留端胶原蛋白制备方法及留端胶原蛋白与流程

本申请涉及胶原蛋白制备，特别是涉及一种留端胶原蛋白的制备方法和留端胶原蛋白。

背景技术：

1、动物来源的胶原蛋白已广泛应用于医疗健康领域，在应用初期，由于胶原蛋白的高度保守性，人们一直认为胶原蛋白几乎没有免疫原性，但随着研究和应用的不断深入，胶原蛋白仍然表现出了一定的免疫原性。胶原蛋白的端肽(telopeptide)区与螺旋微区(domain)相比，端肽区的免疫原性较强。因此，目前大部分商业化的胶原蛋白都去除了端肽，以此来降低其免疫原性，尤其是溶解性胶原。此外国内专利所报道的大多数胶原蛋白也是采用去端肽法制备。但是从材料学角度来讲，端肽保留具有重要的意义，既可保存材料更完整的结构以及更多的交联位点，又为胶原蛋白的下游应用提供更多可能。研究表明端肽在纤维形成、热稳定性、三螺旋结构稳定性、力学性能和细胞识别粘附方面都发挥着重要作用。因此，如何制备留端胶原蛋白(保留了n端肽和c端肽的)成为当下亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本申请主要解决的技术问题是提供一种胶原蛋白的制备方法及胶原蛋白，能够制备得到端肽保留率高的胶原蛋白。

2、为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是提供一种留端胶原蛋白的制备方法，包括：制备胶原蛋白悬浆；利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理，以去除非胶原杂蛋白，得到胶原蛋白提取物，所述蛋白酶对非胶原杂蛋白的酶解效率高于对胶原蛋白的端肽的酶解效率；将胶原蛋白提取物进行溶解、均质得到所述留端胶原蛋白。

3、在一些实施例中，所述利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理，以去除非胶原杂蛋白，得到胶原蛋白提取物包括：在所述胶原蛋白悬浆中加入中性蛋白酶和/或碱性蛋白酶，得到第一混合物，调节所述第一混合物的ph值至所述中性蛋白酶和/或碱性蛋白酶的最适ph值范围内；待所述第一混合物在第一预定温度反应第一预定时长，得到第二混合物；将所述第二混合物进行离心过滤和水洗，得到所述胶原蛋白提取物。

4、在一些实施例中，当所述蛋白酶包括所述中性蛋白酶时，所述中性蛋白酶作用的最适ph值范围为6-8，当所述蛋白酶包括所述碱性蛋白酶时，所述碱性蛋白酶作用的最适ph值范围为7-10；和/或，所述第一预定温度为4℃-20℃；和/或，所述第一预定时长为4h-8h。

5、在一些实施例中，在所述胶原蛋白悬浆中加入中性蛋白酶和/或碱性蛋白酶时，所述制备方法还包括：在所述胶原蛋白悬浆中加入酶稳定剂。

6、在一些实施例中，所述酶稳定剂包括丙二醇、聚乙二醇、蔗糖和甘露醇中的至少一种。

7、在一些实施例中，所述蛋白酶包括地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶、米曲霉碱性蛋白酶，枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶、灰色链霉菌碱性蛋白酶和镰刀菌碱性蛋白酶中的一种或多种。

8、在一些实施例中，在所述利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理之前，所述制备方法还包括：在所述胶原蛋白悬浆内加入胶原蛋白端基保护剂。

9、在一些实施例中，所述胶原蛋白端基保护剂包括高度不饱和脂肪酸和氨基酸中的至少一种。

10、在一些实施例中，所述将胶原蛋白提取物进行溶解、均质得到所述留端胶原蛋白包括：在所述胶原蛋白提取物内加入酸性溶液，得到酸溶解液；将所述酸溶解液在高压作用下进行均质，得到所述留端胶原蛋白。

11、在一些实施例中，所述酸性溶液包括醋酸、盐酸、硫酸或柠檬酸中的至少一种。

12、在一些实施例中，所述将胶原蛋白提取物进行溶解、均质，得到所述留端胶原蛋白还包括：将留端胶原蛋白进行冷冻干燥得到干态留端胶原蛋白。

13、在一些实施例中，所述制备胶原蛋白悬浆包括：筛选包含胶原蛋白的动物组织；将所述动物组织细化成子组织；将所述子组织依次进行有机试剂处理、盐溶液处理、酸酶混合液处理和碱溶液处理，得到预处理产物；将所述预处理产物进行匀浆研磨，得到所述胶原蛋白悬浆。

