一种人源化IVC抗体及使用其制成的IVC检测试剂和试剂盒的制作方法

本发明属于分析检测，尤其涉及一种人源化ivc抗体及使用其制成的ivc检测试剂和试剂盒。

背景技术：

1、四型胶原蛋白(ivc)属于非原纤维胶原蛋白，是基底膜网状结构的主要成分之一。作为肝细胞基底膜的核心结构，其在肝纤维化形成过程中起主要作用。ivc在肝纤维化时会产生显著变化，在轻度肝损伤合并肝纤维化时，在体内胶原总量增加尚不明显的情况下，血清ivc含量即可显著增加。因此，其含量的变化能较好的反应肝纤维化、肝细胞损伤及程度，是检测肝脏组织病变如肝纤维化的重要指标之一。

2、目前市场上销售的iv型胶原蛋白测定试剂盒中抗体多为多克隆抗体和鼠单抗，因此在检测中会出现假阳性结果，导致阴性检测的误判。因此，亟需一种可以大幅度降低假阳性检出率的改进技术。

技术实现思路

1、为解决上述技术难题，本发明提供了一种人源化ivc抗体及使用其制成的ivc检测试剂和试剂盒。本发明使用嵌合igg抗体方法，进行了鼠单抗人源化改造，改造后的人源化抗体包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中鼠源重链可变区的碱基序列如seq id no.1所示，鼠源轻链可变区的碱基序列如seq id no.5所示，人源重链恒定区为ch1-ch2-ch3的重链恒定区，人源轻链恒定区为ch1的轻链恒定区。使用本发明中的人源化抗体所制成的检测试剂、试剂盒等，与常规技术相比，可显著提高检测特异性，可大幅度降低假阳性检出率。

2、为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：

3、本发明提供了一种人源化ivc抗体，包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中：所述鼠源重链可变区的碱基序列如seq id no.1所示；所述鼠源轻链可变区的碱基序列如seq id no.5所示；所述人源重链恒定区为ch1-ch2-ch3的重链恒定区；所述人源轻链恒定区为ch1的轻链恒定区。

4、进一步的，所述鼠源重链可变区含有3个互补决定区cdr1、cdr2以及cdr3，其碱基序列依次如seq id no.2、seq id no.3以及seq id no.4所示。

5、更进一步的，所述鼠源轻链可变区也含有3个互补决定区cdr1、cdr2以及cdr3，其碱基序列依次如seq id no.6、seq id no.7以及seq id no.8所示。

6、本发明还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体为含有所述人源化ivc抗体中鼠源重链可变区和人源重链恒定区的重链重组表达载体和/或含有所述人源化ivc抗体中鼠源轻链可变区和人源轻链恒定区的轻链重组表达载体。

7、本发明还提供了一种所述人源化ivc抗体的制备方法，所述制备方法中含有将所述重链重组表达载体和所述轻链重组表达载体按照1：1.5比例混合制备无菌质粒dna的过程。

8、本发明还提供了一种含有所述人源化ivc抗体的ivc检测试剂。

9、进一步的，所述ivc检测试剂包括试剂r1和试剂r2；所述试剂r1的成分和含量为：缓冲液50～350mmol/l，无机盐0.05～0.5mol/l，防腐剂0.01～5％，溶剂为纯水；所述试剂r2的成分和含量为：缓冲液50～350mmol/l，稳定剂0.5～5％，表面活性剂0.2～2％，防腐剂0.02～5％，包被有人源化ivc抗体的胶乳微球溶液0.5～2％，余量为纯水。

10、更进一步的，所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，无机盐为氯化钠，防腐剂为proclin300，稳定剂为bsa，表面活性剂为吐温20，乳胶微球为聚苯乙烯羧基颗粒，其粒径为220～260nm。

