包含将EGFR与cMET结合的抗体的组合疗法的制作方法

本发明涉及抗体的领域。特别地，其涉及用于治疗涉及异常细胞的疾病的治疗性抗体，包括人类抗体的领域。此外，其涉及将egfr与cmet结合的抗体，包括多特异性抗体，以及它们在将egfr阳性细胞与cmet阳性细胞，具体是肿瘤细胞结合的用途。

背景技术：

1、表皮生长因子(egf)受体(egfr)是细胞外蛋白配体的表皮生长因子家族(egf家族)成员的细胞表面受体。egfr也称为erbb-1受体。所述受体在过去被赋予各种名称(egfr；erbb；erbb1；her1；pig61；mena)。在本发明中，其在人类中的名称erbb-1、egfr或her1可互换使用。egfr是erbb受体家族的成员，具以下四个密切相关的受体酪氨酸激酶亚科：erbb-1(egfr)、erbb-2(her2/c-neu；her2)、erbb-3(her 3)和erbb-4(her 4)。

2、egfr存在于细胞表面，可通过与其特异性配体(包括表皮生长因子和转型生长因子α(tgfα))结合而被活化。在被其生长因子配体活化后，受体可进行从无活性的主要单体形式到有活性的同二聚体的转变。除了在与配体结合后形成同二聚体之外，egfr也可与erbb受体家族的另一成员(例如erbb2)配对，以产生活化的异二聚体。二聚体也可在没有配体结合的情况下形成，且活化的egfr簇可能在与配体结合后形成。

3、egfr二聚化刺激内在的细胞内蛋白酪氨酸激酶(ptk)的活性。此活性诱导导致细胞增殖和分化的数个信号转导级联。egfr的激酶结构域可交叉磷酸化与其复合的其他受体的酪氨酸残基，且本身可以此种方式被活化。

4、涉及egfr的突变已在数种类型的癌症中被发现。其为类别不断增加的抗癌疗法的目标。此类疗法包括用于肺癌的egfr酪氨酸激酶抑制剂(egfr-tki)例如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，以及用于结肠癌和头颈癌的抗体例如西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab)。

5、西妥昔单抗(cetuximab)和帕尼单抗(panitumumab)为抑制受体的单克隆抗体。临床开发中的其他单克隆抗体有札鲁木单抗(zalutumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)和马妥珠单抗(matuzumab)。单克隆抗体旨在阻断细胞外配体诱导的受体活化，主要是通过阻断配体与该受体的结合。由于结合位点被阻断，信号诱导分子可能无法有效附着，因此也无法活化下游信号。配体诱导的受体活化也可通过将失活受体构形(马妥珠单抗(matuzumab))稳定化而抑制。

6、迄今为止，egfr靶向治疗与随时间发展出的治疗抗性有关。人们说明了针对egfr-tki的抗性的各种机制。在晚期非小细胞肺癌(nsclc)患者中，抗性机制包括二级或三级突变的发生(例如，t790m、c797s、l718q、外显子20插入突变)、替代信号的活化(例如，met、hgf、axl、hh、igf-1r)、异常下游路径(例如，akt突变、pten缺失)、egfr-tkis-介导的细胞凋亡路径受损(例如，类似bcl2的11/bim缺失多态性)和组织学转型。尽管已识别出一些抗性机制，但其他机制仍有待识别。此外，就第三代tki抗性机制而言，nsclc的分子异质性影响其对目前发现的广谱抗性畸变的贡献。类似地，接受egfr抗体治疗的结直肠癌患者也会随着时间发展出抗性。这可能是通过kras突变的出现而发生。对于那些没有kras突变的患者，met原致癌基因的扩增可能与抗-egfr治疗期间的获得性抗性相关(bardelli等人,2013；cancer discov.jun；3(6):658-73.doi:10.1158/2159-8290.cd-12-0558)。肿瘤可能从一开始就具有抗性，也可能在治疗过程中发展出抗性。在许多egfr阳性癌症中发现对egfr-靶向治疗的抗性，并已说明本领域需要更有效的egfr癌症治疗，这些治疗可以改善照护标准，且在解决egfr-靶向治疗抗性方面具有优势。

