唾液腺瘤诊断标志物DHX33蛋白及其抑制剂的应用的制作方法

本发明属于生物医药，涉及唾液腺瘤诊断标志物dhx33蛋白及其抑制剂的应用，更具体而言，涉及dhx33蛋白作为唾液腺瘤诊断标志物和作为唾液腺瘤治疗新型靶点的应用，检测dhx33蛋白含量或活性的系统或检测dhx33基因含量或其蛋白表达量的系统在制备筛查或辅助诊断唾液腺癌产品中的应用，以及dhx33抑制剂在制备用于治疗或者辅助治疗唾液腺瘤的药物中的应用。

背景技术：

1、人类口腔内有大、小两种唾液腺。唾液腺瘤可能始于任何唾液腺。大多数唾液腺瘤为良性，但也可能发展为恶性。唾液腺癌可以在任何年龄发生，多见于40岁以上的人群。男性发生率高于女性3倍，临床上经常出现颈部淋巴结及远端转移，再发性极高、生存率低。

2、大约85％唾液腺瘤发生于腮腺，少数发生于下颌下腺和小涎腺，大约1％位于舌下腺。其中75％～80％呈良性，生长缓慢、可活动、无痛，通常为单个结节位于皮肤或黏膜下。肿块质地常比较坚硬，但发生囊性变时质地柔软。通常，经过外科手术摘除和放疗，大部分唾液腺瘤患者能够治愈，但是唾液腺瘤在发生发展的过程中可能会出现“去分化”，即恶性程度会越来越高，一旦出现“去分化”，唾液腺瘤就非常容易出现复发和转移，可通过血液或淋巴液传播到其他部位，例如淋巴结、肺部、骨骼和肝脏等。良性肿瘤通常在15至20年后才会发生恶变，肿瘤中的癌细胞成分发生转移，成为一种高度侵袭性的多形性腺瘤，此时治愈率非常低。许多良性和恶性唾液腺瘤表现为无痛性肿块，但恶性肿瘤可能侵犯神经，引起局部或区域性疼痛、麻木、感觉异常、灼痛感或运动功能丧失。

3、目前，体格检查和影像学检查是唾液腺瘤的主要诊断方法。由医生仔细检查颈部和面部是否有肿块、淋巴结是否肿大等症状，或通过ct或扫描mri帮助确定唾液腺瘤的尺寸和位置。然而活检仍是唾液腺癌的最终诊断方式，通过细针穿刺或切片活检以确定细胞类型是否恶性以及肿瘤程度。因此，开发和探索临床唾液腺瘤早期诊断的肿瘤标志物，能大大提高唾液腺瘤治疗效果，对于唾液腺瘤的诊治具有重要意义。

4、目前，对于唾液腺瘤缺乏有效的化疗方案。在前列腺癌中广泛应用的抗雄激素治疗，以及针对her2阳性乳腺癌的抗her2治疗，虽然已经积累了很多的临床证据，在唾液腺瘤中取得了成功，但目前尚未获得药监部门批准。因此，针对针对目前唾液腺瘤治疗药物的局限性，需要开发新型的治疗药物和手段，进行相应的内分泌干预或靶向治疗。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供rna解旋酶dhx33蛋白及其抑制剂的新用途。具体而言，本发明提供了dhx33蛋白在诊断或者辅助诊断唾液腺瘤中的应用，该应用操作简便、灵敏度高、结果准确可靠，同时提供了dhx33蛋白可作为唾液腺瘤的治疗靶点的应用，用于治疗唾液腺瘤的dhx33抑制剂及其在制备用于治疗或者辅助治疗唾液腺瘤的药物中的应用。

2、本发明采用免疫组织化学技术，利用抗原抗体结合的高度特异性检测在唾液腺瘤组织、邻近正常组织及正常组织内rna解旋酶dhx33蛋白的表达量是否存在显著性差异，从而发现在唾液腺瘤组织样本中，dhx33蛋白明显存在过量表达的现象。相比之下，唾液腺瘤癌旁良性组织样本和正常唾液腺对照组组织样本中dhx33蛋白的表达水平较低，提示dhx33蛋白可以作为唾液腺瘤诊断的标志物。因此，在第一方面，本发明提供了rna解旋酶dhx33蛋白作为唾液腺瘤病理组织诊断及检测的新型标志物的应用，和rna解旋酶dhx33蛋白在筛查或者辅助诊断唾液腺瘤中的应用。

3、第二方面，本发明提供了用于治疗或辅助治疗唾液腺瘤的rna解旋酶dhx33抑制剂。在本发明中，rna解旋酶dhx33抑制剂(即dhx33蛋白抑制剂)为式ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐或者前药中的至少一种：

4、

5、本发明首次公开了rna解旋酶dhx33蛋白可以作为唾液腺瘤治疗的新靶点，因此，本发明还提供了dhx33蛋白作为新型唾液腺瘤治疗靶点的应用。

6、第三方面，本发明提供了治疗或者辅助治疗唾液腺瘤的靶向药物，其靶点是rna解旋酶dhx33，该靶向药物可以抑制dhx33解旋酶的活力，进而影响唾液腺瘤癌细胞生长。该靶向药物的有效成分为上式ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐或前药中的至少一种。

