一种西洋参中人参皂苷Rk1和Rg5制备工艺及其在功能产品的应用的制作方法

本发明涉及功能食品、保健品和生物医药制品等领域，具体地说是一种西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺及其在功能产品的应用。

背景技术：

1、西洋参为传统药食同源类植物，使用历史悠久，药理活性显著，广泛应用于医药及食品领域。其中，人参皂苷rk1和rg5作为西洋参稀有人参皂苷的代表性成分，具有免疫调节、心血管保护、代谢调节等多种功效。然而，西洋参中人参皂苷rk1和rg5等成分具有极性大、结构接近等特点，传统的提取分离存着着效率不高、纯度不足等技术瓶颈，限制了其在实际应用中的效果。因此，建立人参皂苷rk1和rg5化学成分高效分离制备工艺，快速且大量制备高纯度单体成分，对进一步开展药材的药理学研究、产品研制和质量控制具有重要意义。

2、高速逆流色谱技术是一种连续的液-液分配色谱技术，通过两个不相容的液相之间进行组分分配而不需要固体支撑。hsccc主要是利用单向流体动力平衡的现象，向螺旋管中注入互不相溶的两相溶液，等其达到动态平衡后注入待分离的样品，样品中的化学成分根据不同的分配系数先后洗脱出来，从而实现分离纯化。

3、使用传统逆流色谱技术分离化合物时，往往会出现对于分配系数相差较大的化合物不能一次分离成功，或者对于分配系数接近的化合物无法分离等问题。而梯度逆流色谱技术可以有效分离分配系数较大的化合物，循环逆流色谱技术可以显著改善分配系数接近的化合物的分离效果。因此，探索一种传统逆流色谱与现代逆流色谱技术相结合的分离模式，对于人参皂苷rk1和rg5制备，以及相关产品的研发具有重要意义。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供了一种西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺及其在功能产品的应用，有效解决了西洋参制黑参中稀有人参皂苷化合物的提取和分离问题。

2、本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：第一方面，本发明提供一种西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，包括如下步骤：

3、s1：制备人参皂苷提取物；

4、s2：大孔树脂吸附：用mci大孔树脂对步骤s1中的人参皂苷提取物进行吸附，得到多个具有少量化合物的组分；

5、s3：对步骤s2中的组分采用循环逆流色谱分离：溶剂体系为正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，体积比为2-4:6-8:2-4:6-8，所述溶剂系统静置后，上相为有机相，作为固定相，下相为水相，作为流动相；逆流色谱条件为：流速为4-6ml/min，样品的最佳进样量为40-80mg，流速为5ml/min，进样量为60mg。

6、作为优化，步骤s3中，循环逆流色谱分离的步骤为：

7、s1：将固定相以20ml/min的流速泵入高速逆流色谱中，等到色谱柱中充满固定相以后，停止流速，以“fwd-in”的运行方式和800rpm的转速运行高速逆流色谱，蒸发光增益值设定为6；

8、s2：当需要循环分离的化合物即将洗脱出来时，分离模式切换到在线储存模式，在储存回路中收集目标组分后，将六通阀切换至收集模式，使得在色谱柱中洗脱出来的组分再次泵入高速逆流色谱中以进一步分离。

9、作为优化，大孔树脂吸附的步骤为：将人参皂苷粗提物，甲醇溶液并过滤，将过滤后的皂苷溶液注入装有mci大孔树脂填料的中压柱中，设置流速为40ml/min，使用50％的乙醇溶液进行平衡，再使用浓度为75-85％的乙醇溶液洗脱稀有人参皂苷，进行高效液相色谱分析检测，得到多个具有少量化合物的组分。

10、作为优化，步骤s3中循环分离的次数为4次。

11、第二方面，本发明提供了一种上述制备工艺在制备有助于治疗骨质疏松产品中的应用。

12、第三方面，本发明提供了一种上述制备工艺在制备有助于免疫调节产品中的应用。

13、第四方面，本发明提供了一种上述制备工艺在制备有助于抗疲劳产品中的应用。

14、本发明的有益效果是：本发明提供的一种西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺及其在功能产品的应用，采用以正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(3:7:3:7，v/v)的溶剂体系进行循环逆流模式，循环分离4次后化合物1、2完全分离。分离获得的各段物质通过hplc检测分析，纯度均超过98％，并经ms和1h和13cnm r进行结构鉴定为人参皂苷rk1(1)、rg5(2)，人参皂苷rk1(1)和rg5(2)的提取对发现活性更强的成分和研制抗肿瘤新药将具有重要的意义。

技术特征：

1.一种西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，其特征在于：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，其特征在于，步骤s3中，循环逆流色谱分离的步骤为：

3.如权利要求1所述的西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，其特征在于，步骤s3中，流速为5ml/min，进样量为60mg。

4.如权利要求1所述的西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，其特征在于，步骤s2中，大孔树脂吸附的步骤为：将人参皂苷粗提物，甲醇溶液并过滤，将过滤后的皂苷溶液注入装有mci大孔树脂填料的中压柱中，设置流速为40ml/min，使用50％的乙醇溶液进行平衡，再使用浓度为75-85％的乙醇溶液洗脱稀有人参皂苷，进行高效液相色谱分析检测，得到多个具有少量化合物的组分。

5.如权利要求1所述的西洋参中人参皂苷rk1和rg5制备工艺，其特征在于，步骤s3中循环分离的次数为4次。

6.如权利要求1-5任意一项所述制备工艺在制备有助于治疗骨质疏松产品中的应用。

7.如权利要求1-5任意一项所述制备工艺在制备有助于免疫调节产品中的应用。

8.如权利要求1-5任意一项所述制备工艺在制备有助于抗疲劳产品中的应用。

技术总结本发明涉及功能食品、保健品和生物医药制品等领域，具体地说是一种西洋参中人参皂苷Rk1和Rg5制备工艺及其在功能产品的应用，采用以正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(3:7:3:7，v/v)的溶剂体系进行循环逆流模式，循环分离4次后化合物1、2完全分离。分离获得的各段物质通过HPLC检测分析，纯度均超过98％，并经MS和<supgt;1</supgt;H和<supgt;13</supgt;CNM R进行结构鉴定为人参皂苷Rk1(1)、Rg5(2)。技术研发人员：于红霞,段媛媛,王岱杰,雷复婷,张智琪,姜宝红受保护的技术使用者：威海市文登区道地参业发展有限公司技术研发日：技术公布日：2024/12/2