抑制EP300基因表达的siRNA及应用的制作方法

本申请属于基因工程，具体涉及一种抑制ep300基因表达的sirna及应用。

背景技术：

1、近年来，越来越多的证据表明表观遗传失调与许多疾病的发展密切相关，表观遗传改变可能与肿瘤微环境相互作用以促进肿瘤进展。表观遗传学包括dna甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑和microrna的调控。组蛋白乙酰化修饰是目前研究最为广泛和深入的表观遗传修饰之一，在染色质的调控以及基因转录调控中发挥着重要的功能。组蛋白乙酰化水平主要由组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,hdacs)和组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferases,hats)调节，在基因调控中发挥关键作用。组蛋白乙酰基转移酶(hats)使得组蛋白乙酰化水平增加进而使得染色质松弛，更易于转录因子结合，使得基因转录成为可能，已被鉴定的人的组蛋白乙酰化酶主要包括ep300、pcaf、cbp和myst家族。

2、腺病毒e1a结合蛋白p300(e1abinding proteinp300，ep300)是具有多个结构域的大分子蛋白质，在生物进化中高度保守。ep300作为特殊的转录辅因子，本身具有组蛋白乙酰转移酶活性，能通过多种机制参与许多基因的转录调控过程。有研究表明，ep300的过表达与癌细胞向血管转移和不良预后有关，提示ep300可能在肿瘤的发展进程中起促进作用。由此可见在以肿瘤的免疫治疗中，ep300是一个潜在的靶标，但是目前对于ep300对肿瘤的影响并没有确切的定论，主要受到其肿瘤类型以及来源的影响，ep300是否会对肿瘤的成瘤能力，免疫原性是否会有影响目前并不明确。

3、研究表明ep300的小分子抑制剂c646以及a485等可有效的抑制肿瘤的生长和增殖，如前列腺癌、白血病等等。但是这些抑制剂并不是特异性的抑制ep300的蛋白功能，他们只是特异性的靶向hat结构域的活性进行抑制，然而，含有hat活性的蛋白却不只有ep300，还包含cbp，cgn5等等，因此在使用这类抑制剂时存在一些非靶向的结果，干扰该家族其他分子的活性。另外，ep300是一个多功能多结构域的大分子蛋白，其分子功能较为复杂。因此抑制ep300的hat结构域活性后ep300的其他功能域可能仍保留活性，这并不能有效的靶向抑制ep300的功能。此外，由于这类小分子药物的递送效率以及体内毒性尚未被完全的研究，因此具有很大的风险。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种抑制ep300基因表达的sirna及应用，以解决现有技术中ep300的小分子抑制剂c646以及a485等并不是特异性的抑制ep300的蛋白功能，在使用这类抑制剂时存在一些非靶向的结果，干扰该家族其他分子的活性，且抑制ep300的hat结构域活性后ep300的其他功能域可能仍保留活性，这并不能有效的靶向抑制ep300的功能，且小分子药物的递送效率以及体内毒性尚未被完全的研究，因此具有很大的风险。

2、为了实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：

3、提供一种抑制ep300基因表达的sirna，所述sirna靶向ep300基因的mrna，所述sirna的靶序列选自序列表或表1中的：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3。

4、在一个或多个实施方式中，所述sirna的靶序列如seq id no:1所示。

5、在一个或多个实施方式中，所述sirna选自由以下正义链和反义链配对组成的任一寡核苷酸双链体：(1)所述正义链如seq id no:4所示，和所述反义链如seq id no:5所示；(2)所述正义链如seq id no:6所示，和所述反义链如seq id no:7所示；(3)所述正义链如seq id no:8所示，和所述反义链如seq id no:9所示。

6、在一个或多个实施方式中，所述正义链如seq id no:4所示，所述反义链如seq idno:5所示。

7、在一个或多个实施方式中，所述sirna的所述正义链和/或所述反义链还经过化学修饰，所述化学修饰具体为2’ome修饰以将核苷酸的2'-羟基替换为甲氧基，以及5’chol修饰以在5’端连接胆固醇。

