一种具有降血糖活性的橄榄多酚及其提取方法与应用

本发明涉及橄榄多酚，具体涉及一种具有降血糖活性的橄榄多酚及其提取方法与应用；属于功能食品因子制备。

背景技术：

1、橄榄[canarium album(lour.)raeusch]，是橄榄科橄榄属乔木植物，是著名的热带、亚热带特产果树，又名青果、白榄、青榄、甘榄，英文名为chinese white olive，其小叶革质，椭圆状披针形，有短柄；花朵小，两性或杂性，花萼为杯状，花瓣为白色或绿白色，花盘明显；果实为卵状纺锤形。花期5-7月，果期8-11月。橄榄因其果实尚呈青绿色时即可供鲜食而得名。橄榄原产中国南方，是著名的亚热带特产果树。

2、橄榄含有丰富的多酚类、黄酮类和三萜类等功能性成分，具有保肝护肝、抗菌消炎、调节血脂、降血糖、抗氧化、增强机体免疫、抗肿瘤、抗病毒和助消化等功效，是药食同源食品。目前，橄榄主要是一些传统的潮州橄榄制品，橄榄的降血糖功能性相关研究也较少。因此对于橄榄的精加工，开发功能性食品，对于橄榄资源高值化利用具有重要意义。

3、多酚类化合物(polyphenolics)是一类含有多个羟基结构的酚类化合物的总称，也是植物次级代谢产物之一，具有多种生理活性，素有“第七营养素”之称。近年来，多酚类化合物因其含有多羟基结构，所以其具有抑菌、抗氧化、抗癌抗炎和抗血栓形成等多种生物活性，对某些疾病具有预防及缓解作用，已经引起了人们的广泛关注。目前已从橄榄中鉴定到多种多酚类物质，主要为没食子酸、原儿茶酸、香草酸等，据报道这些成分具有显著的生物活性，例如抗氧化活性、降血糖活性和抗炎活性，具有潜在的食药两用价值和广大的应用前景。目前，对橄榄多酚的成分、生物活性的相关研究仍较少，因此，采用乙醇超声提取法将橄榄的多酚成分提取，研究橄榄多酚的成分和应用，对于橄榄的开发与应用具有重要意义。

4、中国发明专利申请cn104490977a公开了一种橄榄叶多酚的提取方法，包括以下步骤：1)将橄榄叶粉碎，按料液比为1g：10～30ml的比例加入乙醇振荡提取，分离上清液；2)将上清液过膜过滤装置进行过滤，得到澄清液；3)将澄清液上大孔树脂柱，上样流速为0.4～0.6bv/h，上大孔树脂柱，水洗柱，然后用体积浓度为65～85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得橄榄叶多酚。该技术橄榄叶多酚只是简单的乙醇提取，纯化前得到的粗多酚提取率不高。

5、中国发明专利cn102935101b公开了一种橄榄叶多酚的提取方法，以水为溶剂，采用微波提取得到橄榄叶多酚粗提物，然后通过大孔树脂分离，减压浓缩、真空冻干后得到橄榄叶多酚，微波提取工艺为每隔20-60s提高一次微波功率。该方法橄榄叶多酚以水为溶剂进行提取，而多酚更容易溶于甲醇或者乙醇，该技术提取率有待提高。

6、中国发明专利申请cn116271951a公开了一种超声波和中强度电场联用处理提高橄榄果渣中多酚提取率的方法：将橄榄果渣下烘干至恒重，碾磨粉碎，得到橄榄果渣粉；向过筛后的橄榄果渣粉加入乙醇溶液，通过超声波和中强度电场联用处理，提取得到橄榄果渣粉中多酚。该技术超声波辅助提取的基本原理利用超声波产生的强烈振动、空穴化效应、粉碎等作用使细胞结构破坏，从而使植物体内的有效成分大量溶出；但橄榄果渣原料比橄榄整个果实里面的多酚含量和种类低，导致提取率以及降血糖相关的活性成分也相对较少。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术存在的问题，提供一种具有降血糖活性的橄榄多酚及其提取方法，所得橄榄多酚主要成分包括没食子酸、短叶苏木酚酸、原儿茶酸、香草酸、苯甲酸降血糖活性物质，以质量百分比计，没食子酸和短叶苏木酚酸分别占38.7-45％和31-37％，提取率达到15.78％-18.23％。

