一种水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺的制作方法

本发明涉及养殖用复合微生物培育，具体为一种水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺。

背景技术：

1、饲用微生物添加剂是九十年代开始发展起来的新型饲料添加剂，由于它在防病、提高饲料转化率、促进动物生长和生产性能等方面具有抗生素所不具备的优点，日益受到重视。饲用微生态制剂尽管在克服抗生素的副作用和促进动物生长以及生产性能等方面发挥了较好的作用，但自然菌群仍存在诸多不足之处。一是动物消化道中原生菌的优生作用使活菌剂很难在短时间内定植、完成续生或大量繁殖，从而使有益菌在动物肠道中附着、定植的数量有限。二是动物肠道中原生菌优势和肠道中的营养素限制，使单一的有益菌群的应用效果受到影响。因为活菌制剂均有其特定的微生态环境，如果无法在肠道中长久供应外源活菌制剂的营养素，它也将死亡而失效。三是微生物的生存环境渗透压一般都是生理盐水的浓度9‰，但在海水养殖如南美白对虾的水体环境中，为了抑制弧菌盐浓度为30－40‰，且有些虾农培养高蛋白卤虫代替前期饵料，故盐浓度达到50‰以上，甚至有盐田养虾水体盐浓度高达70‰，高盐环境势必影响微生态制剂的应用效果。四是活菌制剂必须耐受饲料制粒过程中的高温以及胃肠道中酸碱环境，加之像南美白对虾等海水养殖动物的水体环境盐度高，有益菌制剂还要耐受高盐度的环境，然而实验表明在65℃以上、30‰盐度时，活性有益菌将被大量杀灭，同时酸、碱、氧等不良环境也将造成有益菌的失活。以上不足之处，直接影响着微生物制剂在动物养殖上的作用发挥，使其作用效果不够充分和稳定，为此本技术提出一种水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺来解决上述问题。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本技术设计一种耐盐耐高温水产养殖用复合微生态制剂及其制备方法，通过对原有水产养殖用产品组方的调整、重组以及寡聚糖等益生元的合理添加，以达到产品耐盐耐高温的集成和三效合一效果，使各菌种协同作用，使双歧因子等有益菌的作用充分体现，优化了养殖生态环境，是一种无污染、无公害的高效绿色环保型水产养殖用复合微生态添加剂。

3、(二)技术方案

4、为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂，本发明由下述重量百分比的原料组成：蜡状芽孢杆菌10％－15％，枯草芽孢杆菌10％－15％，地衣芽孢杆菌10％－15％，酿酒酵母1％－5％，热带假丝酵母1％－5％，光合细菌1％－5％，植物乳杆菌0.5％－3％，嗜酸乳杆菌0.5％－3％，双歧杆菌1％－3％，米曲霉1％－2％。

5、优选的，本发明由下述重量百分比的原料组成：蜡状芽孢杆菌10％，枯草芽孢杆菌10％，地衣芽孢杆菌10％，酿酒酵母1％，热带假丝酵母1％，光合细菌1％，植物乳杆菌0.5％，嗜酸乳杆菌0.5％，双歧杆菌1％，米曲霉1％。

6、优选的，本发明由下述重量百分比的原料组成：蜡状芽孢杆菌12.5％，枯草芽孢杆菌12.5％，地衣芽孢杆菌12.5％，酿酒酵母2.5％，热带假丝酵母2.5％，光合细菌2.5％，植物乳杆菌1.75％，嗜酸乳杆菌1.75％，双歧杆菌2％，米曲霉1.5％。

7、优选的，本发明由下述重量百分比的原料组成：蜡状芽孢杆菌15％，枯草芽孢杆菌15％，地衣芽孢杆菌15％，酿酒酵母5％，热带假丝酵母5％，光合细菌5％，植物乳杆菌3％，嗜酸乳杆菌3％，双歧杆菌3％，米曲霉2％。

8、一种水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂的制备工艺，包括以下步骤：

9、步骤一：将所述的蜡状芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，酿酒酵母，热带假丝酵母，光合细菌，植物乳杆菌嗜酸乳杆菌，双歧杆菌，米曲霉进行耐高盐驯化、耐高温驯化后保藏，并对保藏的菌种传代；

