一种大蒜外泌体样囊泡及其提取方法和应用

本发明涉及天然生物制剂提取制备技术及应用领域，具体涉及一种大蒜外泌体样囊泡及其提取方法和应用。

背景技术：

1、在牙周炎的再生治疗方式中，抗炎治疗扮演了重要角色，然而，目前治疗牙周炎局部应用的药物单一，且主要以抗生素为主，通过抗菌作用减少局部组织炎症的严重程度，但是，这类药物本身并没有直接抗炎？以及促进组织再生的作用，且可能导致耐药性的产生。因此，亟需研发一种新的具有抗炎作用且促进组织再生的药物或生物制剂，应用于牙周炎的治疗。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种大蒜外泌体样囊泡及其提取方法和应用，以解决现有技术中缺乏非抗生素类抗炎生物制剂的问题。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种大蒜外泌体样囊泡的提取方法，包括以下步骤：

3、(1)将白皮大蒜分瓣去皮洗净，加入pbs缓冲液，进行粉碎，过滤，得到滤液；

4、(2)将步骤(1)制得的滤液第一次离心，弃掉沉淀，得到离心液；

5、(3)将步骤(2)制得的离心液第二次离心，得到的沉淀使用pbs缓冲液重悬，重复第二次离心和重悬操作，得到提取溶液；

6、(4)将步骤(3)制得的提取溶液过滤，制得大蒜外泌体样囊泡。

7、本发明的有益效果为：本发明仅通过物理的方式提取大蒜外泌体样囊泡，未引进任何化学试剂，最大程度的保证了大蒜外泌体样囊泡天然无毒害的特性；相比其他提取囊泡的方法，本方法在流程上进行了优化，利用过滤网代替了复杂的梯度离心，只需要在两种离心力的作用下，即可进行提取，这极大减少了操作的复杂性和减少了时间花费；最后采用过滤对大蒜外泌体样囊泡进行提纯。

8、在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

9、进一步，步骤(1)中，洗净后白皮大蒜和pbs缓冲液的质量比为1：1.8-2.5。

10、进一步，步骤(1)中，洗净后白皮大蒜和pbs缓冲液的质量比为1：2。

11、进一步，步骤(1)中，白皮大蒜产地为江苏省邳州市。

12、进一步，步骤(1)中，pbs缓冲液的ph值为7.2-7.4。

13、进一步，步骤(1)中，采用榨汁机进行粉碎。

14、进一步，步骤(1)中，采用80-150目滤网进行过滤。

15、进一步，步骤(1)中，采用100目滤网进行过滤。

16、进一步，步骤(2)中，于3-5℃和9000-12000rcf条件下进行第一次离心25-35min。

17、采用上述进一步技术方案的有益效果为：采用上述的高速离心能够最大程度去除较大杂质。

18、进一步，步骤(2)中，于4℃和10000rcf条件下进行第一次离心30min。

19、进一步，步骤(2)中，得到离心液后重复操作步骤(2)2-3次。

20、采用上述进一步技术方案的有益效果为：多次重复离心能够有效去除沉淀。

21、进一步，步骤(3)中，于3-5℃和90000-120000rcf条件下进行第二次离心60-80min。

22、采用上述进一步技术方案的有益效果为：采用上述超速离心，不但能够得到外泌体样囊泡，还能减少对外泌体样囊泡的破坏。

23、进一步，步骤(3)中，于4℃和100000rcf条件下进行第二次离心70min。

24、进一步，步骤(3)中，重悬时，沉淀和pbs缓冲液的体积比为1：10。

25、进一步，步骤(3)中，pbs缓冲液的ph值为7.2-7.4。

26、进一步，步骤(4)中，采用滤径为0.2-0.3μm的无菌过滤器进行过滤操作。

27、进一步，步骤(4)中，采用滤径为0.22μm的无菌过滤器进行过滤操作。

28、采用上述进一步技术方案的有益效果为：不仅可以过滤细菌，达到滤液除菌的效果，也可以进一步过滤杂质，对大蒜外泌体样囊泡进行提纯。

29、本发明还提供上述大蒜外泌体样囊泡的提取方法制得的大蒜外泌体样囊泡。

30、本发明还提供上述大蒜外泌体样囊泡在制备牙周炎辅助治疗生物制剂方面的应用。

31、本发明还提供一种牙周炎辅助治疗生物制剂，包括上述大蒜外泌体样囊泡。

32、本发明还提供上述大蒜外泌体样囊泡在制备用于牙周炎治疗的药物方面的应用。

33、本发明还提供一种用于牙周炎治疗的药物，包括上述大蒜外泌体样囊泡。

34、本发明具有以下有益效果：外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，如今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡，多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。本发明从天然的大蒜中提取出外泌体样囊泡，期间未添加任何其他化学试剂，纯天然绿色无毒害，本发明的大蒜外泌体样囊泡可以明显直接抑制牙周炎症，减少骨吸收，可作为应用于牙周炎的治疗及牙周再生领域的生物制剂。

技术特征：

1.一种大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，洗净后白皮大蒜和pbs缓冲液的质量比为1：1.8-2.5。

3.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，采用榨汁机进行粉碎。

4.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，采用80-150目滤网进行过滤。

5.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，于3-5℃和9000-12000rcf条件下进行第一次离心25-35min。

6.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，于3-5℃和90000-120000rcf条件下进行第二次离心60-80min。

7.根据权利要求1所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，采用滤径为0.2-0.3μm的无菌过滤器进行过滤操作。

8.权利要求1-7任一项所述的大蒜外泌体样囊泡的提取方法制得的大蒜外泌体样囊泡。

9.权利要求8所述的大蒜外泌体样囊泡在制备牙周炎辅助治疗生物制剂方面的应用。

10.一种牙周炎辅助治疗生物制剂，其特征在于，包括权利要求8所述的大蒜外泌体样囊泡。

技术总结本发明公开了一种大蒜外泌体样囊泡及其提取方法和应用，涉及天然植物提取制备技术领域。该方法包括以下步骤：将白皮大蒜分瓣去皮洗净，进行粉碎，得到滤液；离心；取上清液再次离心，将得到的沉淀物使用PBS缓冲液重悬，得到提取溶液；过滤，制得大蒜外泌体样囊泡。本发明从天然的大蒜中提取出外泌体样囊泡，其间未添加任何其他化学试剂，纯天然绿色，本发明的大蒜外泌体样囊泡可以明显直接抑制牙周炎症，减少骨吸收，可作为临床辅助牙周组织再生的生物制剂。本发明解决了现有技术中缺乏非抗生素类抗炎生物制剂以及辅助促进组织再生作用手段的问题。技术研发人员：栾庆先,于晨浩,曹沛,于晓彤,蔡宇,张勇受保护的技术使用者：北京大学口腔医学院技术研发日：技术公布日：2024/9/2