11、再进一步的，所述聚苯乙烯羧基颗粒的粒径为240nm。

12、本发明还提供了一种含有所述ivc检测试剂的ivc检测试剂盒。

13、本发明的有益效果是：

14、通过sds-page检测真核表达的ivc人源化抗体，结果发现抗体表达成功；elisa检测ivc人源化抗体，结果发现抗体为ivc抗体；通过与单克隆抗体配置的试剂盒检测阳性样本，对比发现检测结果一致，检测结果没有差异性(p>0.05)；通过表达得到的人源化抗体与常规筛选的到的ivc单克隆抗体配置的胶乳试剂检测正常体检样本，发现假阳性显著降低。

技术特征：

1.一种人源化ivc抗体，其特征在于，包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中：所述鼠源重链可变区的碱基序列如seq id no.1所示；所述鼠源轻链可变区的碱基序列如seq id no.5所示；所述人源重链恒定区为ch1-ch2-ch3的重链恒定区；所述人源轻链恒定区为ch1的轻链恒定区。

2.根据权利要求1所述的人源化ivc抗体，其特征在于，所述鼠源重链可变区含有3个互补决定区cdr1、cdr2以及cdr3，其碱基序列依次如seq id no.2、seq id no.3以及seq idno.4所示。

3.根据权利要求2所述的人源化ivc抗体，其特征在于，所述鼠源轻链可变区也含有3个互补决定区cdr1、cdr2以及cdr3，其碱基序列依次如seq id no.6、seq id no.7以及seq idno.8所示。

4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为含有权利要求1～3任一所述人源化ivc抗体中鼠源重链可变区和人源重链恒定区的重链重组表达载体和/或含有权利要求1～3任一所述人源化ivc抗体中鼠源轻链可变区和人源轻链恒定区的轻链重组表达载体。

5.权利要求1～3任一所述的人源化ivc抗体的制备方法，其特征在于，其中含有将权利要求4中所述重链重组表达载体和所述轻链重组表达载体按照1：1.5比例混合制备无菌质粒dna的过程。

6.一种ivc检测试剂，其特征在于，其中含有权利要求1～3任一所述的人源化ivc抗体。

7.根据权利要求6所述的ivc检测试剂，其特征在于，所述ivc检测试剂包括试剂r1和试剂r2；所述试剂r1的成分和含量为：缓冲液50～350mmol/l，无机盐0.05～0.5mol/l，防腐剂0.01～5％，溶剂为纯水；所述试剂r2的成分和含量为：缓冲液50～350mmol/l，稳定剂0.5～5％，表面活性剂0.2～2％，防腐剂0.02～5％，包被有人源化ivc抗体的胶乳微球溶液0.5～2％，余量为纯水。

8.根据权利要求7所述的ivc检测试剂，其特征在于，所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，无机盐为氯化钠，防腐剂为proclin300，稳定剂为bsa，表面活性剂为吐温20，乳胶微球为聚苯乙烯羧基颗粒，其粒径为220～260nm。

9.根据权利要求8所述的ivc检测试剂，其特征在于，所述聚苯乙烯羧基颗粒的粒径为240nm。

10.一种ivc检测试剂盒，其特征在于，其中含有权利要求7～9任一所述的ivc检测试剂。

技术总结本发明提供了一种人源化IVC抗体及使用其制成的IVC检测试剂和试剂盒，属于分析检测技术领域。本发明使用嵌合IgG抗体方法，进行了鼠单抗人源化改造，改造后的人源化抗体包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区、人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中鼠源重链可变区的碱基序列如SEQ ID No.1所示，鼠源轻链可变区的碱基序列如SEQ ID No.5所示，人源重链恒定区为CH1‑CH2‑CH3的重链恒定区，人源轻链恒定区为CH1的轻链恒定区。使用本发明中的人源化抗体所制成的检测试剂、试剂盒等，与常规技术相比，可显著提高检测特异性，可大幅度降低假阳性检出率。技术研发人员：郝立颖,彭勇,陈吉强,杜兵兵受保护的技术使用者：北京世纪沃德生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/1