一种粪便检测袋及其制备方法和应用与流程

本发明涉及粪便检测，具体公开了一种粪便检测袋及其制备方法和应用。

背景技术：

1、粪便检测是体外诊断三大常规检测之一，通过检测人体粪便，可获得检测者消化系统功能、病理变化以及微生物和寄生虫感染等信息。

2、市场上的粪便检测产品，测试结果多为单一指标，例如便隐血检测试剂盒、转铁蛋白检测试剂盒、钙卫蛋白检测试剂盒、轮状病毒检测试剂盒、腺病毒检测试剂盒、诺如病毒检测试剂盒、便隐血/转铁蛋白双联检测试剂盒等，一次测试只能得出一个或者最多两个指标的检测结果。检测者想要进行粪便中多个生物标志物的检测，不仅需要从不同厂家采购不同种类的试剂盒，而且还需要分别按照不同厂家的试剂盒操作说明，分别进行粪便取样、处理粪便以及加样，势必增加检测时间和操作难度。

3、上述的胶体金检测试剂盒，均需要用粪便采集器人工采集粪便，然后将采集的粪便放入专用的粪便稀释管内混合均匀，进行稀释和处理，再将粪便稀释管中处理后的粪便稀释液，手工加样到检测卡的加样孔中，启动检测卡的反应。大多数操作者在粪便采集、处理以及加样的过程中，对粪便产生的气味非常敏感，会出现恶心呕吐情况；在将粪便样本加入到粪便稀释管内进行混匀的过程，以及将处理后的粪便加样到检测卡加样孔的过程中，会出现粪便样本溢出的情况。

4、市场上的胶体金检测试纸条，大多是将胶体金标记的抗体干燥固定在玻璃纤维上，做成金标垫（胶体金结合垫），粪便中待测目标抗原与金标垫中的金标抗体结合后，很快就层析到硝酸纤维素膜（nc膜）上面与包被抗体反应，由于金标垫与包被抗体之间的物理距离过短，有一部分待测目标抗原与金标垫中的金标抗体还没有来得及充分反应，就与硝酸纤维素膜上面的包被抗体结合，导致与金标垫中的金标抗体结合过少，使得试纸条的灵敏度偏低。

5、综上所述，制备一种联合检测一体化粪便检测袋具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种粪便检测袋及其制备方法和应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、一种粪便检测袋的制备方法，包括以下操作步骤：

3、步骤1：试纸条组合体的制备：

4、s1.1：在pvc底板中间位置分别贴上6种不同的硝酸纤维素膜；在pvc底板的左侧贴上样品垫，切条，得到6种不同试纸条；

5、s1.2：将6种不同试纸条均匀设置在环形吸水垫上；试纸条中pvc底板右侧与环形吸水垫贴合，试纸条中硝酸纤维素膜与环形吸水垫有2mm重叠；得到试纸条组合体；

6、步骤2：试纸条组合体与真空负压舱下盖的组装：

7、s2.1：取设有真空负压舱、插槽、t形缓冲舱、试纸条固定槽，橡胶圈凹槽的真空负压舱下盖，备用；

8、s2.2：将试纸条组合体的环形吸水垫部分装入真空负压舱下盖b面的真空负压舱；其中，试纸条组合体的6种不同试纸条对应设置在试纸条固定槽中，试纸条固定槽旁分别设有1对t行缓冲舱，t行缓冲舱设置在6种不同试纸条的硝酸纤维素膜区域两侧；得到半成品a；

9、步骤3：防水袋的制备：

10、将内层防水袋与粪便过滤网连接，外层防水袋嵌在内层防水袋外，形成可承载容纳粪便溶液的空间；取6根含有不同金标抗体探针的样品管道固定在外层防水袋和内层防水袋之间；样品管道b端伸入粪便过滤网下部；样品管道a端使用密封片热封，得到防水袋；