7、met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)和肝细胞生长因子(hgf)的失调已在多种肿瘤中报导。已在数种癌症中观察到配体-驱动的cmet活化。在肺癌、乳癌和多发性骨髓瘤中观察到升高的血清和肿瘤内hgf(j.m.siegfried等人,ann thorac surg 66,1915(1998)；p.c.ma等人,anticancer res 23,49(2003)；b.e.elliott等人,can j physiolpharmacol 80,91(2002)；c.seidel等人,med oncol15,145(1998))。cmet的过度表达、cmet扩增或突变已在各种癌症如结直肠癌、肺癌、胃癌和肾癌中报导，并可驱动非配体依赖性受体活化(c.birchmeier等人,nat rev mol cell biol 4,915(2003)；g.maulik等人,cytokine growth factor rev 13,41(2002))。hgf的表达也与hgf/cmet信号路径的活化有关，也是egfr靶向治疗筛选下的肿瘤逃逸机制之一。此外，以cmet酪氨酸激酶抑制剂(如卡马替尼(capmatinib)或特泊替尼(tepotinib))治疗，与cmet畸变逃逸机制的出现有关。

8、cmet受体是通过将共同前驱物蛋白水解加工成单次跨膜、双硫键连接的α/β异二聚体而形成。cmet的细胞外部分由三种结构域类型组成。n-末端区域折叠形成一个大的导向蛋白(semaphoring)(sema)结构域，它包含整个α-亚单元和部分β-亚单元。丛状蛋白-导向蛋白-整合素(psi)结构域位于sema结构域之后，包括四个双硫键。此结构域通过四个免疫球蛋白-丛状蛋白-转录(ipt)结构域连接到跨膜螺旋，其与免疫球蛋白类似结构域相关。在细胞内，cmet受体包含侧接有独特的近膜和羧基末端序列的酪氨酸激酶催化域(organ及tsao.therapeutic advances in medical oncology 3.1_增刊(2011):s7-s19，其通过援引整体并入本文)。

9、cmet的配体，肝细胞生长因子(hgf；也称为分散因子)及其剪接异构体(nk1、nk2)为cmet受体的已知配体。hgf于1991年被发现为有效的促有丝分裂原/成形基因。hgf/cmet信号传递路径在多种癌症的发展和进展中扮演重要作用。人类癌症中hgf或cmet的失调和/或过度活化与预后不良有关。cmet可通过度表达、扩增或突变而活化。活化可促进癌症的发展、进展、侵袭性生长和转移。cmet可以通过与hgf相关和与非hgf依赖性的方式被活化。在cmet过度表达的情况下会发生非hgf依赖性活化。在没有配体的情况下，大量的cmet也可能触发(异)二聚化和细胞内信号传递。额外的配体似乎不影响此种cmet过度表达细胞的功能。cmet扩增与cmet过度表达有关，并已成为肿瘤亚型的生物标志物。

10、hgf在全身广泛表达，说明这种生长因子是全身系统性可获得的细胞因子，并来自肿瘤间质。cmet活化的正向旁分泌和/或自分泌环可导致cmet进一步表达。hgf特异性抗体利妥木单抗(rilotumumab)(amg102)是针对胃癌开发。第i期和第ii期试验看起来很有希望但第iii期研究(rilomet-2)被终止，在预先-计划的数据监测委员会对试验20070622进行安全性审查后，第iii期研究以顺铂和卡培他滨(capecitabine)作为胃癌的一线治疗药物。

11、cmet/hgf信号与对egfr-靶向治疗抗性的相关性已促进处理抗性的方法的发展。迄今为止，基于抗体的方法包括抗-hgf抗体、抗cmet或cmet抗体和cmet/egfr(综览于lee等人,2015；immunotargets and therapy 4:35-44)，尚未在临床上有效。cmet抗体奥妥珠单抗(onartuzumab)(metmabtm)和艾贝珠单抗(emibetuzumab)(ly-2875358)已在第ii期临床试验中进行评估。其中，奥妥珠单抗(onartuzumab)与egfr-抑制剂厄洛替尼(erlotinib)一起组合治疗结直肠癌似乎有效。然而，这些结果无法在随机分组第iii期临床试验中重复。metmab是一种针对cmet的单价单克隆抗体(mab)，可阻断hgf与cmet的结合以及随后的路径活化(jin等人,2008cancer research第68卷:第4360-68页)。

12、为了克服抗-egfr、cmet和hgf免疫疗法的问题，本发明提供新颖的双特异性抗体，其包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。

13、迄今为止，现有技术已说明某些双特异性egfr×cmet抗体。castoldi r.等人(2013)说明一种名为mether1的双特异性egfr×cmet抗体，其具有抗体5d5(或metmab)的cmet结合位点和西妥昔单抗(cetuximab)的egfr结合位点。所述双特异性抗体的egfr和cmet结合化学计量固定为2:1(请参见补充图示)。

