一种青光眼的外周血TCR标志物及其检测试剂盒和应用

本发明属于医药，具体涉及一种青光眼的外周血tcr标志物及其检测试剂盒和应用。

背景技术：

1、目前青光眼的临床主要监测指标包括眼压、眼底检查、眼底视神经纤维层厚度、视野、眼底血管血流动力学等，但现有的检查仍具有一定的局限性：

2、1.特异性不足：1)传统临床观察认为眼压和青光眼发病密切相关，但事实上约40％的青光眼患者在眼压回归正常范围后，其视功能仍然不可逆转的逐年恶化。另外，正常眼压性青光眼的患者完全无法使用这一指标。2)眼底检查、视野、眼底视神经纤维层厚度、眼底血管血流动力学检查等有助于鉴别青光眼和其他眼部疾病，临床总结了很多这些检查的特点，但并不能做到完全区分。

3、2.主观性太强：现有的检查很多都属于主观检查，可重复性较差。医生临床经验在这些检查的应用价值方面起到了决定性作用。另一方面，作为最重要的青光眼专科检查的视野检查与被检者的受教育程度、情绪、配合意愿等诸多主观因素高度相关。这导致同一个患者需要在短时间内反复检查，不断优化熟悉检查过程才能得到可信的检查结果。

4、3.敏感性不足：大量的动物实验已经证明，几乎所有的临床视功能类检测手段都是远远落后于视网膜节细胞及视神经损伤的病理过程，即大量细胞已经发生凋亡之后才能在视功能检测上有所反应，这也导致临床药物治疗的延迟，从而使得治疗效果差。如果能在神经细胞接收到病理损伤的同时就开始治疗，毫无疑问将挽救更多的神经细胞，从而跟大程度挽救患者珍贵的视功能。

5、4.检查效率太低：青光眼的临床检查常需要耗费大量时长，如视野检查一人需要半小时以上，如检查偏倚太大常需要加时，甚至有患者检查视野长达数小时。这直接导致了青光眼患者对于专科检查的排斥心理。同时检查仪器的设置需要安排专门的场地，以及专人维修。在管理上十分繁琐。以上因素都使得青光眼普查难以推广，这也是青光眼患者医从性较差的重要因素之一。

6、目前最大的技术难点还在于青光眼作为一类眼部慢性疾病，几乎无法直接获得人眼内的炎性指标。不能监测免疫反应的变化，免疫治疗就无从谈起。目前亟需一种能实时反映眼球内免疫反应的，且可以方便获取的青光眼检测指标。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种青光眼的外周血tcr标志物及其检测试剂盒和应用，以解决背景技术中提出的目前尚且没有一种能实时反映眼球内免疫反应的，且可以方便获取的青光眼检测指标的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种青光眼的外周血tcr标志物，所述青光眼的外周血tcr标志物包括特异性tcr序列集中的tcr序列；特异性tcr序列集中的tcr序列包括：

3、tcr序列1为：cavsgtggfktif；tcr序列2为：cavnqagtalif；tcr序列3为：cassagelff；tcr序列4为：casslgqgnteaff；tcr序列5为：cavrntggfktif；tcr序列6为：casslntgelff；tcr序列7为：caaskgnfnkfyf；tcr序列8为：cagqiiqgaqklvf；tcr序列9为：calrsgatnklif；tcr序列10为：caasiqggseklvf。

4、在一种具体的实施方式中，所述特异性tcr序列集中的tcr序列还包括：

5、tcr序列11为：cvvsplgdyklsf；tcr序列12为：caawddslsglwvf；tcr序列13为：caasaggnklvf；tcr序列14为：casslgsyneqff；tcr序列15为：calsdpgggadgltf；tcr序列16为：caasgsnfgnekltf；tcr序列17为：cavlnqagtalif；tcr序列18为：caasnsgyalnf；tcr序列19为：cavkagtaskltf；tcr序列20为：casslgtsneqff；tcr序列21为：cqqrsnwppaf；tcr序列22为：cavnnarlmf；tcr序列23为：cavrdrntggfktif；tcr序列24为：cassldrnygytf；tcr序列25为：cassqedragntiyf；tcr序列26为：cassrdsnqpqhf；tcr序列27为：cavtptggfktif；tcr序列28为：caamdsnyqliw；tcr序列29为：caasgggnklvf；tcr序列30为：cassfgetqyf；tcr序列31为：cassvgetqyf；tcr序列32为：cavssaggtsygkltf；tcr序列33为：capmdsnyqliw；tcr序列34为：casssqgeqyf；tcr序列35为：caasggynklif；tcr序列36为：cavgitgggnkltf；tcr序列37为：cafmdsnyqliw；tcr序列38为：cagsntgnqfyf；tcr序列39为：cassetgtgntiyf；tcr序列40为：calanfgnekltf；tcr序列41为：cqqynsypgtf；tcr序列42为：calndyklsf；tcr序列43为：cavdtgrraltf；tcr序列44为：cqqygsstwtf；tcr序列45为：cavdsnyqliw；tcr序列46为：cavrdyggsqgnlif；tcr序列47为：caliltgggnkltf；tcr序列48为：ccsyagsypyvf；tcr序列49为：cavsgagsyqltf；tcr序列50为：cagdqgaqklvf；tcr序列51为：cqqsystltf；tcr序列52为：cqqynsysitf；tcr序列53为：casrpsggsyeqyf；tcr序列54为：casslgtsneqyf；tcr序列55为：calsdqggseklvf；tcr序列56为：calntnagkstf；tcr序列57为：calseanqagtalif；tcr序列58为：cqvwdsssdhpyvf；tcr序列59为：calsgnagnmltf；tcr序列60为：cavnpggynklif；tcr序列61为：cavtgannlff；tcr序列62为：caasatnfgnekltf；tcr序列63为：cavfsgntgklif；tcr序列64为：caekgnagnmltf；tcr序列65为：cavsnqggklif；tcr序列66为：cavmdsnyqliw。

