与VEGF-A和IL6结合的抗体及使用方法与流程

本发明涉及抗vegf-a/抗il6抗体及其使用方法。

背景技术：

1、与vegf结合的抗体(例如，兰尼单抗)用作用于治疗眼部血管疾病如年龄相关性黄斑变性的治疗剂。与il6结合的抗体(例如，如wo2014/074905中公开的)已建议用于治疗眼部疾病。

2、wo2012/163520公开了在一对vh和vl结构域(“dutafab”)中包含两个互补位的双特异性抗体。wo2012/163520的双特异性抗体的每个互补位包含来自重链和来自轻链cdr的氨基酸，其中重链cdr-h1和cdr-h3以及轻链cdr-l2促成第一互补位，而轻链cdr-l1和cdr-l3以及重链cdr-h2促成第二互补位。包含各个互补位的单特异性抗体是从不同的fab文库中独立分离的，fab文库在第一或第二互补位中均多样化。鉴定所述单特异性抗体的氨基酸序列，并合并成双互补位的vh和vl对。wo2012/163520中公开了一种与vegf和il-6特异性结合的示例性fab片段作为概念证明实例，该片段称为“vh6l”，其具有seq id no:01的vl序列和seq id no:02的vh序列。

3、的确需要改善的与vegf和与il6结合的治疗性抗体以用于眼部疾病的临床应用，例如，通过改善与标准护理相比的疗效以及通过改善作用的持续时间并继而降低玻璃体内注射的频率以使针对患者的施用负担减小来实现。

技术实现思路

1、本发明涉及双特异性抗vegf-a/抗il6抗体及其使用方法。

2、在一方面，本发明涉及一种与人vegf-a和与人il6结合的抗体，该抗体包含：vh结构域，该vh结构域包含：(a)包含seq id no:18的氨基酸序列的cdr-h1，(b)包含seq id no:19的氨基酸序列的cdr-h2和(c)包含seq id no:20的氨基酸序列的cdr-h3；以及vl结构域，该vl结构域包含：(d)包含seq id no:15的氨基酸序列的cdr-l1，(e)包含seq id no:16的氨基酸序列的cdr-l2和(f)包含seq id no:17的氨基酸序列的cdr-l3；该抗体包含：可变重链结构域，该可变重链结构域包含具有至多5个氨基酸取代的seq id no:22的氨基酸序列；以及可变轻链结构域，该可变轻链结构域包含具有至多5个氨基酸取代的seq id no:21的氨基酸序列。

3、本发明的一个实施例涉及一种与人vegf-a和与人il6结合的抗体，该抗体包含seqid no:22的vh序列和seq id no:21的vl序列。

4、本发明的一个实施例涉及一种抗体，其包含seq id no:24的重链氨基酸序列和seq id no:23的轻链氨基酸序列。

5、本发明的一个实施例涉及一种与人vegf-a和与人il6结合的抗体fab片段。

6、本发明的一个实施例涉及一种与人vegf-a和与人il6结合的双特异性抗体fab片段。

7、在另一方面，本发明提供了一种与il6结合的抗体，该抗体与根据本发明的抗体结合至il6上的相同表位。

8、在另一方面，本发明提供了一种与人il6结合的抗体，该抗体包含：

9、a)基于人vh3框架的vh结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基

10、y1、i2、q3、y26、e27、f28、t29、h30、q31、d32、p52a、r94、i96、d97、f98、d101、t102，以及基于人vκ1框架的vl结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基y49、d50、s53、n54、y55、p56、s57、y91、y96；或者

11、b)基于人vh3框架的vh结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基y1、p2、q3、v26、l27、f28、k29、h30、q31、d32、p52a、r94、l96、d97、f98、d101、e102，以及基于人vκ1框架的vl结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基y49、d50、d53、r54、y55、p56、e57、y91、y96(根据kabat编号)。

12、在另一方面，本发明提供了一种与il6结合的抗体，该抗体与具有seq id no:35的vl结构域和seq id no:36的vh结构域的抗体结合至il6上的相同表位。在一个实施例中，抗体包含：具有人vh3框架的vh结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基1、2、3、26、27、28、29、30、31、32、52a、94、96、97、98、101、102；以及具有人vκ1框架的vl结构域，其中il6互补位包含氨基酸残基49、50、53、54、55、56、57、91、96。

13、在一方面，本发明提供了一种编码本发明的抗体的经分离的核酸。

14、在一方面，本发明提供了一种包含本发明的核酸的宿主细胞。在一个实施例中，宿主细胞为cho细胞。在一个实施例中，宿主细胞为大肠杆菌细胞。

15、在一方面，本发明提供了一种包含本发明的核酸的表达载体。

16、在一方面，本发明提供了一种产生与人vegf-a和与人il6结合的抗体的方法，该方法包括培养本发明的宿主细胞，从而产生抗体。

17、在一方面，本发明提供了通过本发明的方法产生的抗体。

18、在一方面，本发明提供了一种包含本发明的抗体和药用载体的药物制剂。

19、在一方面，本发明提供了一种包含本发明的抗体和药用载体的预填充注射器。

20、在一方面，本发明提供了一种包含本发明的抗体和药用载体的眼部植入物。在一个实施例中，本发明包括一种输液港(port)递送装置，其包括本发明的抗体。

21、在本发明的一个方面，输液港递送装置施用抗体或药物制剂。

22、在一方面，本发明提供了本发明的抗体，其用于作为药物使用，在一个实施例中，其用于在治疗血管疾病中使用。

23、在一方面，本发明提供了本发明的抗体或本发明的药物组合物在制备药物、在一个实施例中为用于治疗血管疾病的药物中的用途。

24、在一方面，本发明提供了一种治疗患有血管疾病的个体的方法，该方法包括向该个体施用有效量的本发明的抗体或本发明的药物组合物。

25、在一方面，本发明提供了一种抑制个体的血管生成的方法，该方包括向该个体施用有效量的本发明的抗体或本发明的药物组合物以抑制血管生成。

26、根据本发明，提供了一种治疗性抗vegf-a/抗il6抗体，即使当以抗体fab片段形式提供时，该抗体也能够独立地结合其靶抗原。它表现出优异的在药理学相关范围内的与食蟹猴靶标的kd和物种交叉反应性。本发明的抗体适用于眼部血管疾病的治疗。本发明的抗体提供了几种有价值的特性，包括允许其治疗应用的良好可表达性和可开发性(例如，高结合效力、高生物物理和生物化学稳定性、高浓度制剂)，特别是支持低有效剂量的对两个靶标的高亲和力，以及有利于长持续时间的高稳定性。与非抗体方法相比，本发明的抗体由于其高度人性化和缺乏人工结构域和接头而倾向于更容易接受。此外，本发明的抗体有利于以高浓度液体制剂提供，其粘度适合于眼部应用。因为其能以高浓度提供，所以利用本发明的抗体进行治疗对于患者而言更容易接受，因为在一次治疗中可以应用更高剂量的治疗剂，从而允许更长的治疗周期。双特异性fab片段诸如本发明中描述的双特异性fab片段由于分子量低得多而具有优于双特异性全长igg抗体的额外优点。而在提供相同数量的结合位点时，fab的分子量为约50kda，全长抗体的重量是fab的分子量的三倍(约150kda)。因此，对于给定量的药物，双特异性fab片段将含有为全长igg抗体三倍的结合位点。