14、us20140378664在各种其他抗体中说明一种cmet×egfr双特异性抗体。完整的双特异性抗体制造为单一蛋白，其之后通过蛋白分解切割。所述两个vh/vl结构域制造为单链fv片段。所述抗体的结合诱导胃癌细胞株发生cmet降解及akt磷酸化。moores等人(2016)说明一种双特异性cmet×egfr抗体，命名为jnj-61186372，通过受控制的fab-臂交换(cfae)制造，在位点405及409有突变(根据eu编号)，其可能有免疫原性的潜力。使用异种移植模式jnj-61186372在体内显示活性，该异种移植模式具有表达cmet配体hgf的肿瘤细胞株h1975。已知这种肿瘤模式依赖抗体对adcc活性(ahmed等人，2015)。除其他问题外，已报导jnj-61186372亲和力的不平衡，对cmet的亲和力比对egfr的亲和力高约40倍(moores等人(2016))，且已知扎妥木单抗zalutumumab衍生的抗-egfr臂会引起输液相关反应、皮肤疾病。

15、ly3164530为一种双特异性cmet×egfr抗体，其包含西妥昔单抗的egfr结合结构域作为单链fv片段，该单链fv片段与cmet结合抗体ly2875358的重链可变结构域融合(艾贝珠单抗(emibetuzumab)；kim及kim2017)。其也称为双重可变结构域抗体，其包含每个抗原的两个结合位点。未提供所述抗体抑制hgf的数据。据报导所述抗体结合且内化cmet及egfr而无协同活性。作者审查各种cmet、egfr及cmet×egfr靶标疗法，并得出结论为迄今这些抑制剂没有在临床试验中显示出显著的功效。

16、因此，目前需要新颖的双特异性cmet×egfr抗体，包括可能具有如本文所述的优越特性的抗体。

技术实现思路

1、在某些方面，本发明提供一种本发明双特异性抗体与第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合物，所述双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域，所述组合物用于治疗个体的癌症的方法。

2、在某些方面，本发明提供一种治疗患有癌症的个体的方法，所述治疗包含向所述个体施用有效量的第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂与双特异性抗体的组合物，所述双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。

3、在某些方面，本发明提供一种双特异性抗体与第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合物用于制备治疗癌症的药物的用途，所述双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。

4、在某些方面，本发明提供一种包含第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂和双特异性抗体的药物组合物，所述双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。

5、在某些方面，所述癌症是egfr阳性癌症、cmet阳性癌症、或egfr和cmet阳性癌症。在某种情况下，所述癌症包含egfr畸变、cmet畸变、或egfr和cmet畸变。

6、在某些方面，所述癌症或个体已经通过egfr酪氨酸激酶抑制剂进行了先前治疗，和/或所述癌症或个体通过酪氨酸激酶抑制剂对治疗有抗性，在某些方面，对egfr酪氨酸激酶抑制剂和/或cmet酪氨酸激酶抑制剂有抗性。在某些方面，所述个体通过第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂(例如奥希替尼(osimertinib))进行了先前治疗。所述egfr酪氨酸激酶抑制剂抗性包含第一代、第二代和/或第三代酪氨酸激酶抑制剂。在其他方面中，所述双特异性抗体和egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合物的施用或治疗包含对egfr及/或cmet酪氨酸激酶抑制剂抗性个体的二线治疗。在其他态样中，所述双特异性抗体和egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合物的施用或治疗包含对已通过第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂进行了先前治疗的个体的二线治疗。在某些态样中在某些方面，所述个体包含赋予对所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂抗性的egfr和/或cmet畸变。在某些方面，所述个体或癌症对第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂具有抗性或难治性，在某些方面，对奥希替尼(osimertinib)具抗性或难治性。

7、在某些方面，所述用途或治疗包含向所述个体提供剂量1000、1500或2000mg的双特异性抗体。在某些方面，所述双特异性抗体每周提供一次或每两周提供一次。在某种方面中，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂每日提供的剂量是50mg至约400mg之间，如70mg、75mg、80mg、100mg、110mg或240mg。

