一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法

本发明属于生物工程，本发明涉及一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法。

背景技术：

1、肌氨酸氧化酶作为一种酶法诊断肾脏疾病的关键酶之一，在临床上被广泛应用。目前国内应用的肌氨酸氧化酶几乎都是国外进口，费用昂贵且技术垄断，而国内研究的肌氨酸氧化酶由于酶活过低，无法满足临床应用。

2、微生物诱变育种是一种提升菌株产酶酶活的常用手段，常见的诱变方式包括物理诱变、化学诱变以及复合诱变。但现有的复合诱变方法操作繁琐，且酶活影响效果不大。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明提供一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，对蜡样芽孢杆菌q5进行亚硝酸钠-紫外复合诱变，得到正突变效果最佳的突变株，其产肌氨酸氧化酶酶活达到2.98u/ml。

2、本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

3、一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，复合诱变方法为亚硝酸钠-紫外诱变，通过此诱变方法使产酶菌株的酶活达到2.98u/ml。

4、进一步的，诱变条件为紫外诱变120s和亚硝酸钠诱变25min。

5、上述复合诱变方法具体包括以下步骤：

6、(1)制备诱变菌液；

7、(2)对诱变菌液进行亚硝酸钠单一诱变并涂布培养；

8、(3)对亚硝酸钠单一诱变得到的正突变效果最佳的菌落进行紫外诱变。

9、上述菌株为蜡样芽孢杆菌q5，该菌株来源渤海湾海泥中。

10、本发明与现有技术相比的有益效果是：

11、相比于未突变菌株，采用本发明的复合诱变方法使得蜡样芽孢杆菌产肌氨酸氧化酶酶活达到2.98u/ml。

技术特征：

1.一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，其特征是，复合诱变方法为亚硝酸钠-紫外诱变；诱变条件为紫外诱变120s和亚硝酸钠诱变25min；通过此诱变方法使产酶菌株的酶活达到2.98u/ml。

2.如权利要求1所述的一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，其特征是，具体包括以下步骤：

3.如权利要求1所述的一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，其特征是，挑取划线的lb固体平板上长势较好的单菌落，以1％接种量接种于100ml/250ml的lb液体培养基中，在25℃、180rpm的恒温摇床中培养至od600nm值为0.6～0.8；

4.如权利要求-3任一项所述的一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法，其特征是，菌株为蜡样芽孢杆菌q5。

技术总结本发明属于生物工程技术领域，公开了一种提升菌株产低温肌氨酸氧化酶酶活的复合诱变方法。对蜡样芽孢杆菌Q5进行亚硝酸钠‑紫外复合诱变，诱变条件为紫外诱变120s和亚硝酸钠诱变25min。得到正突变效果最佳的突变株，其产肌氨酸氧化酶酶活达到2.98U/mL。技术研发人员：迟雪梅,袁文涛,王聪,于爽,张庆芳,刘春莹,王严,夏水英,郭信志,迟乃玉受保护的技术使用者：大连大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16