一种Cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及应用

本发明属于小鼠模型，具体涉及一种cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及应用。

背景技术：

1、系统性红斑狼疮(sle)作为自身免疫疾病的原型，可累及全身多个器官及系统。sle具有一定异质性，轻型患者可表现为关节痛，重型患者可出现心、脑、肾等靶器官损害，严重时甚至可以危及生命。已有报道，sle的发病率在每10万人中有40-50人。并且，90％的sle患者是育龄期女性，不仅影响个人的健康，对于家庭和社会造成很大的负担。

2、目前已有用于研究sle发病机制和新的治疗方法的两种小鼠模型，包括新西兰黑×白f1小鼠(nzb/w)、murphy roths large/lpr小鼠(mrl/lpr)和bxsb/yaa小鼠。

3、nzb/nzw f1鼠是nzb老鼠和nzw老鼠交配后的第一代老鼠，自发出现狼疮表型，其亲代任一方均不发生病变。由helyer在1963年发现。该模型小鼠4-5月开始发病，5-6月出现明显的肾小球肾炎的症状，10-12月进展为严重的狼疮，因肾衰竭而死。此类小鼠发病症状与人类相似，性激素对该鼠有明显的影响，雌鼠比雄鼠起病早且严重。特征是高滴度anti-dsdna，anti-ssdna抗体，高丙种球蛋白血症。

4、mrl/lpr鼠模拟的是t细胞凋亡缺陷导致的功能异常，以淋巴、脾脏肿大为特点，这两种器官含有大量淋巴细胞，因此，该模型主要模拟了适应性免疫系统异常。而先天免疫系统正常，例如：ifn-alpha不升高。尽管mrl/lpr鼠表现出anti-dsdna抗体升高，蛋白尿，和低补体血症，但并不完全符合人类疾病的特点。例如狼疮主要以育龄期女性发病，男女比例为1:9，而mrl/lpr模型没有表现出性别差异。nzb/nzw f1小鼠，表现狼疮表型的原因不明，且发病周期长(6个月)，易受环境因素影响，且实验过程不易控制，为研究疾病的发病机制带来困难。

技术实现思路

1、本发明提供了一种cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，构建所得红斑狼疮小鼠有助于红斑狼疮得到机理研究，以及有助于制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物。

2、本发明第一发明提供了一种cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，通过巨噬细胞条件性敲除cpt1a基因的方式构建红斑狼疮小鼠模型。

3、在本发明的一实施方式中，通过巨噬细胞条件性敲除cpt1a基因的方式构建红斑狼疮小鼠模型，包括以下步骤：

4、s1、设计针对cpt1a基因的grna，所述grna包括grna-a1和grna-a2，所述grna-a1的序列如seq id no:1所示，所述grna-a2的序列如seq id no:2所示；

5、s2、将cas9蛋白、grna和cpt1a共注射至小鼠受精卵细胞核中，并将受精卵移植入受体母鼠孕育，获得f0代小鼠；

6、s3、将f0代小鼠与正常野生型小鼠杂交，获得f1代小鼠；

7、s4、将f1代小鼠与lyz2-cre工具小鼠交配，获得巨噬细胞条件性敲除cpt1a基因成功的红斑狼疮小鼠模型。

8、本发明第二发明提供了一种红斑狼疮小鼠模型，由上述任一项所述的构建方法构建得到。

9、本发明第二发明提供了通过上述cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法得到的红斑狼疮小鼠模型在红斑狼疮的机理研究方面的应用。

10、本发明第二发明提供了通过上述cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法得到的红斑狼疮小鼠模型在制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物中的应用。

11、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明实施例提供的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，构建所得红斑狼疮小鼠有助于红斑狼疮得到机理研究，以及有助于制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物。

12、本发明实施例提供的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，实现了在骨髓细胞谱系中敲除cpt1a基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常，获得的红斑狼疮小鼠模型，表现狼疮表型的原因明确，不易受环境因素影响，实验过程可控，是一种简便、高效、快捷构建方法，能够更好的应用于红斑狼疮的机理研究、及制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物。

13、本发明实施例提供的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法中，构建所得红斑狼疮小鼠模型，构造方法简单，且自然发病。该小鼠表现为抗核抗体升高，抗dsdna升高，尿蛋白升高，出现狼疮肾炎的表现，丰富了狼疮模型的选择。

14、说明书附图

15、图1为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠的抗核抗体浓度比较图；

16、图2为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠的抗dsdna抗体浓度比较图；

17、图3为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠的尿白蛋白比肌酐比较图；

18、图4为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠腹腔来源的巨噬细胞吞噬功能比较图；

19、图5为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠肾脏免疫组化比较图；

20、图6为cpt1a-cko小鼠和对照小鼠肾脏免疫荧光比较图。

技术特征：

1.一种cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，通过巨噬细胞条件性敲除cpt1a基因的方式构建红斑狼疮小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，通过巨噬细胞条件性敲除cpt1a基因的方式构建红斑狼疮小鼠模型，包括以下步骤：

3.一种红斑狼疮小鼠模型，其特征在于，根据权利要求1-2任一项所述的构建方法构建得到。

4.权利要求1-2中任一所述的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法构建方法得到的红斑狼疮小鼠模型在红斑狼疮的机理研究方面的应用。

5.权利要求1-2中任一所述的cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法得到的红斑狼疮小鼠模型在制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物中的应用。

技术总结本发明公开了一种Cpt1a基因条件性敲除小鼠模型的构建方法及应用，所述构建方法为通过巨噬细胞条件性敲除Cpt1a基因的方式构建红斑狼疮小鼠模型。本发明提供的红斑狼疮小鼠模型的构建方法，实现了在骨髓细胞谱系中敲除Cpt1a基因，而在其它组织或细胞中该基因表达正常，是一种简便、高效、快捷构建方法，获得的红斑狼疮小鼠模型，能够更好的应用于红斑狼疮得到机理研究、及制备和/或筛选治疗红斑狼疮药物。技术研发人员：叶俊娜,周卓超,吴晶艺,杨程德受保护的技术使用者：上海交通大学医学院附属瑞金医院技术研发日：技术公布日：2024/8/1