6、在一种具体的实施方式中，所述青光眼的外周血tcr标志物包括特异性tcr序列集中的其中10种tcr序列。

7、在一种具体的实施方式中，所述青光眼的外周血tcr标志物还包括tcr序列1～66所对应的核酸序列seq id no.1～66所组成的序列集中的其中10种核酸序列。

8、本发明还提供了前述的青光眼的外周血tcr标志物在制备青光眼诊断产品中的应用。

9、本发明还提供了一种用于青光眼检测的试剂盒，包括能与前述的青光眼的外周血tcr标志物发生特异性结合的抗体。

10、本发明还提供了一种用于青光眼检测的制剂，包括能与前述的青光眼的外周血tcr标志物发生特异性结合的抗体。

11、本发明的原理为：人体内的t淋巴细胞是获得性免疫系统中最为重要的一类细胞。t细胞通过细胞表面的t细胞受体(tcr)识别抗原。tcr的多样性是建立获得性免疫系统的基础。tcr多样性的理论值是1015。tcr序列中，抗原决定簇3(cdr3)是决定其抗原特异性最重要的部分，因此cdr3的序列被认为可以代表tcr序列的特性。在各种疾病中，随着不同的抗原刺激，tcr的多样性或者表达水平都会发生改变。因此，利用tcr谱的变化特点可以追踪疾病的发生、发展。人体内细胞中，衰老蛋白质降解后，其片段会被运输到细胞表面，通过组织相容性抗原ii(mchii)呈递给免疫系统中的t细胞。当疾病病理过程中产生的异常蛋白肽段被呈递到细胞表面后，就会引起人体免疫系统产生针对性的免疫反应。因此，分析tcr谱的变化，能够检测出疾病的发生和发展状态。

12、相比于现有技术，本发明具有以下有益效果：

13、本发明只需要通过受试者极少量外周血(2ml)提取的rna/dna，基于高通量测序方法建立受试者个体化的t/b细胞受体序列文库。然后将受试者待测样本测试结果与青光眼特异性tcr序列集比对，从而提示该受试者的青光眼疾病发生发展的风险。本发明对临床青光眼选择治疗方案以及判断预后等方面均具有积极作用。

14、1、具有高敏感性。根据动物实验的结果发现，在青光眼疾病的免疫病理损伤启动的早期既能在外周血检测到特异性tcr谱改变，其发生的时间节点早于视网膜节细胞死亡的时间节点。因此该检测手段较现有的临床青光眼检查手段能更早的提示青光眼的疾病发展风险。

15、2、可重复性高：本发明以外周血测序数据这一客观检测结果为基础，无显著人为干预因素参与，因此具有更高的准确性和可重复性。无需在短期内反复检查，受医师主观临床经验影响较少。

16、3、特异性强：本发明的检测基于大量临床青光眼患者的先验数据，对于临床易混淆的其他类型眼部疾病具有很好的鉴别提示作用。

17、4、检查效率高：由于提高了检测效率，因此从整体上较传统检查节约了时间和经济成本。并很适合于大范围社会面普查。

18、5、个体化检查：本发明的检查结果可以在患者长期的慢病管理进程中结合其他检查对比，形成个体化的疾病特异性序列，使得治疗的精准化进一步提高。

19、除了上述对比传统青光眼检测手段的优势以外，本发明重要的创新在于：为青光眼的个体化免疫治疗策略提供了新的检测手段。实验发现青光眼的发生发展与t细胞免疫关系密切，青光眼病理过程中所释放的特异性抗原可激活其相对应的抗原特异性t细胞。抗原特异性t细胞具有固定的tcr序列表达，而通过检测外周血t细胞的tcr变化频谱可以对青光眼疾病的发生发展状态进行监测，同时也可以针对这些特异性的tcr进行治疗。

20、本发明提供的青光眼特异tcr序列在制备辅助诊断、临床治疗以及预后评估等方向均可提供非常有价值的信息，在应用中通过本发明所述的青光眼特异tcr去识别青光眼的共同抗原后，精准抑制抗原特异性t细胞活化增殖，从而达到治疗和诊断的效果。本发明旨在针对青光眼的个体化免疫检测，并有望开拓目前临床治疗青光眼的新靶点。

21、除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面对本发明作进一步详细的说明。