外周血单核细胞亚群在预测肝移植患者预后中的应用

本发明属于生物医药领域，具体涉及外周血单核细胞亚群在预测肝移植患者预后中的应用，特别是检测外周血单核细胞亚群特征性改变的试剂在制备预测肝移植患者预后的产品中的应用。

背景技术：

1、同种异体原位肝移植手术是终末期肝病的有效治疗手段，但肝移植术后免疫状态变化是影响移植物功能的重要因素，因此寻找合适的临床指标来评估和预测移植患者术后免疫状态变化是研究热点之一。单核细胞是固有免疫系统的重要成员之一，它们在外周血中比例约为5％-10％，包括3个常见亚群，即经典型单核细胞mo1：cd14+cd16-hla-drlow(比例为85％-90％)、中间型单核细胞mo2：cd14+cd16hihla-drhi(比例为5％-10％)和非经典型单核细胞mo3：cd14+cd16hihla-dr+(比例为5％-10％)。但是，关于单核细胞的分类在争论之中不断发现定义新亚群的表面标志分子，有研究借助质谱流式方法定义单核细胞亚群的分类方法。

2、单核细胞的异质性除了在其亚群的分类定义以外，还体现在不同亚群细胞具有不同的免疫功能，不同免疫功能分子的表达量如抗原递呈功能、信号传导功能、趋化功能以及吞噬功能等表达量在不同的免疫微环境或疾病状态下存在差异，其中单核细胞表面hla-dr表达量持续下降是免疫抑制的一个经典标志，同时hla-dr表达量变化能预测肝衰竭患者的临床预后，即单核细胞的hla-dr的表达量在预后良好患者中逐渐恢复至正常水平。

3、在严重感染、接受体外循环手术(cpb)和ecmo等患者的外周血中会出现一群更为幼稚的单核细胞亚群cd14lowcd16-hladrlow(mo0)，该群的比例变化幅度较大，它们还具有分化为其他单核细胞亚群的能力，并且在体外循环的小鼠模型实验中证实mo0可能是cpb术后急性肺损伤的诱因之一，该研究认为mo0的出现是患者的病情变化信号。此外，在iga肾病患者中非经典单核细胞比例增加提示它们能间接反映疾病过程的免疫状态，报道证实肾移植患者的外周血中单核细胞亚群比例与其免疫状态变化具有相关性，即分泌促炎性细胞因子tnf-α、il-1β和ifn-γ能力较强的cd16hihla-dr+单核细胞亚群比例的增加可能是肾移植术后细胞免疫反应的驱动因素之一，与健康人相比肾移植患者hla-dr+单核细胞比例增加提示机体处于免疫激活状态。因此，监测单核细胞的亚群比例和细胞因子分泌水平的变化可作为预测肾移植患者术后移植物失去功能的指标之一。

4、此外，在肺移植患者和小鼠模型中发现单核细胞通过表达cxcr3和cxcl2并上调myd88信号通路来趋化中性粒细胞进入移植物中造成移植物的损伤，而通过基因敲除模型发现单核细胞的cxcr3或cxcl2表达缺陷可减少中性粒细胞趋化至移植物。研究指出ccr2通过调节单核细胞的募集以及th1淋巴细胞的识别是潜在的缓解肺移植术后自身免疫反应的治疗靶点，而在造血干细胞移植患者术后出现慢性移植物抗宿主病患者中单核细胞亚群在受累器官中的比例均呈增加趋势，并且与global nih score具有正相关性。由于目前观点认为单核细胞受免疫抑制药物影响较小，该研究认为单核细胞可以作为研究慢性移植物抗宿主病的生物标志物。

技术实现思路

1、本发明的目的是提出外周血单核细胞亚群作为生物标志物在预测肝移植患者预后中的应用，免疫抑制患者手术后外周血中单核细胞亚群的特征性改变导致单核细胞活化率的变化，可作为预测肝移植患者90天临床预后的生物标志物，特别是检测外周血单核细胞亚群特征性改变的试剂用于制备预测肝移植患者预后的产品。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供外周血单核细胞亚群作为生物标志物在制备预测肝移植患者预后的产品中的应用，所述单核细胞亚群选自单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3中的一种或多种，其中所述单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3分别为cd14lowcd16-hladrlow、cd14+cd16-hla-drlow、cd14+cd16hihla-drhi、cd14+cd16hihla-dr+。

4、作为优选，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0，即cd14lowcd16-hladrlow，作为预测肝移植患者预后的生物标志物。

