一种利用有孢汉逊酵母HO-1发酵制备的再造烟叶的制作方法

本发明属于烟草制备，涉及造纸法制备再造烟叶技术，具体的涉及一种利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶。

背景技术：

1、仙人掌有孢汉逊酵母(hansen iaspora opunt iae)在分类学上属于真核生物原界，真菌界，子囊菌门，酵母亚门，酵母纲，酵母目，酵母科，有孢汉逊酵母属。仙人掌有孢汉逊酵母是一种非酿酒酵母，可从天然采收的葡萄等浆果中分离出来，具有生产乙醇的能力并可导致浆果的腐败，还能够保护植物，避免真菌病害。

2、造纸法再造烟叶的制造是目前烟草行业中的重要技术，在卷烟中添加适量的再造烟叶，一方面可以最大限度地节省烟草原料，有效降低卷烟成本；另一方面可以在一定程度上使卷烟的物理性能和化学成分按人们的意愿或要求得到调整和改善，有效降低卷烟中的焦油量和其他有害物质，稳定卷烟产品质量，从而有助于卷烟内在品质的提高，是减少和改善烟草不良成分的一项重要技术措施。而鉴于造纸法再造烟叶是利用烟草物质(烟梗、烟末、碎烟片等)为主体原料，经过水提、浓缩后，固体部分加工成片基，液体部分形成浓缩液(即再造烟草浓缩液)，进一步配比成涂布液涂布在片基上，形成的烟草制品。在形成浓缩液的过程中，一些大分子物质溶于水，被保留下来，增加了浓缩液的粘度，影响涂布率，且属于吸食杂气前体物；浓缩液中的香味成分由于沸点较低，挥发损失较多，降低了造纸法再造烟叶的吸食品质，导致了再造烟叶与天然烟叶相比香气质不足。

3、为提升再造烟叶的香气质，研究者在生产工艺和外源添加香精香料方面进行了诸多尝试，如朱红琴等研究了再造烟叶干燥过程的干燥时间和温度对致香成分的影响(“干燥温度和时间对造纸法再造烟叶致香成分的影响”,朱红琴等，《河南农业大学学报》)；宁勇等在再造烟叶中添加沉香成分用于烟叶提香(“沉香成分在造纸法再造烟叶中的应用研究”，宁勇等，《林产工业》)，上述方法对于再造烟叶香气质的保留和改善能够起到一定效果，但对于再造烟叶本源性的香气质不佳的问题改善较小。

4、研究表明微生物发酵技术在不同烟草制品的增香方面均具有潜在的应用前景，例如杜飞等从茅台酒酒糟和茯砖茶筛选出产香酵母和产香曲霉，两者以绿茶末为原料发酵的产物具有茶香、酒香、蜜甜香及特殊香味，对烟草制品的感官品质改善明显(“两种产香微生物分离鉴定及其发酵液增香烟草研究”，杜飞等，《山地农业生物学报》)；叶建斌等利用红茶菌发酵烟草浸提液，获得了特色酸香型烟草浸膏(“红茶菌发酵制备特色酸香型烟草浸膏”，叶建斌等，《食品与生物技术学报》)。

5、可见，开发适合烟草制品增香的微生物菌种对于改善烟草浓缩液香气质不足的缺陷，最终达到改良再造烟叶品质具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶的技术，通过特定有孢汉逊酵母的选择，通过仙人掌有孢汉逊酵母ho-1发酵再造烟草浓缩液，从而获得有效增加酯类、醇类和酮类等烟草关键香味物质的效果，达到提质增香的目的，可有效提高再造烟叶的品质。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，所述再造烟叶由造纸法制得，具体为采用仙人掌有孢汉逊酵母ho-1制备的种子液发酵再造烟草浓缩液制得；所述仙人掌有孢汉逊酵母ho-1，其碱基序列如seq id no.1所示，其分类命名为仙人掌有孢汉逊酵母hansen iaspora opunt iae，已于2023年07月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.28023，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

4、优选的，所述仙人掌有孢汉逊酵母ho-1种子液的制备步骤如下：

5、将仙人掌有孢汉逊酵母ho-1单菌落接种到ypd液体培养基中，在温度25-35℃，ph3-5,转速为200r/min的摇床中培养24h，得种子液。

6、优选的，所述发酵的具体操作为：调节仙人掌有孢汉逊酵母ho-1种子液od600＝1，以1:5的体积比接种至80％浓度梯度的再造烟草浓缩液中，25℃、ph4条件下，发酵24h。

7、优选的，所述80％浓度梯度的再造烟草浓缩液由再造烟叶浓缩液、ypd液体培养基和水按体积比8:1:1混合后制得。

8、优选的，所述ypd液体培养基的成分为：10g/l酵母提取物，20g/l蛋白胨，20g/l葡萄糖，溶剂为水。

9、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

10、本发明通过特定有孢汉逊酵母的选择，将仙人掌有孢汉逊酵母ho-1扩增制备成种子液后，发酵再造烟草浓缩液制备造纸法再造烟叶时，可有效增加酯类、醇类、酮类和杂环及其他等烟草关键香味物质，提高其评吸效果。由于本发明可在短时间内，以较低成本和较高效率较好改善烟草的吸食品质，加上其操作流程较为简便，因而使得本申请在卷烟制备领域表现出较好的应用价值和应用前景。

技术特征：

1.一种利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述再造烟叶由造纸法制得，具体为采用仙人掌有孢汉逊酵母ho-1制备的种子液发酵再造烟草浓缩液制得；所述仙人掌有孢汉逊酵母ho-1，其分类命名为仙人掌有孢汉逊酵母hanseniasporaopuntiae，已于2023年07月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.28023，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

2.根据权利要求1所述的利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述仙人掌有孢汉逊酵母ho-1，其碱基序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述仙人掌有孢汉逊酵母ho-1种子液的制备步骤如下：

4.根据权利要求1所述的利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述发酵的具体操作为：调节仙人掌有孢汉逊酵母ho-1种子液od600＝1，以1:5的体积比接种至80％浓度梯度的再造烟草浓缩液中，25℃、ph4条件下，发酵24h。

5.根据权利要求4所述的利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述80％浓度梯度的再造烟草浓缩液由再造烟叶浓缩液、ypd液体培养基和水按体积比8:1:1混合后制得。

6.根据权利要求5所述的利用有孢汉逊酵母ho-1发酵制备的再造烟叶，其特征在于，所述ypd液体培养基的成分为：10g/l酵母提取物，20g/l蛋白胨，20g/l葡萄糖，溶剂为水。

技术总结本发明公开了一种利用有孢汉逊酵母HO‑1发酵制备的再造烟叶，具体为采用仙人掌有孢汉逊酵母HO‑1制备的种子液发酵再造烟草浓缩液制得，属于烟草制备技术领域。有孢汉逊酵母为仙人掌有孢汉逊酵母HO‑1，碱基序列如SEQ ID NO.1所示，已于2023年07月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.28023，其分类命名为仙人掌有孢汉逊酵母Hanseniaspora opuntiae。本发明通过特定有孢汉逊酵母菌株的选择，证明其可有效增加酯类、醇类和酮类等烟草关键香味物质，达到提质增香的目的，可有效提高所制备的再造烟叶的品质。技术研发人员：郝贤伟,任志广,金慧清,项波卡,张晓兵,田雨农,戴路,毕一鸣,何文苗,徐志强,钟永健,袁凯龙,张鹏受保护的技术使用者：浙江中烟工业有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/2/8