一种制作冻干菌粉的方法及冻干菌粉与流程

本发明属于冻干菌粉制备领域，具体涉及一种制作冻干菌粉的方法及冻干菌粉。

背景技术：

1、现有的有机酸菌株基本都是通过基因编辑后的改良菌种，基因改造后的菌株容易出现基因变异，质粒丢失，菌株退化等现象，所以为了更好的保持原有的菌株性能，需要进行冻干粉的制作和保存，干粉在-80℃和液氮中保存，可以较好的保持菌株原有的性状和稳定性。

2、目前，多采用采用菌液干燥制成干粉来保存菌株，但是，这中保存菌株的方式成活率不足，仍有待提升，为此提出一种制作冻干菌粉的方法。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种制作冻干菌粉的方法及冻干菌粉，解决了现有技术中的问题。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

3、一种制作冻干菌粉的方法，包括以下步骤：

4、s1，活化复壮所需菌种，制成混悬液；

5、s2，将活化的混悬液在固体培养基上纯化培养，挑选单个菌落进行后续培养；

6、s3，将固体培养基上的单个菌落挑至斜面作固体纯化富集培养，形成菌落泥；

7、s4，将斜面上的全部菌落泥刮入脱脂奶粉保护液中进行充分混匀，进行保护液包埋；

8、s5，将菌落泥与脱脂奶粉保护液的混合溶液先放入冰箱预冻，接着放入冰箱冷冻，之后放入冷冻干燥机冷冻干燥，得到冻干样品；

9、s6，干燥结束后，对冻干样品进行研磨，得到粉状形态即为冻干菌粉。

10、进一步地，s1中，制备混悬液的步骤为：

11、将菌种置于无菌培养皿中，加入mrs培养基；

12、将含菌种的培养基放入恒温振荡器中，在37℃条件下震荡培养24小时，得到混悬液。

13、进一步地，所述菌种为嗜酸乳杆菌。

14、进一步地，s2中，纯化培养的步骤为：

15、将活化的菌种混悬液均匀涂布于固体培养基表面；

16、将培养皿置于37℃的恒温培养箱中培养48小时。

17、进一步地，所述固体培养基为：mrs琼脂培养基。

18、进一步地，s3中，所述菌落泥的制备过程为：

19、从固体培养基中挑取单个菌落，转接至含有mrs琼脂培养基的斜面试管中；

20、将斜面试管置于37℃恒温培养箱中培养48小时，观察菌落形态；

21、经过纯化后，得到稳定的单一菌株，培养形成菌落泥。

22、进一步地，s4中，所述保护液包埋的步骤为：

23、将斜面试管中所有的菌落泥刮入配置好的脱脂奶粉保护液中；

24、使用磁力搅拌器搅拌，使菌落泥充分与脱脂奶粉保护液均匀混合，形成包埋效果。

25、进一步地，s5中，所述冻干样品的制备过程为：

26、将脱脂奶粉保护液和菌落泥的混合溶液放入-20℃冰箱中进行预冻1.5h；

27、预冻完成后，将样品转移至-80℃冰箱中继续放置10小时；

28、将样品从-80℃冰箱取出，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得到冻干样品；冷冻干燥机温度为-50℃，压力为50pa，干燥时间为24h。

29、进一步地，s6中，研磨采用行星式研磨机，研磨机转速为：3000r/min，研磨时间为20min，研磨后，使用100目筛网进行筛分。

30、一种冻干菌粉，使用上述的一种制作冻干菌粉的方法制备而成。

31、本发明的有益效果：

32、1、本发明在制备冻干菌粉时，将传统的离心后的菌液换成纯种的大量菌泥，大大增加了菌群密度，成活率显著提高。

33、2、本发明采用脱脂奶粉作菌泥的混悬液，更好的维持菌株的性状和稳定性，减少营养液中的物质对菌体的影响。

技术特征：

1.一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s1中，制备混悬液的步骤为：

3.根据权利要求1或2所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s1中，所述菌种为嗜酸乳杆菌。

4.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s2中，纯化培养的步骤为：

5.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，所述固体培养基为：mrs琼脂培养基。

6.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s3中，所述菌落泥的制备过程为：

7.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s4中，所述保护液包埋的步骤为：

8.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s5中，所述冻干样品的制备过程为：

9.根据权利要求1所述的一种制作冻干菌粉的方法，其特征在于，s6中，研磨采用行星式研磨机，研磨机转速为：3000r/min，研磨时间为20min，研磨后，使用100目筛网进行筛分。

10.一种冻干菌粉，其特征在于，使用权利要求1-9任一项所述的一种制作冻干菌粉的方法制备而成。

技术总结本发明公开一种制作冻干菌粉的方法及冻干菌粉，属于冻干菌粉制备领域；一种制作冻干菌粉的方法包括：活化复壮所需菌种，制成混悬液，将混悬液在固体培养基上纯化培养，挑选单个菌落进行后续培养；将固体培养基上的单个菌落挑至斜面作固体纯化富集培养，形成菌落泥；将斜面上的全部菌落泥刮入脱脂奶粉保护液中进行充分混匀，进行保护液包埋；将菌落泥与脱脂奶粉保护液的混合溶液先放入冰箱预冻，接着放入冰箱冷冻，之后放入冷冻干燥机冷冻干燥，得到冻干样品；干燥结束后，对冻干样品进行研磨，得到粉状形态即为冻干菌粉；本发明中将传统的离心后的菌液换成纯种的大量菌泥，大大增加了菌群密度，成活率显著提高。技术研发人员：陈伟,周悦,彭敏,常宇欢受保护的技术使用者：普立思生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2025/1/13