8、在某些方面，所述用途或治疗包含每两周一次向所述个体提供剂量1500mg的双特异性抗体。

9、在某些方面，在所述组合治疗中施用的egfr酪氨酸激酶抑制剂为或包含奥希替尼(osimertinib)、拉泽替尼(lazertinib)、阿氟替尼(alflutinib)、瑞齐替尼(rezivertinib)、罗西替尼(rociletinib)、奥莫替尼(olmutinib)、阿美替尼(almonertinib)、艾维替尼(abivertinib)、ask120067、贝福替尼(befotertinib)(也称之为bpi-d0316或d-0316)、sh-1028、纳扎替尼(nazartinib)(egf816)、纳奎替尼(naquotinib)(asp8273)、马维替尼(mavelertinib)(pf-0647775)、奥拉菲替尼(olafertinib)(ck-101)、克耐替尼(keynatinib)、es-072。在某些方面，所述egfr酪氨酸激酶抑制剂优选为奥希替尼(osimertinib)、bpi-d0316/贝福替尼(befotertinib)、拉泽替尼(lazertinib)、或阿美替尼(almonertinib)。

10、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂为奥希替尼(osimertinib)(azd9291)。奥希替尼(osimertinib)(azd9291)为一种共价性、具有口服活性、不可逆和突变选择性的egfr抑制剂，对l858r的表ic50为12nm，对l858r/t790m的表ic50为1nm。确定推荐的第2期剂量为每日剂量80mg。

11、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂为阿美替尼(almonertinib)(hs-10296)。阿美替尼(almonertinib)为一种可口服、不可逆的第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂，对egfr-敏化和t790m抗性突变具有选择性。阿美替尼(almonertinib)用于非小细胞肺癌的研究。确定推荐的第2期剂量为每日剂量110mg。

12、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是拉泽替尼(lazertinib)。拉泽替尼(lazertinib)(yh25448)是一种强效、突变选择性、可穿透血脑屏障、可口服且不可逆的第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂，可用于非小细胞肺癌的研究。确定推荐的第2期剂量为每日剂量240mg。

13、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是贝福替尼(befotertinib)(或bpi-d0316或有时称为d-0316)。贝福替尼(beta pharmaceuticals,co.,china)为第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂。贝福替尼可用于egfr阳性非小细胞肺癌(nsclc)的研究。在第ii期、单臂试验nct05007938中，在局部晚期或转移性nsclc患者中，评估贝福替尼(25mg，每日3次，口服)与埃克替尼(icotinib)(125mg，每日3次，口服)组合的安全性和有效性。在第i期试验nct04464551中，个体接受单次口服剂量为75mg d-0316的口服悬浮液。在第ii期、单臂研究nct03861156中，局部晚期/转移性非小细胞肺癌患者的口服剂量为75mg，周期为21天，如果耐受，则剂量增加至100mg。否则，剂量维持在75mg。在第ii/iii期试验nct04206072中，评估d-0316在70mg每日一次，持续21天，之后增加到100mg每日一次的疗效和安全性。

14、在某种情况下，第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是阿氟替尼(alflutinib)(ast2818或芙美替尼(furmonertinib))。ast2818为临床试验nct03787992的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

15、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是瑞齐替尼(rezivertinib)(bpi-7711)，其为一种具有口服活性、选择性和不可逆性的第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)。瑞齐替尼(rezivertinib)为临床试验nct03866499的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

16、在某些方面，第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是艾维替尼(avitinib)(艾维替尼(abivertinib)/ac0010)，其为一种基于吡咯并嘧啶的不可逆表皮生长因子受体(egfr)抑制剂，具ic50为7.68nm。艾维替尼(avitinib)是临床试验nct03856697的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

17、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是ask120067，其为一种有效的口服活性egfr抑制剂。ask120067是用于非小细胞肺癌(nsclc)研究的第三代egfr-tki。ask120067是一项临床试验(nct04143607)的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

18、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是奥瑞替尼(sh-1028，nanjingsanhome pharmaceutical co.,ltd.,nanjing,china)。sh-1028是临床试验nct04239833的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

19、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是罗西替尼(rociletinib)(co-1686)，其为一种口服传递的激酶抑制剂，其特异性地靶向突变的egfr形式。罗西替尼(rociletinib)是临床试验nct02186301的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

20、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是奥莫替尼(olmutinib)(hm61713；bi-1482694)，其为一种具有口服活性且不可逆的第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂，其可结合至所述激酶域附近的半胱氨酸残基。奥穆替尼(olmutinib)可用于nsclc的研究。奥穆替尼(olmutinib)是临床试验nct02485652的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

21、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是纳扎替尼(nazartinib)(egf816)，其为一种选择性抑制egfr活化突变的第三代egfr tki，用于晚期egfr-突变的nsclc患者中。纳扎替尼(nazartinib)是临床试验nct03529084的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

