma)上，并且双特异性或多特异性抗体包含如本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体的轻链可变区和/或重链可变区。

19、在另一方面，本公开进一步提供了分离的嵌合抗原受体(car)。在一些实施方案中，car包含本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体、跨膜结构域以及包含一个或多个刺激结构域的细胞内信号传导结构域。

20、在本公开的范围内还包括(a)核酸分子，其编码如本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体的多肽链、双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段，或car；(b)载体，其包含本文所述核酸分子；(c)细胞，其包含如本文所述的核酸分子或载体。

21、在另一方面，本公开提供了制备抗体或其抗原结合片段的方法。在一些实施方案中，方法包括(i)获得本文所述的细胞；(ii)在允许由核酸分子编码的多肽表达并且组装抗体或其片段的条件下，在培养基中培养细胞；以及(iii)从培养的细胞或细胞的培养基中纯化抗体或片段。

22、在另一方面，本公开额外提供了组合物，所述组合物包含本文所述的双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段、car、核酸分子、载体或细胞的抗体或其抗原结合片段或其变体，以及任选的药学上可接受的载体。

23、在另一方面，本公开额外提供了试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体、双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段、car、核酸分子、载体、细胞或组合物。

24、在另一方面，本公开还提供了本文所述的组合物用于制备用于对象中与psma的表达相关的增殖性疾病引起的病况的诊断、预防、治疗或其组合的药物中的用途。

25、在另一方面，本公开进一步提供了预防或治疗对象中与psma表达相关的增殖性疾病的方法。在一些实施方案中，方法包括向对象施用有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体、双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段、car、核酸分子、载体、细胞或组合物。

26、在一些实施方案中，方法进一步包括向对象施用第二药剂或治疗。在一些实施例中，第二药剂或治疗包括抗癌剂。在一些实施方案中，在如本文所述的抗体或其抗原结合片段或其变体、双特异性或多特异性抗体或其抗原结合片段、car、核酸分子、载体、细胞或组合物之前、之后或同时向对象施用第二药剂或治疗。

27、在另一方面，本公开还提供了鉴定对象具有与psma表达相关的疾病或病况的方法。在一些实施方案中，方法包括：(a)提供来自对象的组织样品；(b)使组织样品与所述抗体或其抗原结合片段或其变体接触；和(c)确定抗体或其抗原结合片段或其变体结合到组织样品，其中抗体或其抗原结合片段或其变体结合到组织样品指示对象中存在与psma表达相关的疾病或病况。

28、在又一方面，本公开还提供了靶向psma的成像方法。方法包括向有需要的对象施用抗体或其抗原结合片段或其变体或组合物，其中抗体或其抗原结合片段或其变体连接到试剂。在一些实施方案中，试剂包含光激活剂、荧光团、放射性同位素、生物发光蛋白、生物发光肽、荧光标签、荧光蛋白、荧光肽、成像造影剂、酶、核磁共振活性试剂或纳米颗粒。

29、在一些实施方案中，疾病包括癌症。在一些实施方案中，癌症包括前列腺癌。

30、在一些实施方案中，对象是哺乳动物，例如人。

31、上述概述并不旨在限定本公开的每个方面，并且在其他部分中描述了额外的方面，例如以下的详细描述。全部文档旨在作为统一的公开内容来讲述，并且应当理解，所有本文所述的特征的组合均在考虑范围内，即使这些特征的组合并未在该文档的同一句子或段落或部分中一起被发现。从下文的详细描述，本发明的其它特征和优点将变得明显。然而，应当理解，详细描述和具体实例虽然指示了本公开的具体实施方案，但仅以说明的方式给出，因为根据该详细描述，在本公开的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员将是显而易见的。