一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法及其制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用

本发明涉及抗肿瘤药物领域，特别涉及一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法及其制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用。

背景技术：

1、肝癌是我国第四位常见恶性肿瘤及第二位癌症死亡原因，其死亡率仅次于肺癌。目前肝癌因其发病机制尚未明确，同时癌症中后期采用的传统化疗和放疗方式会对患者正常细胞产生较大毒性及相关严重毒副作用，导致其治愈率及五年生存率普遍较低。宫颈癌的发病率和死亡率居全球女性高发恶性肿瘤的第4位，宫颈癌也是唯一被认为是人类肿瘤中可知病因的恶性肿瘤，目前针对宫颈癌的防控已经有了较为成熟的筛查方案，多数宫颈癌在早期即被诊断，大大提高了患者的生存率，但目前宫颈癌的临床治疗以手术和放疗为主、化疗为辅。而天然产物活性成分具有优先杀伤癌细胞、毒副作用小、不易产生耐药性、调节机体免疫的作用，是探索新型抗肝癌药物研究热点。wnt/β-catenin信号通路在调控细胞凋亡过程中扮演着关键角色。发现能够特异性抑制wnt信号通路、诱导肿瘤细胞凋亡的天然小分子化合物，对于开发靶向性抗癌药物具有重大意义。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明提出一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法及其制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用。

2、本发明的技术方案是这样实现的：一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法，所述化合物由真菌phomopsis asparagi dhs-48制备，该真菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号cctcc no:m2021318，所述四氢呫吨酮二聚体类化合物的结构式如(1)所示：

3、

4、进一步的，上述四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法，包括以下步骤：

5、s1、选取真菌phomopsis asparagi dhs-48为目标菌株，进行发酵培养；

6、s2、将步骤s1通过真菌phomopsis asparagi dhs-48发酵获得的菌丝体浸入乙酸乙酯提取，将提取物浓缩并合并，减压浓缩后得到粗提物；将粗提物用85％-95％v/v甲醇-水混匀，加入石油醚萃取，除去石油醚层，减压浓缩得到浸膏；

7、s3、(1)将步骤s2浸膏与100-200目正向硅胶粉研磨混合，硅胶粉质量和浸膏的质量比为1.5-2.0:1，洗脱液为ch2cl2-meoh按体积比30:1-1:1进行梯度洗脱，减压浓缩，合并类似组分，共得到fr.1-fr.9共9个组分；

8、(2)将组分fr.4经硅胶柱色谱层析梯度洗脱，洗脱液为ch2cl2-etoac按体积比6:1～1:2进行梯度洗脱，减压浓缩，合并类似组分，得到fr.4.1-fr.4.6共6个组分；

9、(3)组分fr.4.1采用体积比为0.8-1.2:0.8-1.2的ch2cl2-meoh作为洗脱液经sephadexlh-20柱分离，减压浓缩，合并类似组分，得到目标产物。

10、进一步的，所述的制备方法，步骤(1)中，所述洗脱梯度为ch2cl2-meoh按体积比30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、3:1、1:1进行梯度洗脱。

11、进一步的，所述的制备方法，步骤(1)中，每个梯度洗脱体积为3.8-4.2l，每0.9-1.1l一接，分别收集洗脱液进行减压浓缩。

12、进一步的，步骤(2)中，所述洗脱梯度为ch2cl2-etoac按体积比6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2进行梯度洗脱。

13、进一步的，步骤(2)中，每个梯度洗脱体积为180-220ml，每40-60ml一接，分别收集洗脱液进行减压浓缩。

14、进一步的，步骤(3)中，ch2cl2-meoh的体积比为1:1。

15、进一步的，s1步骤具体操作：选取真菌phomopsis asparagi dhs-48为目标菌株，在40-60μm丁酸钠条件下进行发酵，用pda培养基在无菌条件下接种菌，在恒温27-29℃下培养26-30d。

16、进一步的，s2步骤具体操作：将步骤s1通过真菌phomopsis asparagi dhs-48发酵获得的菌丝体浸入乙酸乙酯2-4次，每次10-14h，将提取物浓缩并合并，减压浓缩后得到粗提物；将粗提物用85％-95％v/v甲醇-水混匀，加入等体积石油醚萃取4-6次，除去石油醚层，减压浓缩得到浸膏。

17、本发明任一项所述的制备方法制得的四氢呫吨酮二聚体类化合物在制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用。进一步的，所述四氢呫吨酮二聚体类化合物在制备靶向wnt/β-catenin信号通路的抗肝癌和抗宫颈癌药物中的应用。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果是：(1)本发明从真菌phomopsis asparagidhs-48培养发酵物中分离得到一种四氢呫吨酮二聚体类化合物12-deacetylphomoxanthone a(dd-63)，并进一步研究发现该化合物具有显著的抗肿瘤活性，可用于制备靶向wnt/β-catenin信号通路的抗肝癌和抗宫颈癌药物。(2)采用本发明制备方法制备四氢呫吨酮二聚体类化合物12-deacetylphomoxanthone a(dd-63)，具备靶向wnt/β-catenin信号通路的抗肝癌和抗宫颈癌作用，有效提高phomopsis asparagi dhs-48的研究价值以及应用范围。(3)采用本发明制备方法制备四氢呫吨酮二聚体类化合物12-deacetylphomoxanthone a(dd-63)，操作方法简单、易于实施，可有效降低生产成本。

技术特征：

1.一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物由真菌phomopsis asparagi dhs-48制备，该真菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号cctccno:m2021318，所述四氢呫吨酮二聚体类化合物的结构式如(1)所示：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述洗脱梯度为ch2cl2-meoh按体积比30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、3:1、1:1进行梯度洗脱。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，每个梯度洗脱体积为3.8-4.2l，每0.9-1.1l一接，分别收集洗脱液进行减压浓缩。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述洗脱梯度为ch2cl2-etoac按体积比6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2进行梯度洗脱。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，每个梯度洗脱体积为180-220ml，每40-60ml一接，分别收集洗脱液进行减压浓缩。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，ch2cl2-meoh的体积比为1:1。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，s1步骤具体操作：选取真菌phomopsisasparagi dhs-48为目标菌株，在40-60μm丁酸钠条件下进行发酵，用pda培养基在无菌条件下接种菌，在恒温27-29℃下培养26-30d。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，s2步骤具体操作：将步骤s1通过真菌phomopsis asparagi dhs-48发酵获得的菌丝体浸入乙酸乙酯2-4次，每次10-14h，将提取物浓缩并合并，减压浓缩后得到粗提物；将粗提物用85％-95％v/v甲醇-水混匀，加入等体积石油醚萃取4-6次，除去石油醚层，减压浓缩得到浸膏。

10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制得的四氢呫吨酮二聚体类化合物在制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用。

技术总结本发明提供一种四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法及其制备抗肝癌和宫颈癌药物中的应用。本发明四氢呫吨酮二聚体类化合物的制备方法，所述化合物由真菌Phomopsis asparagi DHS‑48制备，该真菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M2021318，所述四氢呫吨酮二聚体类化合物的结构式如(1)所示：本发明进一步研究发现该化合物具备靶向Wnt/β‑catenin信号通路的抗肝癌和抗宫颈癌作用，有效提高Phomopsis asparagi DHS‑48的研究价值以及应用范围。技术研发人员：徐静,陈丹丹,冯婷受保护的技术使用者：海南大学技术研发日：技术公布日：2024/8/20