hsa_circ_0004339标志物在制备肺结核诊断的产品中的应用的制作方法

本技术涉及生物，更具体地说，它涉及一种hsa_circ_0004339标志物在制备肺结核诊断的产品中的应用。

背景技术：

1、肺结核是结核分枝杆菌(mtb)感染引起的慢性传染性疾病，是世界上最严重的传染病之一。尽管肺结核的检测技术和治疗方法已取得重大进展，但仍缺少早期筛查和针对性治疗的解决方案。因此亟需发现新的生物标志物，以建立灵敏度高效的新诊断方法用以诊断肺结核病。

2、环状rna(circrna)是真核生物中新近发现的一类非编码rna，通常由外显子组成，具有由前体mrna反向剪接形成的环状构型，没有5‘端帽子结构和3‘端多聚腺苷酸尾巴，并以共价键形成单链环形结构的非编码rna分子。因其特殊的环状结构，circrna对核酸外切酶具有较强的抗性，导致其半衰期比线性rna长。随着二代测序技术的快速发展，人们鉴定了数千种不同基因产生的circrna，它们已被证实是参与多种生理和病理过程的关键调控因子。与其他类型的rna相比，circrna含量丰富，稳定性更强，不易被rna核酸外切酶降解、种类丰富、结构稳定、序列保守、具有细胞或组织特异性表达以及可作为基因表达的主要调节因子。因此，circrna能在样品处理过程中进行选择性富集，更适合作为分子诊断生物标志物的候选分子和更有效的治疗靶点。circrna可以通过作为mirna海绵、与mrna结合蛋白(rbp)结合和直接编码蛋白质等功能在多种呼吸系统疾病和感染性疾病中发挥调控作用。而目前关于circrna与结核病的相关研究还较少，因此，寻找与结核病相关的circrna对于结核病的早期诊断和治疗具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种circrna标志物在制备肺结核诊断的产品中的应用。发明人研究发现，hsa_circ_0004339环状rna基因，在肺结核患者的样本中表达水平显著降低，且能很好的预测肺结核的发生，由此提示该环状rna基因可作为标志物，并可进一步的用于肺结核的诊断中。

2、第一方面，本技术提供一种用于肺结核诊断的circrna标志物，该circrna标志物为核苷酸序列如seq id no.1所示的hsa_circ_0004339。

3、hsa_circ_0004339位于基因donson(hsa_circ_0004339由3,4,5,6,7,8六个外显子组成，全长948nt)，进行扩增后通过一代sanger测序后确认hsa_circ_0004339的成环序列，hsa_circ_0004339的全长为948个碱基，全长序列为：

4、acttcacatgtatcattctccgagcctgatattccgtcctcaaaaagtactgagttacctgtggactggagtattaaaacgcgactccttttcacctcttctcaaccctttacctgggcagatcatttgaaagcacaggaagaagctcaaggtcttgtccagcattgtagggcaacagaagttactttgcctaaaagtatacaggatcccaaactctcctctgagctccgttgtaccttccagcagagccttatctattggctccaccctgctttgtcttggctaccactgttccctcgtattggagctgatagaaaaatggctggaaagacaagtccttggtcaaatgatgcaaccctgcagcatgttttaatgagtgactggtctgtgagctttacttctctatataatttgctgaagacaaaactttgcccctatttctacgtttgtacctatcagtttactgtcctgttccgagcagcaggattagctggaagtgacttaatcacagctctcatatctccaacaactcgaggtttaagagaagctatgagaaatgaaggtattgaattttctctgcctttaataaaagaaagtggccataagaaggagacagcatctggaacaagcttgggatatggggaggagcaagccatcagtgatgaggatgaagaggaaagtttttcctggctggaagagatgggtgtgcaagataaaattaaaaagccagacatactttctatcaagctgcgtaaagagaaacatgaagtacaaatggatcacagacctgaatctgttgtgttggtaaaaggaatcaacacctttacattgctcaattttttgattaactctaagagtttagttgctacctcaggtccacaggcaggacttcctccaaccctcttgtcccctgttgctttccgaggtgccacaatgcaaatgcttaag(seq id no.1)。

5、第二方面，本技术提供一种上述circrna标志物的引物组，包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。

6、seq id no.2：cttgtcccctgttgctttcc；

7、seq id no.3：gccctacaatgctggacaag。

8、进一步地，还包括内参gapdh的正向引物和反向引物，内参gapdh的正向引物如seqid no.4所示，内参gapdh的反向引物的核苷酸序列如seq id no.5所示。

9、seq id no.4：ggagcgagatccctccaaaat；

10、seq id no.5：ggctgttgtcatacttctcatgg。

11、第三方面，本技术提供circrna标志物在制备肺结核诊断的产品中的应用，所述circrna标志物为hsa_circ_0004339，核苷酸序列如seq id no.1所示。

12、进一步地，所述产品包括芯片、试剂盒或者核酸膜条。

13、第四方面，本技术提供用于检测circrna标志物的试剂在制备用于诊断肺结核的产品中的应用，所述circrna标志物为hsa_circ_0004339，核苷酸序列如seq id no.1所示。

14、进一步地，所述试剂包括对circrna标志物具有检测特异性的探针、基因芯片或检测引物组。

15、进一步地，所述检测引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。

16、seq id no.2：agccaaagaatgccctctct；

17、seq id no.3：tccaccttcccagcttgatt。

18、进一步地，所述试剂还包括rna提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量pcr试剂。

19、进一步地，所述产品包括芯片、试剂盒或者核酸膜条。

20、第五方面，本技术提供一种用于诊断肺结核的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测circrna标志物的特异性引物组，所述circrna标志物为hsa_circ_0004339，核苷酸序列如seq id no.1所示，所述检测引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。

21、进一步地，所述试剂盒还包括rna提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量pcr试剂。

22、综上所述，本技术具有以下有益效果：

23、发明人研究发现，环状rnahsa_circ_0004339在肺结核患者与健康人血浆中的表达有显著不同，hsa_circ_0004339在肺结核患者的血浆中表达显著降低，由此说明，hsa_circ_0004339可作为肺结核诊断标志物，其在肺结核血清中显著升高，且能很好的预测肺结核的发生。