14、在一些实施例中，将所述预处理产物进行匀浆研磨，得到所述胶原蛋白悬浆包括：将所述预处理产物转移至匀浆研磨设备中，加入碱性溶液，并对所述预处理产物进行均质研磨处理至粒径为20-400μm，得到胶原蛋白悬浆。

15、本申请采用的另一个技术方案是提供一种留端胶原蛋白。留端胶原蛋白由如上所述的制备方法制成。

16、在一些实施例中，所述留端胶原蛋白的端肽保留率大于或等于80％。

17、本申请实施例提供的留端胶原蛋白的制备方法通过采用蛋白酶酶解胶原蛋白悬浆，选用的蛋白酶对非胶原杂蛋白的酶解效率高于对胶原蛋白的端肽的酶解效率，去除非胶原杂蛋白的同时可减少对端肽的破坏，实现去除非胶原杂蛋白等杂质同时保留端肽。所制备的留端胶原蛋白的三螺旋结构完整、非胶原杂质少、端肽保留率高，具有广泛的应用前景。本申请的留端胶原蛋白的制备方法步骤简单、易操作，酶解反应可控，酶的来源可获取，反应条件常规化的生产设备即可达到并实现。本申请的留端胶原蛋白的制备方法可实现产业化制备留端胶原蛋白，具有巨大的经济价值。

技术特征：

1.一种留端胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理，以去除非胶原杂蛋白，得到胶原蛋白提取物包括：

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，当所述蛋白酶包括所述中性蛋白酶时，所述中性蛋白酶作用的最适ph值范围为6-8，当所述蛋白酶包括所述碱性蛋白酶时，所述碱性蛋白酶作用的最适ph值范围为7-10；和/或，所述第一预定温度为4℃-20℃；和/或，所述第一预定时长为4h-8h。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在所述胶原蛋白悬浆中加入中性蛋白酶和/或碱性蛋白酶时，所述制备方法还包括：

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酶稳定剂包括丙二醇、聚乙二醇、蔗糖和甘露醇中的至少一种。

6.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶包括地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶、米曲霉碱性蛋白酶，枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶、灰色链霉菌碱性蛋白酶和镰刀菌碱性蛋白酶中的一种或多种。

7.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，在所述利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理之前，所述制备方法还包括：

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白端基保护剂包括高度不饱和脂肪酸和氨基酸中的至少一种。

9.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述将胶原蛋白提取物进行溶解、均质得到所述留端胶原蛋白包括：

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述酸性溶液包括醋酸、盐酸、硫酸或柠檬酸中的至少一种。

11.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述将胶原蛋白提取物进行溶解、均质，得到所述留端胶原蛋白还包括：

12.如权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备胶原蛋白悬浆包括：

13.如权利要求12所述的制备方法，其特征在于，将所述预处理产物进行匀浆研磨，得到所述胶原蛋白悬浆包括：

14.一种留端胶原蛋白，其特征在于，所述留端胶原蛋白由权利要求1至13中任一项所述的制备方法制成。

15.根据权利要求14所述的留端胶原蛋白，其特征在于，所述留端胶原蛋白的端肽保留率大于或等于80％。

技术总结本申请实施例涉及胶原蛋白制备技术领域，公开了一种留端胶原蛋白的制备方法和留端胶原蛋白。留端胶原蛋白的制备方法包括：制备胶原蛋白悬浆；利用蛋白酶对所述胶原蛋白悬浆进行酶处理，以去除非胶原杂蛋白，得到胶原蛋白提取物，所述蛋白酶对非胶原杂蛋白的酶解效率高于对胶原蛋白的端肽的酶解效率；将胶原蛋白提取物进行溶解、均质得到所述留端胶原蛋白。通过上述方式，制备锁定的留端胶原蛋白的三螺旋结构完整、非胶原杂质少、纯度高、端肽保留率高，可达80％以上。技术研发人员：邓天发,周兆通受保护的技术使用者：惠州华阳医疗器械有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/20