22、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是纳奎替尼(naquotinib)，其为一种口服、不可逆的、第三代、突变-选择性的表皮生长因子受体(egfr)抑制剂。纳奎替尼(naquotinib)是临床试验nct02588261的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

23、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂是马维替尼(mavelertinib)(pf-0647775)，其为一种选择性、口服和不可逆的egfr酪氨酸激酶抑制剂(egfr tki)。马维替尼(mavelertinib)是临床试验nct02349633的主题，研究其在nsclc中的临床疗效。

24、在某些方面，所述个体或癌症对第一代、第二代、第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂或cmet抑制剂的治疗具有抗性。

25、在某些方面，所述第一代酪氨酸激酶抗性是或包含对吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)或埃克替尼(icotinib)的抗性。

26、在某些方面，所述第二代酪氨酸激酶抗性是或包含对阿法替尼(afatinib)、达克替尼(dacomitinib)、xl647、ap26113、co-1686或来那替尼(neratinib)的抗性。

27、在某些方面，所述cmet酪氨酸激酶抗性是或包含对卡马替尼(capmatinib)、特泊替尼(tepotinib)、克唑替尼(crizotenib)、卡博替尼(cabozantinib)、赛沃替尼(savolitinib)、格沙替尼(glesatinib)、西曲伐替尼(sitravatinib)、bms-777607、梅沙替尼(merestinib)、替凡替尼(tivantinib)、戈伐替尼(golvatinib)、福瑞替尼(foretinib)、amg-337或bms-794833的抗性。在某些方面，所述cmet酪氨酸激酶抗性是或包含对特泊替尼(tepotinib)的抗性。在某些方面，所述cmet酪氨酸激酶抗性是或包含对卡马替尼(capmatinib)的抗性。

28、在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶的抗性是或包含对奥希替尼(osimertinib)、拉泽替尼(lazertinib)、阿氟替尼(alflutinib)、瑞齐替尼(rezivertinib)、奥莫替尼(olmutinib)、阿美替尼(almonertinib)、艾维替尼(abivertinib)、ask120067、贝福替尼(befotertinib)、罗西替尼(rociletinib)、奥瑞替尼(oritinib)、纳扎替尼(nazartinib)、纳奎替尼(naquotinib)、马维替尼(mavelertinib)。在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶的抗性为或包含对奥希替尼(osimertinib)的抗性。在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶的抗性是或包含对拉泽替尼(lazertinib)的抗性。在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶的抗性是或包含对贝福替尼(befotertinib)的抗性。在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶的抗性是或包含对阿美替尼(almonertinib))的抗性。

29、在某些方面，所述个体之前未接受过针对egfr和/或cmet阳性癌症，或针对包含egfr及和/或cmet畸变的癌症的先前抗癌治疗。在某些方面，所述个体之前未接受过化疗，或包含抗egfr抗体或抗-cmet抗体的治疗。在某些方面，所述个体未接受过egfr酪氨酸激酶抑制剂治疗或西妥昔单抗(cetuximab)治疗。在某些方面，所述双特异性抗体和egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合施用或治疗是一线治疗。在某些方面，所述一线治疗是为了预防对egfr和/或cmet酪氨酸激酶机制发展出抗性，例如在肺癌患者或肺癌中，具体是在非小细胞肺癌中。egfr酪氨酸激酶抑制剂和/或cmet酪氨酸激酶抑制剂的抗性机制，已知会在尤其是患有非小细胞肺癌，例如在转移性或晚期癌症的个体中发展出。因此，本发明也提供了所述第三代酪氨酸激酶抑制剂与所述双特异性抗体的组合物，用于预防所述个体发展出或发生具有egfr酪氨酸激酶抑制剂和/或cmet酪氨酸激酶抑制剂抗性的癌症的方法中。

30、在某些方面，所述个体为人类个体。

31、在某些方面，所述癌症为肺癌。

32、在某些方面，所述癌症是非小细胞肺癌(nsclc)。

33、在某些方面，所述癌症或个体包含活化egfr突变、已证实的酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、三级酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、减弱第三代酪氨酸激酶抑制剂与egfr的结合的突变、获得性酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、egfr基因扩增、cmet突变或cmet畸变。