11、步骤4：防水袋与半成品a中真空负压舱下盖的组装：

12、将防水袋中样品管道a端套入橡胶圈，将其固定在半成品a中真空负压舱下盖的试纸条固定槽中，与试纸条固定槽上橡胶圈凹槽连接；得到半成品b；

13、步骤5：真空负压舱上盖与半成品b中真空负压舱下盖的组装：

14、s5.1：取设有观察窗口、弹簧按钮孔、弹簧按钮、抽真空孔、插接凸起的真空负压舱上盖，备用；

15、s5.2：将真空负压舱上盖的b面上设置24组插接凸起，与半成品b中真空负压舱下盖的24组插槽一一对应插接组装；抽真空；得到粪便检测袋。

16、较为优化的，步骤1中，所述6种不同试纸条中对应的6种不同硝酸纤维素膜上分别包被有6种不同的检测线，为t1线、t2线、t3线、t4线、t5线、t6线，并包被质控线c；

17、所述质控线c包被羊抗鼠igg抗体；所述6种不同的检测线分别为t1线包被抗人血红蛋白单抗、t2线包被转铁蛋白单抗、t3线包被钙卫蛋白单抗、t4线包被轮状病毒单抗、t5线包被腺病毒单抗、t6线包被诺如病毒单抗；

18、所述6种不同试纸条与6根含有不同金标抗体探针的样品管道的检测项目一一对应；对应的不同金标抗体探针分别为金标抗人血红蛋白单抗、金标转铁蛋白单抗、金标钙卫蛋白单抗、金标轮状病毒单抗、金标腺病毒单抗、金标诺如病毒单抗；

19、对应6种不同的检测线的对应的检测项目分别为便隐血、转铁蛋白、钙卫蛋白、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒。

20、较为优化的，所述观察窗口设置在真空负压舱上盖a面，共6个，用于对应观察6种检测项目；每个观察窗口设有“t”、“c”标识；靠近“t”标识的位置有6个弹簧按钮，即6个启动按钮；用于刺破样本管道a端的密封片，打通真空负压舱与样本反应管道，启动试纸条反应；启动时，弹簧按钮按入弹簧按钮孔；

21、所述抽真空孔用于将真空负压舱抽真空形成负压状态。

22、较为优化的，所述金标抗体探针的制备方法为：

23、s6.1：将haucl4水溶液煮沸，加入柠檬酸三钠水溶液，溶液颜色转变为紫红色后，继续煮沸4~6分钟，冷却，加水恢复至初始体积，得到胶体金；

24、s6.2：将胶体金，加入k2co3，调节ph至7.4~7.6，搅拌下，加入6种不同的抗体，室温反应30~35分钟，反应结束后，加入bsa溶液，室温反应20~25分钟，离心，上清取沉底，加入金标工作液，得到6种不同金标溶液；

25、s6.3：将不同金标溶液加入至样本管道中，在37℃烘箱中干燥，干燥时间≥8小时，得到6种不同的金标抗体探针。

26、较为优化的，所述胶体金中，haucl4水溶液的浓度为0.03%；柠檬酸三钠水溶液的浓度为2%；haucl4水溶液与柠檬酸三钠水溶液的比例为600ml:14.2ml；所述胶体金中颗粒大小为30~70nm。

27、较为优化的，所述不同金标溶液中，所述6种不同的抗体为抗人血红蛋白单克隆抗体、转铁蛋白单克隆抗体、钙卫蛋白单克隆抗体、轮状病毒单克隆抗体、腺病毒单克隆抗体、诺如病毒单克隆抗体；

28、胶体金与6种不同的抗体、金标工作液的比例为10ml:80~100μg:1ml；所述bsa的终浓度为0.05%。

29、较为优化的，所述硝酸纤维素膜的制备方法为：

30、s7.1：抗人血红蛋白单抗、转铁蛋白单抗、钙卫蛋白单抗、轮状病毒单抗、腺病毒单、诺如病毒单抗分别用0.01m pbs稀释，分别对应得到t1溶液、t2溶液、t3溶液、t4溶液、t5溶液、t6溶液；羊抗鼠igg抗体用0.01m pbs稀释，得到c溶液；

