一种鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽及其在间接ELISA检测中的应用的制作方法

本发明属于疫苗抗原制备，具体涉及一种鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽及其在间接elisa检测中的应用。

背景技术：

1、鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis，ib)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus，ibv)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性呼吸道疾病。各种日龄、不同品种的鸡均易感染鸡传染性支气管炎，尤以1～4周龄雏鸡最为严重，死亡率高40％～90％。虽然广泛使用疫苗预防，但ib并未得到有效控制，而且变异株或新的基因型不断出现。目前，ib已在全世界大部分地区发生和流行，但不同地区流行的基因型或流行毒株都存在差异。截至目前，我国最少存在3个基因型，分别为gi-19、gvi和gvii。其中，gi-19型即qx型，最早发现于我国，是国内目前流行的最主要ibv基因型，给我国养禽业造成了巨大损失。

2、ibv是基因组约为27.6kb的单股正链rna病毒，属于γ冠状病毒属。病毒颗粒类似球形，直径为82nm；病毒粒子由纤突(s)蛋白、膜(m)糖蛋白、核衣壳(n)蛋白和小膜(e)蛋白4种结构蛋白组成。

3、目前用于ib抗体检测的的实验室方法主要有酶联免疫吸附试验(elisa)、琼脂扩散沉淀试验(agp)和病毒中和试验(vn)等方法。这3种检测方法均有较好的特异性，但agp灵敏度较差；中和试验操作复杂、费时且需要较高的实验室条件；elisa方法由于其速度快、对实验条件要求不高、不需无菌操作、短时间内能检测大量样品，适用于实验室血清诊断以及大规模的疫病调查。

技术实现思路

1、本发明提供一种鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽及其在间接elisa检测中的应用，所制备的抗原表位融合肽即可以用于制备抗体，也可以作为包被抗原用于制备间接elisa检测制品。

2、本发明所提供的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，为抗原表位融合肽s1-i，其氨基酸序列为seq id no:2；其对应的一种编码核苷酸的序列为seq id no:1；

3、本发明所提供的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，为抗原表位融合肽s1-ii，其氨基酸序列为seq id no:4；其对应的一种编码核苷酸的序列为seq id no:3；

4、参照大肠杆菌密码子偏爱表，进行密码子优化，优化后的s1-i的核苷酸序列为seqid no:5，而s1-ii的核苷酸序列为seq id no:6，

5、本发明还提供一种重组表达载体，所述的重组表达载体中插入有用于编码所述的抗原表位融合肽的核酸片段；

6、本发明再一个方面还提供一种原核表达宿主菌，所述的原核表达宿主菌中携带有上述的重组表达载体；

7、本发明还提供所述的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽作为包被抗原的应用；

8、作为实施例的一种具体记载，所述的应用是用于制备间接elisa检测制品；

9、本发明另一个方面还提供一种间接elisa检测制品，其中的包被抗原为上述的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽；

10、更进一步的，所述的抗原包被浓度为0.5-1μg/ml。

11、本发明再一个方面还提供一种鸡传染性支气管炎病毒的间接elisa检测方法，是使用上述的间接elisa检测制品进行检测，其中s1-i抗原包被浓度为1μg/ml，血清稀释度为1：1000，二抗稀释度为1：10000，5％脱脂乳为最佳封闭液。

12、以重组蛋白s1-ii为包被抗原，抗原包被浓度为0.5μg/ml，血清稀释度为1：1000，二抗稀释度为1：5000，5％脱脂乳为最佳封闭液。

13、本发明通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒株的s1蛋白进行抗原表位分析后，将多个抗原表位融合得到抗原表位融合肽。特异性试验表明本发明制备的抗原表位融合肽为包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，仅与对gi-19型ibv阳性血清产生良好反应，即作为检测抗原具有良好的血清型特异性，而与非gi-19型ibv抗体交叉反应小。

技术特征：

1.一种鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，其特征在于，所述的抗原表位融合肽的一种氨基酸序列为seq id no:2；其对应的一种编码核苷酸的序列为seq id no:1。

2.如权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，其特征在于，所述的抗原表位融合肽对应的编码核苷酸的序列为seq id no:5。

3.如权利要求1所述的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，其特征在于，所述的抗原表位融合肽的氨基酸序列为seq id no:4；其对应的一种编码核苷酸的序列为seq idno:3。

4.如权利要求3所述的鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽，其特征在于，所述的抗原表位融合肽对应的编码核苷酸的序列为seq id no:6。

5.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体中插入有用于编码权利要求1或权利要求3所述的抗原表位融合肽的核酸片段。

6.一种原核表达宿主菌，其特征在于，所述的原核表达宿主菌中携带有权利要求5所述的重组表达载体。

7.权利要求1或权利要求3所述的抗原表位融合肽作为包被抗原在制备间接elisa检测制品中的应用。

8.一种间接elisa检测制品，其特征在于，所述的间接elisa检测制品中的包被抗原为权利要求1或权利要求3所述的抗原表位融合肽。

9.如权利要求8所述的间接elisa检测制品，其特征在于，所述的抗原包被浓度为0.5-1μg/ml。

10.一种鸡传染性支气管炎病毒的间接elisa检测方法，其特征在于，是使用权利要求8所述的间接elisa检测制品进行检测。

技术总结本发明提供一种鸡传染性支气管炎病毒抗原表位融合肽及其在间接ELISA检测中的应用，所制备的抗原表位融合肽即可以用于制备抗体，也可以作为包被抗原用于制备间接ELISA检测制品。所提供的抗原表位融合肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4。本发明通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒株的S1蛋白进行抗原表位分析后，将多个抗原表位融合得到抗原表位融合肽。特异性试验表明本发明制备的抗原表位融合肽为包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，仅与对GI‑19型IBV阳性血清产生良好反应，即作为检测抗原具有良好的血清型特异性，而与非GI‑19型IBV抗体交叉反应小。技术研发人员：王楷宬,潘俊慧,周凯钰太,王素春,魏世萌,祁倩,隋金钰受保护的技术使用者：中国动物卫生与流行病学中心技术研发日：技术公布日：2024/8/27