一种基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法与流程

本发明涉及物质分析检测，特别是涉及一种基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法。

背景技术：

1、可沥滤物是在医疗器械产品与人体不断接触并发挥作用的过程中，或与使用中的其他介质(如药液、血液等)相互作用时，从医疗器械中释放的化学物质，一般包括灭菌残留剂、加工工艺残留、降解产物、溶剂、材料中的单体及添加剂(包括稳定剂、抗氧化剂、增塑剂、着色剂等)等。在医疗器械发挥诊疗作用的同时，可沥滤物也在或短期或长期地对人体产生安全性方面的危害。因此，对其安全性的研究既是企业在设计开发产品阶段需要重点关注内容，也是相关产品技术审评的关注重点。

2、在可沥滤物检测实践中，面临多种实际挑战，如临床接触途径及使用方法多样且复杂、临床样本采集的伦理问题等，对与大部分器械来说，难以进行可沥滤物的真正意义上的研究，而更适宜通过浸提实验替代可沥滤物研究。

3、近年来，对于医疗器械浸提液中可浸提物和可沥滤物含量的分析检测方法为：使用不同极性的溶剂对医疗器械产品进行浸提，所得到的浸提液需要进行溶剂置换，氮吹浓缩后进行上机分析。该方法存在以下不足：首先，对于水或乙醇水等水基质样品浸提液，需要进行溶剂置换，通常采用二氯甲烷，使得二氯甲烷溶剂使用量大，成本提升，且需要振摇后进行氮吹浓缩等步骤，耗时长，费时费力；其次，对于浓缩倍数较高的研究项目，所需要的样品浸提液也就越多，也需要更多数量的样品进行浸提，而医疗器械产品价格昂贵，这将大大提升研究成本。

4、因此，本领域需要研究一种能够基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法，降低有机溶剂使用量并缩短操作时间，大大降低试验成本，从而提升检测效率，也进一步满足科研与市场的需求。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本技术提供一种基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法，包括以下步骤：

2、步骤1、配制内标混标溶液，所述内标混标溶液包括苊-d10、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯-d4、邻甲苯磺酰胺、n-乙基吡咯烷酮和1-甲基-2-吡咯烷酮-d9；

3、步骤2、配制n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液，所述n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液包括苊-d10、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯-d4、邻甲苯磺酰胺、n-乙基吡咯烷酮、1-甲基-2-吡咯烷酮-d9、n,n-二甲基丙酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮、对甲苯磺酰胺、苯乙酮、苯并噻唑、丙烯酸-2-乙基己基酯、苯甲酰甲酸甲酯、二苯醚、二叔丁基-4-甲基苯酚、十四甲基环七硅氧烷、二苯胺、正十八烷、邻苯二甲酸二甲酯、十二内酰胺、十六烷酸丁基酯、乙酰柠檬酸三丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯；

4、步骤3、配制萃取剂和助溶剂，所述萃取剂为二氯甲烷与异丙醇的混合溶液，所述助溶剂为乙醇水溶液；

5、步骤4、取样品浸提液，加入所述内标混标溶液，再加入水或助溶剂，混匀；

6、步骤5、快速注入萃取剂，离心并取出下层有机溶剂置于氮吹管，重复前述萃取操作2次，将所有下层有机相合并至同一个氮吹管中，氮吹浓缩得到待测样品液；

7、步骤6、使用气相色谱质谱联用仪检测n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液及待测样品液，采用内标法建立校准曲线；

8、步骤7、获得待测样品液中未知物峰面积，进行定性和定量，结合校准曲线得到未知物浓度；

9、步骤8、根据未知物浓度计算未知物含量，计算公式如下：

10、

11、式中：

12、c：未知物浓度；

13、v：浸提液体积；

14、n：浸提的医疗器械数量；

15、f：浓缩倍数。

16、具体地，所述步骤4中，样品浸提液0.5ml，氮吹浓缩至0.125ml，得到待测样品液。

17、具体地，所述内标混标溶液中，苊-d10和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯-d4的浓度均为2000μg/ml，邻甲苯磺酰胺、n-乙基吡咯烷酮和1-甲基-2-吡咯烷酮-d9的浓度均为5000μg/ml。