31、s7.2：t1溶液、t2溶液、t3溶液、t4溶液、t5溶液、t6溶液分别与c溶液，按照出液量为0.8~1μl/cm，速度为80~100mm/s的划膜参数，在硝酸纤维素膜上进行划线，37℃烘箱烘干8小时，得到包被有t1线、t2线、t3线、t4线、t5线、t6线和质控线c的6种不同的硝酸纤维素膜。

32、较为优化的，所述6种不同的硝酸纤维素膜上的t1线、t2线、t3线、t4线、t5线、t6线分别靠近样品垫一端，c线靠近环形吸水垫一端；

33、所述t1溶液的浓度为1.0~1.2mg/ml；t2溶液的浓度为1.2~1.5mg/ml；t3溶液的浓度为1.0~1.2mg/ml；t4溶液的浓度为1.2~1.5mg/ml；t5溶液的浓度为1.2~1.5mg/ml；t6溶液的浓度为1.2~1.5mg/ml；c溶液的浓度为2.5~3.0mg/ml。

34、较为优化的，所述的一种粪便检测袋的制备方法制备得到的粪便检测袋。

35、较为优化的，所述的粪便检测袋用于一体化检测粪便中便隐血、转铁蛋白、钙卫蛋白、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒的六种项目。

36、本发明可以在样本反应管道中装配多个生物标志物的金标捕获抗体作为探针，实现多种生物标志物的检测组合，可以同时检测便隐血、转铁蛋白、钙卫蛋白、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒，可实现一次检测，即可同时获得便隐血、转铁蛋白、钙卫蛋白、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒等多项检测指标的检测结果，降低了检测者操作难度，有效提高检测效率。

37、本发明将胶体金标记抗体固定在样本管道中，与市面上把胶体金标记抗体固定在玻璃纤维膜上做成金标垫（胶体金结合垫）的传统处理方式不同，粪便中待测目标抗原与样本管道中的金标抗体物理反应时间被延长，金标抗体与目标待测抗原充分反应结合，可极大的提高整个试纸条反应体系的灵敏度。

38、反应原理：粪便样本被粪便过滤网22承载，加入粪便溶解剂，使粪便样本软化，目标待测物质溶解到粪便溶解剂中；按压弹簧按钮8刺破样本管道a端17的密封片16，打通真空负压舱5与样本反应管道，粪便溶液由于大气压力的作用流向样本管道，经过样品垫1二次过滤掉细小的粪便残渣，层析到硝酸纤维素膜2上，而启动试纸条免疫层析反应。

39、如果粪便中有血红蛋白、转铁蛋白、钙卫蛋白、轮状病毒、腺病毒、诺如病毒抗原，则分别与样本管道中的金标抗体探针20-金标抗人血红蛋白单抗、金标转铁蛋白单抗、金标钙卫蛋白单抗、金标轮状病毒单抗、金标腺病毒单抗、金标诺如病毒单抗，在样本管道中结合，形成目标待测抗原-金标抗体复合物；该目标待测抗原-金标抗体复合物，在大气压力作用下继续沿着样本管道流动，分别层析到6种试纸条的硝酸纤维素膜2区域时，分别与t1-t6上的抗体反应：即t1线上的抗人血红蛋白单抗、t2线上的转铁蛋白单抗、t3线上的钙卫蛋白单抗、t4线上的轮状病毒单抗、t5线上的腺病毒单抗、t6线线上的诺如病毒单抗反应，形成包被抗体-目标待测抗原-金标抗体复合物；而被固定在硝酸纤维素膜2区域而出现肉眼可见的显色条带。

40、无论粪便样本中是否存在待测标志物，一条有色条带都会出现在质控线c区。质控线c线区内所显现的有色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准；若无质控线c出现，则实验无效。硝酸纤维素膜2区域的两侧有t形缓冲舱13结构，起到分流、缓冲作用，防止液体流动过快。真空负压舱5上的环形吸水垫3可以吸收粪便溶液防止回流。