2、本发明另一目的在于提供所述具有降血糖功效的橄榄多酚在制备降血糖药物中的应用。

3、为了实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：

4、一种具有降血糖功效的橄榄多酚的提取方法，包括以下步骤：

5、1)将橄榄果实经过压榨机破碎挤压得到橄榄汁；将橄榄汁冷冻后冻干得橄榄果粉；

6、2)将橄榄果粉与乙醇溶液混合，温度为20-40℃，搅拌均匀；

7、3)采用超声波辅助提取；离心10-20min，再将离心后所得液体使用均质机在1000-12000rpm转速下均质1-3min，重复均质1-3次，将均质后的液体抽滤得到提取液；

8、4)将提取液转移进行真空旋蒸，得橄榄多酚浓缩液；

9、5)将橄榄多酚浓缩液冷冻后行冻干，得橄榄多酚冻干粉。

10、为进一步实现本发明目的，优选地，步骤1)中，所述的橄榄汁是橄榄果带核破碎挤压所得。

11、优选地，步骤1)中，所述的橄榄汁冷冻后冻干是将橄榄汁放置-20℃－-80℃冰箱冷冻24h-48h后，然后在冻干机冻干24h-48h。

12、优选地，步骤2)中，按体积百分比计，所述的乙醇的浓度为60％-80％；以克和毫升分别为质量和体积单位，橄榄果粉与乙醇的质量体积比为1：10-1：30。

13、优选地，步骤3)中，所述的超声波的功率为80-200w，超声波处理的时间为0.5-2h。

14、优选地，步骤3)中，所述的离心10-20min的转速为4000-8000rpm。

15、优选地，步骤3)中，所述的真空旋蒸的转速为60-100转/分，温度为40-45℃。

16、优选地，步骤3)中，所述的冷冻的温度为-20℃-80℃；所述的冻干的温度为-60℃－-80℃，时间为24h-48h。

17、上述的提取方法得到的具有降血糖功效的橄榄多酚，主要成分包括没食子酸、短叶苏木酚酸、原儿茶酸、香草酸、苯甲酸降血糖活性物质，以质量百分比计，没食子酸和短叶苏木酚酸分别占38.7-45％和31-37％；所述橄榄多酚ic50值为90.26±0.03。

18、所述的具有降血糖功效的橄榄多酚在制备降血糖药物中的应用。

19、与现有技术相比，本发明具有如下效果：

20、1、本发明超声波和均质措施相互配合，其中超声波可以破坏植物组织，将营养成分流出，而均质可以温和地保护活性成分的同时，使颗粒更小，有利于提取，不仅降低了成本，提高了效率减少了反应的时间，最重要的是减少了多酚的氧化，比单独使用超声辅助提取法所用的时间少，最终使降血糖有效成分大大增加。如通过测试，本发明提取方法得到的具有降血糖功效的橄榄多酚，主要成分包括没食子酸、短叶苏木酚酸、原儿茶酸、香草酸、苯甲酸降血糖活性物质，以质量百分比计，没食子酸和短叶苏木酚酸分别占38.7-45％和31-37％，具有比阿卡波糖更强的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性，可以显著降低血糖。

21、2、本发明方法制备的橄榄多酚，主要含没食子酸、短叶苏木酚酸、原儿茶酸、香草酸等高活性的降血糖活性分子。体外降糖活性研究表明，橄榄多酚具有很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性和α-淀粉酶抑制活性，其抑制活性显著强于阿卡波糖，分别可达到19.7倍和6.23倍以上,可用于开发制备酶抑制剂。

22、3、本发明方法制备的橄榄多酚，能够有效地改善肥胖糖尿病模型小鼠高血糖症，降低空腹血糖水平，中高剂量组(900mg/kg和1800mg/kg)的血糖浓度分别下降了27.88％和36.06％，改善了糖耐量，降低胰岛素抵抗，并且呈剂量-效应关系，可应用于制备具有降糖功效的功能性食品和药物。

23、4、本发明方法采用乙醇和均质等提取方法，相比于传统有机试剂提取法，先将橄榄冻干有利于除去水分，对多酚进行富集，同时采用超声和均质等提取显著提升了多酚的提取率。

24、5、本发明提取方法提取得到的具有显著降血糖活性的橄榄多酚提取物，提取率为15.78％-18.23％，明显高于现有技术。