一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的SSR核心引物组合、试剂盒和应用

本发明涉及到品种资源的鉴定和种质创新，具体地，涉及一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合、试剂盒和应用。

背景技术：

1、“英红九号”属于无性系大叶红茶品种，树姿直立，顶端优势强，产量高，其制成的红茶品质优异，色泽乌黑红润，汤色红艳。由于茶树生长周期长，仅依据形态特征及经验判断、鉴别茶树品种真实性，容易受发育阶段、栽培措施和环境条件的影响，存在极大的不确定性。因此，为了更好地进行“英红九号”的品种管理，建立一套快速、有效的茶树品种资源鉴定方法显得尤为重要。

2、分子标记技术因其具有多态性高、测试周期短、不受环境影响等特性，成为品种鉴定和保护的未来发展方向。其中简单重复序列（simple sequence repeat，ssr）具有共显性、重复性好、易检测、操作简单等优点，因此，ssr分子标记在品种特异性评价与保护中具有良好的应用前景。

技术实现思路

1、为克服现有技术中存在的上述缺陷与不足，本发明提供了一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合、试剂盒和应用。

2、本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合。

3、本发明的第二个目的是提供上述的ssr核心引物组合在制备茶树品种“英红九号”的鉴定产品中的应用。

4、本发明的第三个目的是提供包含上述的ssr核心引物组合的产品在鉴定茶树品种“英红九号”中的应用。

5、本发明的第四个目的是提供一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的试剂盒。

6、本发明的第五个目的是提供一种鉴定茶树品种“英红九号”的方法。

7、因此，本发明要求保护以下内容：

8、一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合，所述ssr核心引物组合包含核苷酸序列如seq id no：1～6所示的ssr核心引物。

9、优选地，所述核苷酸序列如seq id no：1所示的ssr核心引物的5'端、核苷酸序列如seq id no：3所示的ssr核心引物的5'端和/或核苷酸序列如seq id no：5所示的ssr核心引物的5'端标记荧光报告基团。

10、作为一种可实施的方式，所述荧光报告基团为fam、hex、tamra或rox。

11、任一上述的ssr核心引物组合在制备茶树品种“英红九号”的鉴定产品中的应用。

12、包含任一上述的ssr核心引物组合的产品在鉴定茶树品种“英红九号”中的应用。

13、一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的试剂盒，包含任一上述的ssr核心引物组合。

14、优选地，所述试剂盒中还包含hstaq dna聚合酶、dntps、10×buffer、阳性对照参考品、阴性对照参考品、超纯水。

15、一种鉴定茶树品种“英红九号”的方法，利用任一上述的ssr核心引物组合或试剂盒进行鉴定。

16、优选地，所述方法包括以下步骤：

17、s1. 提取待测茶树样品的基因组dna；

18、s2. 以步骤s1提取的基因组dna为模板，利用任一上述的ssr核心引物组合进行pcr扩增；

19、s3. 对步骤s2得到的pcr扩增产物进行分型，对分型结果进行条带判别：

20、核苷酸序列如seq id no：1～2所示的ssr核心引物仅扩增出一条166 bp的特征条带，核苷酸序列如seq id no：3～4所示的ssr核心引物仅扩增出一条173 bp的特征条带，核苷酸序列如seq id no：5～6所示的ssr核心引物仅扩增出一条162 bp的特征条带，则表明待测茶树样品为“英红九号”；

21、出现其它条带则表明待测茶树样品不是“英红九号”。

22、作为一种可实施的方式，步骤s3所述分型的方法为将pcr扩增产物进行毛细管电泳。

23、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

24、本发明公开了一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合、试剂盒和应用。本发明利用ssr荧光标记检测技术，筛选得到3对ssr核心引物，这3对ssr核心引物可以将“英红九号”从其他茶树品种中快速鉴定和检测出来。本发明所公开的ssr核心引物组合能够对“英红九号”进行品种鉴定，克服了基于外部形态特征鉴定的不确定性，操作简便，检测效率高，结果可靠直观，同时也有利于“英红九号”这一品种的推广利用和保护。

技术特征：

1. 一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的ssr核心引物组合，其特征在于，所述ssr核心引物组合包含核苷酸序列如seq id no：1～6所示的ssr核心引物。

2. 根据权利要求1所述的ssr核心引物组合，其特征在于，所述核苷酸序列如seq idno：1所示的ssr核心引物的5'端、核苷酸序列如seq id no：3所示的ssr核心引物的5'端和/或核苷酸序列如seq id no：5所示的ssr核心引物的5'端标记荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的ssr核心引物组合，其特征在于，所述荧光报告基团为fam、hex、tamra或rox。

4.权利要求1～3任一所述的ssr核心引物组合在制备茶树品种“英红九号”的鉴定产品中的应用。

5.包含权利要求1～3任一所述的ssr核心引物组合的产品在鉴定茶树品种“英红九号”中的应用。

6.一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～3任一所述的ssr核心引物组合。

7. 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含hstaq dna聚合酶、dntps、10×buffer、阳性对照参考品、阴性对照参考品、超纯水。

8.一种鉴定茶树品种“英红九号”的方法，其特征在于，利用权利要求1～3任一所述的ssr核心引物组合或权利要求6～7任一所述的试剂盒进行鉴定。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤s3所述分型的方法为将pcr扩增产物进行毛细管电泳。

技术总结本发明公开了一种用于鉴定茶树品种“英红九号”的SSR核心引物组合、试剂盒和应用。本发明利用SSR荧光标记检测技术，筛选得到3对SSR核心引物，这3对SSR核心引物可以将“英红九号”从其他茶树品种中快速鉴定和检测出来。本发明所公开的SSR核心引物组合能够对“英红九号”进行品种鉴定，克服了基于外部形态特征鉴定的不确定性，操作简便，检测效率高，结果可靠直观，同时也有利于“英红九号”这一品种的推广利用和保护。技术研发人员：李红建,吴华玲,方开星,李波,王青,秦丹丹,姜晓辉,倪尔冬,王秋霜,潘晨东受保护的技术使用者：广东省农业科学院茶叶研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18