一种白术多糖及其凝胶与应用

本发明属于生物医药领域，具体地说，公开了一种白术多糖及其凝胶与应用。

背景技术：

1、糖尿病足是糖尿病众多并发症中最常见和最具危害性的并发症之一。其主要病因是糖尿病患者周围神经及微血管常发生病变，从而导致足部溃疡创面长时间难以愈合，病情严重时将可能导致患者截肢或死亡，给患者身体及精神上带来巨大痛苦的同时，也增加了家庭及社会的经济负担。

2、中医认为，脏腑气血畅通对维持人体的正常生理功能至关重要。df患者往往伴随着气血循环障碍，导致下肢血液供应不足，更容易出现组织溃疡和坏死等症状。而伤口“腐化肌生、肌平皮长”依赖于脾系的运化功能，其将水谷精微输布四肢肌肉，肺卫抵御外邪，输精于皮毛，从而促进肉芽组织生长和上皮迁移，加速伤口愈合。因此，选用益气健脾类中药将能有效提升糖尿病足愈合状况。

3、白术在中医理论中被誉为“脾虚补气健脾第一要药”，其具有抗炎、抗肿瘤、改善胃肠道功能、增强免疫、降血脂血糖等多种功效。现代研究发现，白术主要含有挥发油、内酯类、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中，白术多糖含量较高，具有降血糖、免疫调节、神经系统保护、胃肠黏膜保护、肝脏保护以及抑菌、抗氧化、抗肿瘤等作用。

4、临床上，根据伤口的受伤程度，中药外用主要采用散剂、油剂、膏剂和纱条等传统剂型。近年来，水凝胶因其保湿、透气、防水、自黏合多规格等优点，被广泛应用于临床实践。因此，基于中药有效成分的水凝胶敷料产品在伤口愈合领域具有广泛的应用前景。

技术实现思路

1、本发明的第一个目的是提供一种白术多糖，该白术多糖对huvec无明显细胞毒性，其可恢复高糖诱导的huvec细胞损伤，促进细胞迁移及小管形成，提示白术多糖可能通过改善内皮细胞功能障碍来促进糖尿病创面愈合。

2、本发明的第一个目的是提供一种白术多糖凝胶，该白术多糖凝胶可通过促进内皮细胞增殖迁移，提高cd31表达，减少促炎因子tnf-α分泌等机制，最终达到加速糖尿病小鼠伤口创面愈合的目的。

3、为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：

4、一种白术多糖，所述的白术多糖作为制备治疗糖尿病创伤愈合药物的应用。白术多糖对huvec无明显细胞毒性，其可恢复高糖诱导的huvec细胞损伤，促进细胞迁移及小管形成，提示白术多糖可能通过改善内皮细胞功能障碍来促进糖尿病创面愈合。

5、进一步的，上述的白术多糖，所述的白术多糖是从白术中药饮片中，通过水提醇沉、除蛋白、透析及冻干后获得。

6、进一步的，上述的白术多糖，所述的白术多糖通过下述方法制备：

7、(1)白术中药饮片用粉碎机粉碎后，转移至煎煮锅中使用微波炉煎煮，煎煮功率1600w煮沸后转换为1000w继续煎煮，固液比1∶25，按2.5h/次，煎煮3次，滤液蒸发浓缩后4℃离心过滤；在滤液中加入4倍体积无水乙醇，控制乙醇终浓度为80％，搅拌1h后保鲜膜覆盖容器口并放入冰箱4℃静置过夜；将含糖沉淀部分用有机试剂洗涤后，挥发干有机试剂得到白术粗多糖白色粉末；

8、(2)向步骤(1)制备的白术粗多糖粉末加入100m1蒸馏水形成溶液后，加入木瓜蛋白酶1g，调整溶液ph值为5.5～7之间，55℃水浴反应2h；结束后煮沸10min，使蛋白酶失活；待上述溶液冷却后取上清液，按照4：1体积比加入蛋白质沉淀试剂，混匀离心后收集上层水相，再加入四分之一体积混合液重复操作，直至蛋白彻底除去，收集除去蛋白的白术多糖溶液；