34、在某些方面，所述癌症或个体包含cmet畸变，例如cmet扩增、cmet过度表达、cmet路径的信号传递增强、cmet基因扩增、和/或cmet蛋白质活性增强。在某些方面，所述癌症或个体包含hgf表达增强。在某些方面，所述癌症或个体包含cmet外显子14跳跃突变。

35、在某些方面，所述cmet失调包含cmet扩增、cmet过度表达、cmet路径的信号传递增强、cmet基因扩增和/或cmet蛋白质活性增强、或cmet外显子14跳跃突变。在某一方面，所述cmet失调是由hgf表达增强引起的。

36、在某些方面，本发明提供一种包含第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂与双特异性抗体的药物组合物，所述双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域。

37、在某些方面，所述药物组合物包含使用说明。

38、在某些方面，本发明的双特异性抗体表达出adcc活性，在某些方面，所述抗体具有增进的adcc活性。在这类方面中，所述抗体可具有改变的adcc活性，通过使一个或多个ch2相对于完整人类ch2结构域变异。因此进一步提供根据本发明双特异性抗体，其为无岩藻醣基化的。在某些方面，本发明抗体包含两个无岩藻醣基化的ch2结构域。在某些方面，本发明抗体包含总共两个ch2结构域，二者都是无岩藻醣基化的。在某些方面，本发明抗体包含两个ch2结构域，二者都是无岩藻醣基化的。

39、在某些方面，本发明的双特异性抗体展现出adcp活性，在某些方面，所述抗体具有adcp活性增强。在某些方面，egfr和cmet结合臂二者，或包含egfr和cmet结合臂的两条重链都对adcp有贡献。在某些方面，本发明的双特异性抗体具有或展示出对nsclc细胞的adcp活性。在某些方面，本发明的双特异性抗体诱导nsclc细胞发生adcp。

40、所述双特异性抗体可包含共同轻链。在某些方面，所述第一可变结构域和所述第二可变结构域包含相同或实质上相同的(共同)轻链可变区。所述共同轻链可变区可为已知与已进行重组的多种人类可变区基因片段良好配对的那些。在某些方面，所述共同轻链是由种系vk基因片段编码的可变区，例如o12/igvκ1-39*01可变区基因片段。优选的轻链可变区包含重排的igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01。在某些方面，cmet结合臂的轻链和egfr结合臂的轻链是相同的(共同)轻链。在某些方面，所述共同轻链是重排的κ轻链igvκ1-39*01/igjκ1*01或igvκ1-39*01/igjκ5*01，其连接到人类轻链恒定区。所述双特异性抗体可为人类抗体。所述双特异性抗体可为全长抗体。它可能具有一个可结合egfr的可变结构域和一个可结合cmet的可变结构域。在某些方面，可结合人类egfr的可变结构域也可有益地结合小鼠egfr和/或食蟹猴egfr。在某种方面中，所述结合或可结合人类egfr的可变结构域是结合人类egfr的结构域iii。可结合cmet的可变结构域可阻断抗体5d5与cmet的结合。可结合cmet的可变结构域可阻断hgf与cmet的结合。所述抗体对cmet的kd可较所述抗体对egfr的kd低至少10倍。一个ch3结构域中位点405和409的氨基酸可与另一个ch3结构域中相对应位点的氨基酸相同(eu编号)。

41、在某些方面，本发明抗体包含第一可变结构域，其包含重链可变区，该重链可变区具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3，

42、其中x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w及x7＝d或g；在x1-x7以外的位点具有0至5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。

43、在某些方面，本发明的抗体包含第二可变结构域，该第二可变结构域包含重链可变区，该重链可变区具有seq id no:1-23(图3)序列之一的氨基酸序列产生0至10个、在某些方面0至5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合的氨基酸序列。

44、现在说明双特异性抗体，其中

45、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w及x7＝g；

46、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w及x7＝g；

47、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝s；x5＝y；x6＝w及x7＝g；

48、x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

49、x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

50、x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；

51、x1＝n；x2＝g；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d及x7＝g；

52、x1＝n；x2＝a；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d及x7＝g；或

53、x1＝s；x2＝g；x3＝g；x4＝y；x5＝l；x6＝d及x7＝g。

54、在某些方面，x1＝n；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；或x1＝n；x2＝a；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d；或x1＝s；x2＝g；x3＝d；x4＝r；x5＝h；x6＝w及x7＝d。

55、在某些方面，x3-x7＝drhwd，以及x1和x2为ng、sg或na。

56、现在说明双特异性抗体，其中第二可变结构域的重链可变区包含具有seq id no:1-3、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:13、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq id no:21、seq id no:22或seq id no:23的序列之一的氨基酸序列产生0至10个、在某些方面0至5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合的氨基酸序列。