18、具体地，所述n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液中，n,n-二甲基丙酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮和对甲苯磺酰胺的浓度梯度设置为0.5μg/ml～25μg/ml，苯乙酮、苯并噻唑、丙烯酸-2-乙基己基酯、苯甲酰甲酸甲酯、二苯醚、二叔丁基-4-甲基苯酚、十四甲基环七硅氧烷、二苯胺、正十八烷、邻苯二甲酸二甲酯、十二内酰胺、十六烷酸丁基酯、乙酰柠檬酸三丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯的浓度梯度设置为0.2μg/ml～10μg/ml。

19、优选地，所述n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液中，n,n-二甲基丙酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮和对甲苯磺酰胺的工作液浓度分别为0.5μg/ml、2.5μg/ml、5.0μg/ml、12.5μg/ml和25μg/ml；苯乙酮、苯并噻唑、丙烯酸-2-乙基己基酯、苯甲酰甲酸甲酯、二苯醚、二叔丁基-4-甲基苯酚、十四甲基环七硅氧烷、二苯胺、正十八烷、邻苯二甲酸二甲酯、十二内酰胺、十六烷酸丁基酯、乙酰柠檬酸三丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯的工作液浓度分别为0.2μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml、5.0μg/ml和10μg/ml。

20、具体地，所述n,n-二甲基丙酰胺系列标准工作溶液中，苊-d10和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯-d4的浓度均为2μg/ml；邻甲苯磺酰胺、n-乙基吡咯烷酮和1-甲基-2吡咯烷酮-d9的浓度均为5μg/ml。

21、具体地，所述萃取剂中，二氯甲烷和异丙醇的体积比为1:1～1:3，优选为1:2,；所述助溶剂中，乙醇和水的体积比为1:4～1:6，优选为1:5。

22、具体地，样品浸提液、助溶剂和萃取剂的用量比为5:15:1。

23、具体地，所述步骤5中，离心的条件为：1000r/min离心1min。

24、具体地，所述步骤4中，所述加入水或助溶剂是指，当样品浸提液由50％乙醇水作为浸提溶剂对医疗器械产品进行浸提后所得时，加入水；当样品浸提液由水作为浸提溶剂对医疗器械产品进行浸提后所得时，加入助溶剂。

25、具体地，所述步骤6中，所述气相色谱质谱联用仪的气相色谱条件为：色谱柱：agilent db-1毛细管柱30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：280℃；升温程序：40℃保持1min，以10℃/min升至300℃，保持10min；载气：氦气，纯度＞99.999％；进样体积：1.0μl；流速1.0ml/min，不分流模式。

26、具体地，所述步骤6中，所述气相色谱质谱联用仪的气相质谱条件为：离子源：ei离子源；传输线温度280℃；离子源温度230℃；四极杆温度：150℃；电离能量：70ev；溶剂延迟4.5min；监测方式：全扫描模式。

27、具体地，所述校准曲线中各化合物对应内标为：n,n-二甲基丙酰胺对应内标为n-乙基吡咯烷酮，1-甲基-2-吡咯烷酮对应内标为1-甲基-2吡咯烷酮-d9，对甲苯磺酰胺对应内标为邻甲苯磺酰胺，十二内酰胺、正十八烷、十六烷酸丁基酯、乙酰柠檬酸三丁酯和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯的对应内标均为邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯-d4，苯乙酮、苯并噻唑、丙烯酸-2-乙基己基酯、苯甲酰甲酸甲酯、二苯醚、二叔丁基-4-甲基苯酚、十四甲基环七硅氧烷、二苯胺和邻苯二甲酸二甲酯的对应内标为苊-d10。

28、本发明的样品前处理方法具有以下有益效果：

29、1、本发明提供的基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法，采用分散液液微萃取(dllme)技术，相较现有传统的液液萃取方式而言，更加高效便捷，萃取溶剂的用量极少，萃取时间更短，此外，相同浓缩倍数所需要用到的样品浸提液体积也大大减少，从而减少了用于浸提的样品数量，既能显著降低检测成本，同时也极大降低了医疗器械的浸提成本。

30、2、本发明提供的基于分散液液微萃取技术检测医疗器械浸提液中半挥发性未知物含量的方法，对于0.5ml样品浸提液，氮吹浓缩至0.125ml所需的时间极短，耗时短，实验效率提高的同时，避免了氮吹时间过长导致的未知物含量的损失。