7、dhx33基因在ncbi上的参考序列编号为：nm_020162.4。

8、在第四方面，本发明提供了上式ⅰ所示rna解旋酶dhx33抑制剂在治疗或者辅助治疗唾液腺瘤中的应用。

9、在第五方面，本发明提供了上式ⅰ所示rna解旋酶dhx33抑制剂在制备用于治疗或者辅助治疗唾液腺瘤的药物或药物组合物中的应用。

10、在本发明的实施方案中，rna解旋酶dhx33抑制剂的摄入频率或剂量可以由医师根据个体的身体状况、年龄、性别、体重等因素来确定。在具体实施方案中，摄入频率范围可以是一天一次到三次。在本发明的实施方案中，rna解旋酶dhx33抑制剂的摄入剂量需要保证药物的有效暴露量达到每天4000-7500ng·h/ml。在具体实施方案中，在小鼠中，rna解旋酶dhx33抑制剂的口服剂量可以为25mg-300mg/kg一次，静脉注射剂量可以为每次2.5mg-25mg/kg。在具体实施方案中，在小鼠中，rna解旋酶dhx33抑制剂的口服摄入剂量可以为每次例如35mg-290m/kg，45mg-280mg/kg，55mg-270mg/kg，65mg-260mg/kg，75mg-250mg/kg，85mg-240mg/kg，95mg-230mg/kg，105mg-220mg/kg，115mg-210mg/kg，125mg-200mg/kg，135mg-190mg/kg，145mg-180mg/kg，或155mg-170mg/kg。当通过静脉注射施用时，在小鼠中，rna解旋酶dhx33抑制剂注射一次的剂量可以为例如3.0mg-24.5mg/kg、3.5mg-24mg/kg、4.0mg-23.5mg/kg、4.5mg-23mg/kg、5.0mg-22.5mg/kg、5.5mg-22mg/kg、6.0mg-21.5mg/kg、6.5mg-21mg/kg、7.0mg-20.5mg/kg、7.5mg-20mg/kg、8.0mg-19.5mg/kg、8.5mg-19mg/kg、9.0mg-18.5mg/kg、9.5mg-18mg/kg、10.0mg-17.5mg/kg、10.5mg-17.0mg/kg、11.0mg-16.5mg/kg、11.5mg-16mg/kg、12.0mg-15.5mg/kg、12.5mg-15.0mg/kg或13.0mg-14.5mg/kg。

11、第六方面，本发明涉及检测rna解旋酶dhx33蛋白含量或活性的系统或检测dhx33含量或其蛋白表达量的系统在制备筛查或辅助诊断唾液腺瘤产品中的应用。

12、在具体实施方案中，检测dhx33蛋白含量或活性的系统包括检测dhx33蛋白含量或活性所需的试剂和/或仪器；

13、所述检测dhx33蛋白基因含量或表达量的系统包括检测dhx33基因含量或其蛋白表达量所需的试剂和/或仪器。

14、在具体实施方案中，检测dhx33蛋白含量或活性所需的试剂为特异性识别dhx33蛋白的蛋白或多肽或其修饰物。

15、在具体实施方案中，检测dhx33蛋白含量或活性所需的试剂为特异性识别dhx33蛋白的抗体或抗体片段或其修饰物。

16、在具体实施方案中，检测dhx33基因含量或其蛋白表达量所需的试剂包含扩增dhx33基因或其片段的引物。

17、在具体实施方案中，检测所采用的样本为来自受试者的组织，包括但不限于疑似唾液腺瘤患者的原发病理组织或者其转移性肿瘤组织，例如石蜡包埋病理组织、冰冻组织或者组织活检物等。

18、在具体实施方案中，所述产品包括系统，所述系统包括试剂和/或仪器，所述试剂包括切片、制剂或试剂盒。

19、在具体实施方案中，所述试剂盒为elisa试剂盒或免疫组化试剂盒等。

20、第七方面，本发明提供了筛查或辅助诊断唾液腺瘤的产品，包含前文所述的检测rna解旋酶dhx33蛋白含量或活性的系统或检测dhx33基因含量或其蛋白表达量的系统。

21、其中，所述检测所采用的样本为来自受试者的组织，包括但不限于疑似唾液腺瘤患者的组织，例如患者的原发病理组织或者其转移性肿瘤组织，更具体如石蜡包埋病理组织、冰冻组织或者组织活检物等。

22、以rna解旋酶dhx33蛋白作为标志物的系统在制备筛查或辅助诊断唾液腺瘤产品中的应用也属于本发明的保护范围。

23、第八方面，本发明还提供了一种筛查或辅助诊断唾液腺瘤的方法，包括：通过检测待测样本中rna解旋酶dhx33蛋白的含量或表达量，根据所述含量或表达量进行诊断或辅助诊断。

24、其中，待测样本为来自受试者的组织，包括但不限于疑似唾液腺瘤患者的组织，例如患者的原发病理组织或者其转移性肿瘤组织，更具体如石蜡包埋组织、冰冻组织或者组织活检物等。

25、第九方面，本发明提供了rna解旋酶dhx33蛋白在制备筛查或辅助诊断唾液腺瘤的产品中的应用。

26、第十方面，本发明提供了rna解旋酶dhx33蛋白的抗体在制备筛查或辅助诊断唾液腺瘤的产品中的应用。

27、需要指出，文中的“dhx33”和“dhx33蛋白”可以互换使用。

28、本发明与现有技术相比具有明显的有益效果。借由上述技术方案，本发明至少具有下列有益技术效果：

29、本发明证明了rna解旋酶dhx33蛋白在唾液腺瘤中高度表达，可以作为唾液腺瘤的诊断标志物，为开发诊断或者辅助诊断唾液腺瘤的标志物产品提供新的手段。提供的dhx33抑制剂具有抑制dhx33解旋酶活力的作用，可以显著地抑制唾液腺瘤细胞的生长，从而达到治疗唾液腺瘤的目的，具有重要的医药开发价值。