57、本发明也提供了一种治疗患有肿瘤的个体的方法，所述方法包含向有此需要的个体施用如本文所述的双特异性抗体。通常，所述个体患有涉及异常细胞的疾病，例如个体可能患有肿瘤或癌症。

58、本技术实现要素：也提供了一种包括在本发明的治疗中的双特异性抗体，该双特异性抗体包含可结合人类表皮生长因子受体(egfr)的胞外部分的第一可变结构域和可结合人类met原致癌基因受体酪氨酸激酶(cmet)的胞外部分的第二可变结构域，其中所述第一可变结构域包含重链可变区，该重链可变区具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayx1x2ntnyaqklqg和包含序列x3x4x5x6hwwlx7a的cdr3，其中

59、x1＝n或s；x2＝a或g；x3＝d或g；x4＝r、s或y；x5＝h、l或y；x6＝d或w及x7＝d或g，在x1-x7以外的位点具有0至5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合，且其中所述第二可变结构域包含重链可变区，该重链可变区具有seq id no:1-23(图3)序列之一的氨基酸序列产生0至10个、优选0至5个氨基酸插入、缺失、取代、添加或其组合。

60、所述第一可变结构域在某些方面包含重链可变区，该重链可变区具有cdr1序列sygis、cdr2序列wisayngntnyaqklqg及包含序列drhwhwwldafdy的cdr3，且所述第二可变结构域在某些方面包含重链可变区，该重链可变区具有cdr1序列sysmn、cdr2序列wintytgdptyaqgftg及cdr3序列etyyydrggypfdp。

61、本发明也提供了一种本发明的双特异性抗体，其用于治疗患有涉及异常细胞的疾病如肿瘤的个体。

62、也提供了本发明的双特异性抗体与第三代酪氨酸激酶抑制剂在制备用于治疗涉及异常细胞的疾病例如肿瘤或癌症的药物中的用途。

63、也提供了一种治疗患有肿瘤的个体的方法，在某些方面，所述肿瘤为egfr阳性肿瘤、cmet阳性肿瘤、或egfr和cmet阳性肿瘤，所述方法包含向有需要的个体施用所述双特异性抗体和第三代酪氨酸激酶抑制剂。

64、当与第三代tki组合使用时，本发明的抗体会抑制hgf和egf/hgf诱导的egfr tki抗性肿瘤细胞株的生长。在某些方面，所述tki是奥希替尼(osimertinib)。在某些方面，所述tki是拉泽替尼(lazertinib)。在某些方面，所述tki是阿美替尼(almonertinib)。在某些方面，所述tki是贝福替尼(befotertinib)。

65、在某些方面，本发明的抗体与所述第三代酪氨酸抑制剂的组合物会抑制hgf诱导的hgf应答细胞的生长，在某些方面，在人类个体的egfr tki抗性或难治性肿瘤、肿瘤模型或细胞株中，例如包括活化egfr突变、已证实的酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、三级酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、减弱第三代酪氨酸激酶抑制剂与egfr的结合的突变、获得性酪氨酸激酶抑制剂抗性突变、egfr基因扩增、cmet突变或cmet畸变的细胞株或模型，在某些方面，为框内外显子20插入突变。在某些方面，在hgf存在时显示出抑制作用。

66、本发明的抗体与第三代tki的组合物在某些方面会抑制hgf诱导的hgf应答细胞的生长，在某些方面为egfr tki抗性肿瘤、肿瘤模型或细胞株，例如包括框内外显子20插入突变的细胞株或模型。

67、在此，术语“难治性”是指对某一治疗没有反应的疾病。难治性疾病可在治疗之前或开始时对所述治疗产生抗性，或者难治性疾病可在治疗期间变为具抗性。

68、在此，术语“抗性”是指一癌症或患者在以处方剂量的相关治疗试剂施用时，对治疗没有反应。

69、在此，“第一代egfr酪氨酸激酶抑制剂”(第一代tki)是指可逆性egfr抑制剂如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，其对携带egfr活化突变(如外显子19缺失和外显子21l858r突变)的nsclc的一线治疗有效。

70、在此，术语“第二代egfr酪氨酸激酶抑制剂”(第二代tki)是指共价不可逆egfr抑制剂如阿法替尼(afatinib)、达克替尼(dacomitib)，其对携带egfr活化突变(如外显子19缺失和外显子21l858r突变)的nsclc的一线治疗有效。