10、步骤二：对保藏的菌种进行活化、发酵后微胶囊包被，微胶囊包被和菌种干燥具体为，将发酵终止的的菌液离心后取菌泥，用生理盐水将菌泥稀释成所需浓度，做活菌计数；分别制备5％阿拉伯胶水溶液和10％明胶水溶液，45℃保温备用；将菌液与5％阿拉伯胶水溶液按体积比2:1比例混合后迅速振荡混匀，调ph值至4.6，并迅速降温至20℃制成混合液，在混合液中按体积比2:1比例加入10％明胶水溶液，继续搅拌，并迅速降温至4℃以下，调ph值至2.0后继续搅拌30min，干燥后测活菌数；

11、步骤三：将干燥后的菌种粉碎并与寡聚糖、载体按比例混合均匀，包装，入库。

12、优选的，所述步骤二的耐高温驯化具体为：

13、(1)：将所述的除芽孢菌以外的其他菌种分别置于45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃水浴中加热5＇、10＇、15＇，用平板计数法测热处理后的各类细菌活菌数，计算存活率；

14、(2)：将所述的曲霉菌稀释液分别置于55℃、60℃、65℃、70℃、75℃水浴中加热5＇、10＇、15＇，然后分别接种于适宜培养皿上，30℃培养48h，观察有无菌丝长出，并视其生长状况确定其成活率；

15、(3)：每种菌种选择耐较高温度相对较长时间的菌株为初发菌株，并对该菌株进行纯化、复壮、鉴定、扩大培养；

16、(4)：采用紫外线照射法进行诱变，将所选初发菌株暴露于紫外灯下分别照射30＇、60＇、90＇，取不同照射时间的菌株进行增殖培养、稀释分离，获得单菌落，然后挑选菌落，做菌种鉴定，对符合性状的菌株测定其耐高温活性，筛选出各类耐高温菌株，并且要验证筛选出的耐高温菌株均具有良好的可遗传能力。

17、优选的，所述步骤三的寡聚糖选取低聚异麦芽糖，所述步骤三的载体选取麦饭石粉。

18、优选的，所述蜡状芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，酿酒酵母，热带假丝酵母，光合细菌，植物乳杆菌嗜酸乳杆菌，双歧杆菌，米曲霉的培养具体为：

19、(1)：30‰的盐度,用接种环取适量菌种(没有进行耐盐驯化的普通菌种)置于生理盐水中混合均匀，取等量的混合液分别滴入30‰盐度的培养基与对照组培养基上，用涂布棒分别进行涂布，放入恒温培养箱培养，第二天观察并记录数据；

20、(2)：40‰的盐度，取30‰盐度下培养出的菌种接种于40‰盐度的培养基上，继续进行以上同等操作；

21、(3)：以此类推50‰、60‰、70‰、80‰、90‰选择不同梯度的盐度进行耐盐驯化，最后得到80‰盐度下耐受的蜡状芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，酿酒酵母，热带假丝酵母，光合细菌，植物乳杆菌嗜酸乳杆菌，双歧杆菌，米曲霉。

22、(三)有益效果

23、本发明的有益效果在于：

24、1、该水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺，本方案通过耐盐驯化筛选出适合南美北对虾等高盐度水产动物养殖的微生物菌群，提高了有益微生物菌群耐盐性，使造成微生物产品在高盐度水体环境中应用效果受到影响的主要因素得以克服；同时，经过耐高温驯化使得微生物在水产养殖用饵料的制粒过程的存活率及活性得以提高，保证了产品的应用效果，提高产品的市场竞争力。

25、2、该水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺，本方案的产品适应性强，稳定性好，所选用微生物能共生共存，对水产养殖环境中的病原菌抑制性强，并合理利用微生物间的相互协同作用，可高效拮抗水产养殖如南美白对虾的烂鳃病等弧菌病原菌，降低有机质、腐殖质净化水质，同时具有抑菌、促消化改善产品品质等作用，达到增产、高产的目的。

26、3、该水产动物养殖用耐盐耐高温复合微态制剂及其制备工艺，通过加入古菌使得该耐盐耐高温复合微态制剂适应性强，稳定性好，所选用微生物能共生共存，对水产养殖环境中的病原菌抑制性强，并合理利用微生物间的相互协同作用，可高效拮抗水产养殖如南美白对虾的烂鳃病等弧菌病原菌，降低有机质、腐殖质净化水质，同时具有抑菌、促消化改善产品品质等作用，达到增产、高产的目的。