9、(3)将步骤(2)制备的白术多糖溶液转移至透析袋，分别在自来水、纯水中各透析24h，每隔2-4h换水；透析结束后将袋中的amp溶液倒入洁净的玻璃平皿中，冷冻浓缩干燥后得到白术多糖。

10、进一步的，上述的白术多糖，所述的洗涤顺序为：无水乙醇、丙酮、石油醚、无水乙醇。

11、进一步的，上述的白术多糖，所述的木瓜蛋白酶添加量为1g。

12、本发明提供的第二个技术方案是一种白术多糖凝胶，包括下述重量份组分：白术多糖0.55～1.1份，卡波姆940 0.1份，羧甲基纤维素钠0.125份。

13、该白术多糖水凝胶可显著促进stz诱导的i型糖尿病小鼠创伤愈合，其主要通过调节炎症、促进血管新生及上皮化进程等生物途径发挥功效。

14、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

15、本发明提供的技术方案分离纯化了白术多糖活性成分，基于苯酚-硫酸法、咔唑-硫酸法测定了其总糖、糖醛酸含量；光谱分析多糖样本中是否含蛋白质及核酸，运用傅里叶红外光谱仪鉴别多糖特征官能团，通过hpgpc测定多糖分子量和纯度，离子色谱仪测定白术多糖的单糖组成，使用扫描电镜观察白术多糖表面形貌；基于高糖损伤细胞模型评估了白术多糖对huvec细胞活性、以及高糖损伤huvec细胞增殖、迁移和小管形成能力的影响，证实其对huvec无明显细胞毒性，可缓解高糖诱导的血管内皮细胞损伤，并能够提升血管内皮细胞增殖、迁移及微管生成，从而达到调节血糖血脂、抗炎及增强免疫活性等作用。

16、本发明提供的技术方案以卡波姆940及羧甲基纤维素钠为原料，制备了白术多糖水凝胶，通过皮肤刺激性试验、细胞相容性试验和溶血实验，确定水凝胶体外生物安全性；借助糖尿病小鼠皮肤缺损创面模型证实白术多糖水凝胶能够显著加速糖尿病创面愈合，其主要通过影响创面cd31、tnf-a表达水平达到治疗效果，证明其具有良好皮肤刺激性、细胞相容性和溶血安全性，其可以通过调节炎症微环境、促进创面血管新生及上皮化进程等途径，提升糖尿病小鼠伤口的愈合速度，作为一种理想的外敷药物具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种白术多糖，其特征在于，所述的白术多糖作为制备治疗糖尿病创伤愈合药物的应用。

2.根据权利要求1所述的白术多糖，其特征在于，所述的白术多糖是从白术中药饮片中，通过水提醇沉、除蛋白、透析及冻干后获得。

3.根据权利要求1或所述的白术多糖，其特征在于，所述的白术多糖通过下述方法制备：

4.根据权利要求1所述的白术多糖，其特征在于，所述的洗涤顺序为：无水乙醇、丙酮、石油醚、无水乙醇。

5.根据权利要求1所述的白术多糖，其特征在于，所述的木瓜蛋白酶添加量为1g。

6.一种白术多糖凝胶，其特征在于，包括下述重量分组分：权利要求1-4任一所述的白术多糖0.55～1.1份，卡波姆940 0.1份，羧甲基纤维素钠0.125份。

技术总结本发明提供了一种白术多糖及其凝胶与应用；该白术多糖对HUVECs无明显细胞毒性，且可恢复高糖诱导的HUVECs细胞损伤，并促进细胞迁移及小管形成，提示白术多糖可通过改善内皮细胞功能障碍来促进糖尿病创面愈合；由该白术多糖、卡波姆940和羧甲基纤维素钠为原料构建的凝胶可通过提高CD31表达、减少促炎因子TNF‑α分泌等机制，达到加速糖尿病小鼠伤口创面愈合的目的；作为制备治疗糖尿病创伤愈合药物的应用；属于生物医药领域。技术研发人员：李博,周倩受保护的技术使用者：广东药科大学技术研发日：技术公布日：2024/8/1