71、在本文中，术语“第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂”(第三代tki)是指共价不可逆egfr抑制剂，如奥希替尼(osimertinib)和拉泽替尼(lazertinib)，其对egfr活化突变具有选择性，例如外显子19缺失和外显子21l858r突变，单独或与t790m突变组合，对野生型egfr具有较低的抑制活性。

72、本发明抗体抑制egf诱导的egf应答细胞的生长，但不诱导与高亲和力二价egfr抗体相关的毒性，例如皮疹和腹泻。这使得所述抗体非常适合与具有自身毒性特征的tki组合使用。

73、本发明还包含一种药物组合物或作为组成部分的试剂盒，其包含本文公开的双特异性抗体与第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂的组合。所述药物组合物在某些方面不呈物理性连接，且包含一含有本发明抗体和第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂的容器。所述药物组合物在某些方面附有使用说明。所述使用说明包括临床相关信息，例如静脉内施用说明。在某些方面，所述第三代egfr酪氨酸激酶，如奥希替尼(osimertinib)、bpid-0316/贝福替尼(befotertinib)、或阿美替尼(almonertinib)，通过相关部门核准后，依照使用说明书施用。在某些方面，奥希替尼(osimertinib)的施用剂量为80mg每天一次。在某些方面，阿美替尼(almonertinib)的施用剂量为110mg每天一次。在某些方面，拉泽替尼(lazertinib)的剂量为240mg每天一次。在某些方面，贝福替尼(befotertinib)的剂量为70mg、75mg或100mg每天一次。贝福替尼(befotertinib)的75mg每日剂量可分为3次口服施用，每次25mg的剂量提供。

74、在某些方面，本发明的双特异性抗体以1000mg施用，具体是使用1000mg的固定剂量。在某种方面中，所述双特异性抗体以1000mg每周一次的剂量提供。在某些方面，所述双特异性抗体以1000mg每两周一次的剂量提供。

75、在某些方面，本发明的双特异性抗体以1500mg施用，具体是使用1500mg的固定剂量。在某种方面中，所述双特异性抗体以1500mg每周一次的剂量提供。在某些方面，所述双特异性抗体以1500mg每两周一次的剂量提供。

76、在某些方面，本发明的双特异性抗体以2000mg施用，具体是使用2000mg的固定剂量。在某种方面中，所述双特异性抗体以2000mg每周一次的剂量提供。在某些方面，所述双特异性抗体以2000mg每两周一次的剂量提供。

77、本发明抗体可用于治疗对以egfr酪氨酸激酶抑制剂治疗有抗性或敏感性减弱的肿瘤，例如对奥希替尼(osimertinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)或阿法替尼(afatinib)，或奥希替尼(osimertinib)、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)或阿法替尼(afatinib)的类似物，或其一或多种相对应化合物和/或其类似物的组合有抗性。

78、因此，本发明的双特异性抗体可与本发明的egfr酪氨酸激酶抑制剂同时、依次或单独施用。在某些方面，所述egfr酪氨酸激酶抑制剂包含或就是所述第三代egfr酪氨酸激酶抑制剂。

79、本发明还包含核酸分子或一组核酸分子，其单独或共同编码本文公开的双特异性抗体或其变体的重链或重链可变区。也提供了编码本文公开的抗体的核酸分子或核酸分子组。

80、在某些方面，所述重链包含igg1抗体的恒定区，在某些方面，是人类igg1抗体。可对所述iggl恒定区的ch2区进行改造，以改变所述抗体的adcc和/或cdc活性，或不改变。在某些方面，所述改变会导致adcc和/或cdc活性增强。在某些方面，所述抗体的ch3-区改造以促进重链的异二聚化，所述重链包含结合egfr的第一重链和结合cmet的第二重链。

81、本发明还包含一种包含一或多种核酸分子的细胞，这些核酸分子单独或共同编码本文公开的双特异性抗体或其变体。也提供了使用上述细胞产生本文公开的双特异性抗体或其变体的方法，在某些方面，与从细胞培养物中收获所述双特异性抗体或其变体一起提供。

82、本发明还包括一种细胞系统，其包含本文公开的双特异性抗体或其变体。

83、本发明还提供一种细胞，其表达所述双特异性抗体和/或包含编码所述双特异性抗体的核酸分子。

84、本发明还包含一种如本文所公开的双特异性抗体，其还包含标记物，在某些方面，其为用于体内成像的标记物。