8、为了实现上述目的，本申请采用的另一个技术方案是：

9、提供一种如上述实施方式任一所述的sirna在制备用于治疗或预防ep300基因相关恶性肿瘤的药物中的应用。

10、在一个或多个实施方式中，所述sirna抑制肿瘤细胞的ep300基因表达以激活宿主的抗肿瘤免疫反应。

11、为了实现上述目的，本申请采用的又一个技术方案是：

12、提供一种药物组合物，含有上述实施方式任一所述的sirna；以及药学上可接受的载体。

13、在一个或多个实施方式中，所述药物组合物的剂型为注射剂。

14、在一个或多个实施方式中，所述药物组合物的施用方法为瘤内注射。

15、区别于现有技术，本申请的有益效果是：

16、本申请的sirna能够靶向ep300，有效特异性沉默ep300的表达，进而激活了宿主的抗肿瘤免疫反应以抑制肿瘤的生长，避免了传统ep300的小分子抑制剂存在的由于非特异性存在一些非靶向干扰，难以有效靶向抑制ep300的功能，递送效率及体内毒性尚未被完全研究，存在风险的问题；

17、本申请的sirna通过化学修饰可得到可在体内环境使用的in vivo sirna，更大程度的拓展了sirna技术的应用，实现在肿瘤中靶向沉默ep300的表达改善肿瘤免疫抑制性的肿瘤微环境，抑制肿瘤的生长；

18、本申请为肿瘤的免疫治疗提供了新的靶点和新的研究方向。

技术特征：

1.一种抑制ep300基因表达的sirna，其特征在于，所述sirna靶向ep300基因的mrna，所述sirna的靶序列选自序列表中的：seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3。

2.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，所述sirna的靶序列如seq id no:1所示。

3.根据权利要求1所述的sirna，其特征在于，所述sirna选自由以下正义链和反义链配对组成的任一寡核苷酸双链体：(1)所述正义链如seq id no:4所示，和所述反义链如seqid no:5所示；(2)所述正义链如seq id no:6所示，和所述反义链如seq id no:7所示；(3)所述正义链如seq id no:8所示，和所述反义链如seq id no:9所示。

4.根据权利要求3所述的sirna，其特征在于，所述正义链如seq id no:4所示，所述反义链如seq id no:5所示。

5.根据权利要求3或4所述的sirna，其特征在于，所述sirna的所述正义链和/或所述反义链还经过化学修饰，所述化学修饰具体为2’ome修饰以将核苷酸的2'-羟基替换为甲氧基，以及5’chol修饰以在5’端连接胆固醇。

6.一种如权利要求1至5任一所述的sirna在制备用于治疗或预防ep300基因相关恶性肿瘤的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述sirna抑制肿瘤细胞的ep300基因表达以激活宿主的抗肿瘤免疫反应。

8.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1至5任一所述的sirna；以及药学上可接受的载体。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为注射剂。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的施用方法为瘤内注射。

技术总结本申请公开了一种抑制EP300基因表达的siRNA及应用，siRNA靶向EP300基因的mRNA，siRNA的靶序列选自序列表中的SEQ ID NO:1～3，该siRNA抑制肿瘤细胞的EP300基因表达以激活宿主的抗肿瘤免疫反应。本申请的siRNA能够靶向EP300，有效特异性沉默EP300的表达，进而激活了宿主的抗肿瘤免疫反应以抑制肿瘤的生长，避免了传统EP300的小分子抑制剂存在的由于非特异性存在一些非靶向干扰，难以有效靶向抑制EP300的功能，递送效率及体内毒性尚未被完全研究，存在风险的问题。技术研发人员：杨衡,曾艳琼受保护的技术使用者：苏州系统医学研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18