5、本发明还提供检测外周血单核细胞亚群特征性改变的试剂在制备预测肝移植患者预后的产品中的应用，所述单核细胞亚群选自单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3中的一种或多种，其中所述单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3分别为cd14lowcd16-hladrlow、cd14+cd16-hla-drlow、cd14+cd16hihla-drhi、cd14+cd16hihla-dr+。

6、作为优选，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0，即cd14lowcd16-hladrlow，所述单核细胞亚群特征性改变为mo0的比例增加。

7、作为更优选，所述肝移植患者单核细胞活化率的差值(δ)与90天生存率具有相关性。

8、作为更优选，cd163在mo0的表达量升高，ccr5、hla-dr、cd32、cd36、cd86、cd163、tigit和cx3cr1在mo0的表达量下降。

9、作为优选，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0和mo1，即mo0的比例增加，而mo1的比例下降。

10、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

11、1、单核细胞作为重要的固有免疫细胞之一，在不同疾病或免疫微环境中具有表达多种具有不同免疫功能的表面分子的潜能如ccr2、ccr5、cd11c、cd32、cd64、cd36、cd86、cd163、tigit、icam1和cx3cr1等，本发明通过分析单核细胞的趋化和炎症状态以及免疫抑制性信号检查点等表面分子的表达量的变化，来推断单核细胞亚群的特征性改变并联合其他免疫细胞和细胞因子等指标，综合判断机体整体免疫状态正在进行的应答和免疫重塑的反应过程并可以预测肝移植患者术后90天的生存率。

12、2、本发明通过检测肝移植患者术后第1天和术后第7天的外周血单核细胞活化率，计算其差值的变化是由于外周血单核细胞亚群的特征性改变导致的，即mo0的比例增加是导致单核细胞活化率出现差异的原因之一。同时，差值的变化与肝移植患者术后的免疫状态和其肝移植患者术后90天生存率具有相关性，外周血单核细胞亚群的特征性改变可作为评估肝移植术后免疫状态变化和患者90天生存率的预测指标之一。此外，本发明通过广泛临床使用细胞流式技术以及简单的抗体染色即可完成，简便快速，检测效率高。

技术特征：

1.外周血单核细胞亚群作为生物标志物在制备预测肝移植患者预后的产品中的应用，所述单核细胞亚群选自单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3中的一种或多种，其中所述单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3分别为cd14lowcd16-hladrlow、cd14+cd16-hla-drlow、cd14+cd16hihla-drhi、cd14+cd16hihla-dr+。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0，作为预测肝移植患者预后的生物标志物。

3.检测外周血单核细胞亚群特征性改变的试剂在制备预测肝移植患者预后的产品中的应用，其特征在于，所述单核细胞亚群选自单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3中的一种或多种，其中所述单核细胞亚群mo0、mo1、mo2和mo3分别为cd14lowcd16-hladrlow、cd14+cd16-hla-drlow、cd14+cd16hihla-drhi、cd14+cd16hihla-dr+。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0，所述单核细胞亚群特征性改变为mo0的比例增加。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，cd163在mo0的表达量升高，ccr5、hla-dr、cd32、cd36、cd86、cd163、tigit和cx3cr1在mo0的表达量下降。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述单核细胞亚群为单核细胞亚群mo0和mo1，其中mo0的比例增加，而mo1的比例下降。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肝移植患者的单核细胞活化率差值与90天生存率具有相关性。

技术总结本发明公开了外周血单核细胞亚群在预测肝移植患者预后中的应用，特别是检测外周血单核细胞亚群特征性改变的试剂用于制备预测肝移植患者预后的产品，单核细胞亚群选自单核细胞亚群Mo0、Mo1、Mo2和Mo3中的一种或多种，分别为CD14<supgt;low</supgt;CD16<supgt;‑</supgt;HLADR<supgt;low</supgt;、CD14<supgt;+</supgt;CD16<supgt;‑</supgt;HLA‑DR<supgt;low</supgt;、CD14<supgt;+</supgt;CD16<supgt;hi</supgt;HLA‑DR<supgt;hi</supgt;、CD14<supgt;+</supgt;CD16<supgt;hi</supgt;HLA‑DR<supgt;+</supgt;，单核细胞活化率差值的变化与肝移植患者术后的免疫状态和术后90天生存率具有相关性，外周血单核细胞亚群的特征性改变可作为肝移植患者预后的预测指标之一，通过使用细胞流式技术和简单的抗体染色即可完成，简便快速，检测效率高。技术研发人员：宫钰,吴蕙,朱捷受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院技术研发日：技术公布日：2024/11/18