一种人源壳多糖酶3样蛋白1单克隆抗体及其制备方法和应用

本发明属于基因工程，具体涉及一种人源壳多糖酶3样蛋白1单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08及其制备方法和应用。

背景技术：

1、人源壳多糖酶3样蛋白1(chitin-3-like-1，hchi3l1)是几丁质酶样蛋白之一，在人体中也被命名为ykl-40(人软骨素-40)，是18-糖基水解酶家族中的一员，由383个氨基酸组成。hchi3l1分子量大小在40kda，但由于其两个关键活性残基的突变而失去了水解酶活性，但仍可以以高亲和力与几丁质结合。hchi3l1由包括巨噬细胞、中性粒细胞、肿瘤细胞、血管平滑肌细胞等在内的多种细胞分泌表达且与细胞再生、增殖、迁移、组织重塑以及血管生成密切相关。其mrna与蛋白水平在例如：炎症性疾病、癌症、退行性疾病等疾病中的水平均显著升高且hchi3l1含量与患者存活周期以及不良预后相关。近年来，随着研究的进一步深入，hchi3l1被越来越多的研究者认为且作为一种使用广泛的生物标记物、药物靶标使用。

2、在众多hchi3l1参与的疾病中，有研究者发现肝脏类疾病是与hchi3l1关系最密切的一类疾病，在肝纤维化诊断过程中以hchi3l1含量为指标具有更高的准确性，且在肝纤维化诊断中，hchi3l1的中位数约在40ng/ml，男女之间无显著差异，一般认为浓度>70ng/ml即可诊断为肝纤维化。hchi3l1含量对肝脏类疾病以及其他疾病的的诊断作用以及治疗靶标作用被越来越多的研究者注意到，且随着近年来体外诊断(ivd)技术的兴起，hchi3l1成为了一个热门的ivd检测指标。ivd技术通常需要基于检测指标的抗体的参与，而一般特异性单克隆抗体的获得需要杂交瘤细胞技术的参与，传统的杂交瘤细胞虽然可以获得特异性的单克隆抗体，但随着传代次数的增加以及时间的延长，往往会产生杂交瘤细胞的抗体产量降低、状态变差、难以复苏以及发生突变等情况影响ivd检测的稳定性。

3、此外，ivd技术通常需要识别同一蛋白不同表位的两个单克隆抗体的参与或者不同种属来源的针对同一蛋白的两个抗体，这在一定程度上加大了抗体筛选的难度，也提高了对单克隆抗体的要求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种人源壳多糖酶3样蛋白1单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08及其制备方法和应用。本发明所提供的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08与hchi3l1具有强结合力，通过测序获得抗体序列，以此构建的重组表达载体和重组细胞易于改造与保存，有效的预防了后续杂交瘤细胞所面临的退化、突变等问题。

2、本发明的目的是通过如下技术方案来实现的：

3、一种可以特异性识别人源壳多糖酶3样蛋白1的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08，所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括3个重链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.1～3所示；所述轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.4～6所示；

4、进一步的，上述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08的重链可变区的氨基酸序列如seqid no.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。

5、一种核酸分子，所述核酸分子编码上述的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08。

6、进一步的，上述核酸分子包括编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08重链可变区的核苷酸序列和/或编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08轻链可变区的核苷酸序列；所述编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08重链可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

7、一种重组表达载体，所述重组表达载体包括上述的核酸分子。

8、进一步的，上述重组表达载体的出发载体为phl-sec。

9、一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如上述的重组表达载体；所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

10、上述的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08、核酸分子、重组表达载体、宿主细胞在制备检测壳多糖酶3样蛋白1的试剂和/或靶向hchi3l1治疗的药物中的应用。

11、本发明提供了一种一种可以特异性识别人源壳多糖酶3样蛋白1的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08。本发明所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08效价好，基于本发明重链和轻链的可变区的互补决定区序列，构架重组表达载体，转染细胞，能够实现本发明所述单克隆抗体的表达。进一步，本发明所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08重组表达载体易于保存，易于抗体生产过程质量控制；也方便对抗体做一系列的改造，更深入的研究，更广泛的应用。进一步经biacore验证，本发明所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08可以识别hchi3l1蛋白，具有生物学活性且所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08与hchi3l1具有高特异性、强结合力，可以用于hchi3l1的ivd体外检测和靶向hchi3l1治疗等其它科学研究，具有良好的的临床使用价值和诊断作用。

技术特征：

1.一种可以特异性识别人源壳多糖酶3样蛋白1的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08，其特征在于：所述单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括3个重链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.1~3所示；所述轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如seq id no.4~6所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。

3.一种核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码如权利要求2所述的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08。

4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包括编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08重链可变区的核苷酸序列和/或编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08轻链可变区的核苷酸序列；所述编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08重链可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述编码单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包括如权利要求4所述的核酸分子。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体的出发载体为phl-sec。

7.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞包含如权利要求5所述的重组表达载体；所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

8.如权利要求1所述的单克隆抗体anti-hchi3l1-mm08、如权利要求3所述的核酸分子、如权利要求5所述的重组表达载体、如权利要求7所述的宿主细胞在制备检测壳多糖酶3样蛋白1的试剂和/或靶向hchi3l1治疗的药物中的应用。

技术总结本发明涉及一种人源壳多糖酶3样蛋白1单克隆抗体Anti‑hCHI3L1‑MM08及其制备方法和应用。所述单克隆抗体Anti‑hCHI3L1‑MM08包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括3个重链互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.1~3所示；所述轻链可变区包括3个轻链互补决定区，氨基酸序列如SEQ ID NO.4~6所示。本发明单克隆抗体Anti‑hCHI3L1‑MM08对人源壳多糖酶3样蛋白1具有高度特异性和强结合力。技术研发人员：江龙光,赵海龙,黄明东,袁彩,陈佳宇受保护的技术使用者：福州大学技术研发日：技术公布日：2024/8/1